SPOP促进SETD2蛋白的降解并增强肾癌细胞的体外成瘤与增殖能力

目的:新近发现E3泛素化连接酶的成员之一SPOP在肾癌中作用关键,我们前期的研究表明SPOP在肾癌中表达上调且通过活化β-Catenin的活性来促进肾癌细胞的侵袭与转移。本研究继续研究SPOP在肾癌成瘤与增殖中的作用,并探索其潜在的分子机制。方法:siRNA靶向沉默肾癌细胞内SPOP的表达后,采用克隆形成实验及MTT实验检测细胞的体外成瘤与增殖能力的变化;运用realtime-PCR及western blot技术探索SPOP在肾癌细胞内发挥生物学功能的潜在靶分子;采用免疫组织化学方法检测SPOP与其靶分子SETD2在人肾癌组织中的表达情况,并行相关性分析。结果:SPOP siRNA显著减低肾癌细胞的体外成瘤及增殖能力;SPOP的变化不影响肾癌细胞内SETD2 mRNA的表达,但当采用蛋白合成抑制剂cycloheximide预先阻断细胞内SETD2蛋白的合成后,SPOP siRNA能明显延缓SETD2蛋白的降解。进一步检测人肾癌组织标本中SPOP与SETD2的表达结果证实,SPOP与SETD2蛋白的表达呈显著的负相关(r=-0.41,P<0.05)。结论:SPOP能增强肾癌细胞的体外成瘤与增殖能力,其潜在的机制可能为促进抑癌蛋白SETD2的降解。

β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化中的作用及相关机制

目的:探讨β-catenin在膀胱癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用以及相关分子机制。方法:利用siRNA靶向沉默膀胱癌细胞系T24细胞的β-catenin基因,并利用Real-time quantitative PCR和Western blot实验验证siRNA敲减效率。通过Transwell实验检测β-catenin敲减后T24细胞的侵袭能力,进一步使用Real-time quantitative PCR和Western blot实验检测β-catenin敲减后T24细胞的EMT相关标志物的变化。最后,通过下载TCGA数据库,并分析β-catenin与EMT相关标志物的相关性。结果:我们成功在mRNA和蛋白水平上沉默了β-catenin。通过Transwell实验发现,与对照组相比,β-catenin敲减组细胞的侵袭能力下调。与对照组相比,β-catenin敲减组的Slug蛋白、Vimentin蛋白和mRNA下调,E-cadherin蛋白和mRNA上调。通过分析TCGA数据库发现,β-catenin与Slug(r=0.183 5,P=0.000 2)和Vimentin(r=0.190 3,P=0.000 1)均呈正相关。结论:β-catenin通过调控Slug的表达从而调控膀胱癌细胞的EMT。

HIF-1α通过调控脂代谢关键基因促进肾癌细胞的侵袭

目的:脂肪代谢在肾癌的发生、发展过程中至关重要。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)被认为是肾癌发生发展过程中关键的基因之一,其参与调控肾癌的侵袭转移过程。本研究探讨肾癌细胞侵袭过程中HIF-1α与脂肪代谢相关基因的关系。方法:采用免疫组织化学法检测人肾癌组织内HIF-1α、SCD1及FASN的表达,分析各基因之间的相关性。采用HIF-1α过表达质粒或敲除shRNA沉默正常肾脏细胞HK-2及肾癌细胞ACHN内HIF-1α后,运用real-time PCR及Western blot技术检测脂肪代谢相关基因SCD1及FASN的表达改变情况。采用Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,并运用SCD1及FASN的siRNA行基因沉默后,检测此两种基因对细胞侵袭能力的影响。结果:免疫组织化学结果显示SCD1及FASN在肾癌组织中的表达与HIF-1α呈显著正相关。HIF-1α过表达质粒能明显上调SCD1和FASN mRNA及蛋白的表达水平,反之,HIF-1αshRNA则明显抑制两种基因的表达。HIF-1α促进肾癌细胞ACHN的体外侵袭能力,而同时转染SCD1及FASN siRNA沉默基因表达后,细胞的侵袭能力减弱。结论:调控肾癌脂肪代谢的基因SCD1及FASN在HIF-1α所调控的肾癌细胞的侵袭过程中发挥重要作用。

Livin在肾细胞癌索拉菲尼耐药中的作用及相关机制

目的研究凋亡抑制蛋白livin在肾细胞癌(RCC)索拉菲尼耐药中的作用以及相关机制。方法通过免疫组织化学方法检测livin在人正常肾组织和RCC组织标本中的表达;通过载有livin过表达质粒的慢病毒感染RCC细胞786-O细胞系,从而成功过表达livin,并通过MTT实验检测对照组(negative control,NC)和实验组(livin过表达)细胞对不同浓度索拉菲尼的敏感性,最后通过Western blot的方法检测两组细胞内凋亡相关的指标Caspase3的表达情况以探究livin调控肾细胞癌对索拉菲尼耐药的相关机制。结果与正常肾组织相比,livin在RCC组织中表达明显升高,两组livin表达的差异有统计学意义(P<0.0001)。体外细胞实验证实,与对照组相比,实验组86-O细胞系在48小时后对不同浓度的索拉菲尼(3μM,6μM,9μM)出现了耐受性。索拉菲尼(9μM)处理786-O对照细胞48小时后,cleaved caspase3表达上调。索拉菲尼分别处理对照和过表达livin的786-O细胞48小时后,与对照组相比,livin过表达的786-O细胞的cleaved caspase3表达下调。结论livin通过调节cleaved caspase 3的表达从而影响RCC对索拉菲尼的敏感性。

联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路的药物对肾癌细胞生长的抑制效应

目的:探讨联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路的药物对肾癌细胞生长的抑制效应。方法:采用Real time-PCR的方法检测SHH/Gli信号通路的核心效应成分Gli1和Gli2在20对正常肾脏和肾癌组织中的表达情况;采用Western blot技术验证4对正常肾脏和配对的肿瘤中Gli1和Gli2蛋白的表达水平。单独或联合使用不同浓度的mTOR抑制剂与Gli1/2抑制剂于肾癌细胞后,采用MTT的方法检测细胞的体外增殖能力,然后采用Western blot技术检测联合应用低剂量mTOR抑制剂与Gli1/2抑制剂的肾癌细胞内细胞周期、凋亡相关蛋白的变化情况。结果:Gli1与Gli2在肾癌组织中的表达高于对照的正常肾脏组织。低剂量(5μmol/L)Gli1/2抑制剂Gant61并不能显著抑制肾癌细胞的生长,高剂量(10μmol/L)的Gant61能达到有效的抑制效应;但5μmol/L Gant61与低剂量mTOR抑制剂Rapamycin联用时,肾癌细胞的生长显著被抑制,且诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。结论:联合靶向mTOR和Gli1/2信号通路显著抑制肾癌细胞生长,为潜在的治疗策略。

浅表食管鳞状细胞癌组织中FGF-2、VASH1的表达情况及其与患者内镜下黏膜剥离术后复发转移的相关性

目的探讨浅表食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管生成抑制蛋白1(VASH1)的表达情况,并分析两者与患者内镜下黏膜剥离术(ESD)后复发转移的相关性。方法(1)通过GEPIA数据库分析浅表ESCC组织和正常食管组织中FGF-2、VASH1的mRNA表达情况,以及浅表ESCC组织中两者mRNA表达的相关性。(2)纳入92例病理诊断为浅表ESCC且行ESD治疗的患者,收集92例患者的癌组织标本和50例患者的癌旁正常食管组织标本。利用免疫组织化学法检测浅表ESCC组织及正常食管组织中FGF-2、VASH1蛋白的表达情况。分析浅表ESCC组织中FGF-2与VASH1蛋白表达水平的相关性,以及两者与ESCC患者临床病理特征、ESD后复发转移的关系。采用Logistic回归模型分析ESCC患者ESD后复发转移的影响因素。结果(1)GEPIA数据库分析结果显示,浅表ESCC组织与正常食管组织的FGF-2、VASH1 mRNA表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。浅表ESCC组织中FGF-2与VASH1 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05)。(2)浅表ESCC组织中FGF-2、VASH1蛋白的阳性表达率均高于正常食管组织,且两者呈正相关(均P<0.05)。低+中低分化程度、存在脉管癌栓、发生淋巴结转移的浅表ESCC患者FGF-2、VASH1蛋白的阳性表达率更高(均P<0.05);FGF-2低表达组、VASH1低表达组浅表ESCC患者术后复发转移率分别低于FGF-2高表达组、VASH1高表达组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,FGF-2高表达、VASH1高表达、发生脉管癌栓、分化程度低和中低、发生淋巴结转移是浅表ESCC患者ESD后复发转移的独立危险因素(均P<0.05)。结论FGF-2、VASH1在浅表ESCC组织中呈高表达,两者或共同参与了浅表ESCC的发生和发展,与浅表ESCC患者ESD后复发转移有关。

miR-503和钙黏蛋白在食管癌中表达及与患者预后的关系

目的:分析食管癌组织中miR-503和钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况,探讨miR-503、E-cadherin与食管癌患者预后的关系。方法:选取2013-09—2015-03宝鸡市中心医院胸外科接受外科手术治疗的119例食管癌患者,术中收集相应的食管癌组织和癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法检测组织中miR-503的相对表达量;采用免疫组化法检测食管癌组织中E-cadherin表达水平;采用Pearson法分析食管癌组织中miR-503表达水平与E-cadherin表达积分的相关性;对所有患者术后进行随访,采用Kaplan-Meier法分析食管癌组织中miR-503和E-cadherin表达与患者5年累积生存率的关系。结果:与癌旁正常组织比较,食管癌组织中miR-503相对表达量显著上升,E-cadherin阳性表达率、表达积分显著降低(P<0.05)。与浸润深度T_(1)+T_(2)、TNM分期Ⅰ+Ⅱ、高分化、无淋巴结转移患者比较,浸润深度T_(3)+T_(4)、TNM分期Ⅲ+Ⅳ、中和低分化、有淋巴结转移的患者miR-503相对表达量显著上升,而E-cadherin表达积分显著降低(P<0.05)。食管癌组织中miR-503表达水平与E-cadherin表达积分呈负相关(r=-0.517,P<0.05)。食管癌组织中miR-503高表达者5年累积生存率低于miR-503低表达者(42.31%vs 65.85%,χ^(2)=4.962,P<0.01),E-cadherin高表达者5年累积生存率高于E-cadherin低表达者的(79.59%vs 30.00%,χ^(2)=25.803,P<0.01)。结论:miR-503在食管癌组织中呈高表达,E-cadherin呈低表达,二者与食管癌的发生及患者预后密切相关。

改良13点前列腺穿刺活检在前列腺癌诊断中的应用

目的 评价经直肠超声引导改良13点前列腺穿刺活检对诊断前列腺癌的临床价值.方法 对2015年10月至2016年10月在陕西省人民医院就诊的82例临床疑似前列腺癌患者的临床资料进行回顾性分析.所有患者均进行了经直肠超声引导改良13点前列腺穿刺活检及手术治疗,将穿刺病理结果与术后病理结果进行比较,并比较改良13点穿刺法和标准6点穿刺法诊断前列腺癌的准确性,分析改良13点前列腺穿刺活检术的并发症.结果 82例疑似前列腺癌患者中,26例经直肠超声引导下改良13点前列腺穿刺术诊断为前列腺癌,54例诊断为前列腺增生,此80例诊断结果与术后病理相符,另2例穿刺活检诊断为前列腺增生而术后病理证实为前列腺癌.改良13点穿刺法和标准6点穿刺法诊断前列腺癌的准确性分别为97.6％（80/82）和84.1％（69/82）,两者比较差异有统计学意义（P=0.023）.所有接受改良13点法前列腺穿刺活检术的患者无一例出现严重的并发症.结论 经直肠超声引导改良13点前列腺穿刺活检术是一种安全、有效的前列腺系统穿刺活检术式,值得在临床推广应用.

腹股沟区未分化多形性肉瘤一例报告并文献复习

1病例报告 患者男,57岁。因发现左侧腹股沟区肿物1年,进行性增大半年于2016-02-22入陕西省人民医院。既往体健。入院查体示,左侧腹股沟区可触及一大小约6cm×7cm包块,质硬,表面欠光滑,与周围组织粘连固定,无触痛,同侧阴囊增大,约7cm×8cm,呈囊性,表面光滑,未触及睾丸及附睾,无触痛,平卧位体积无变化,同侧精索增粗。

肾盂黄曲霉菌感染一例报告

患者，女，61岁。2014年12月16日右侧腰背部疼痛4个月入院。既往有2型糖尿病史，口服二甲双胍治疗，血糖术监监测。查体：右肾区叩击痛.

通过模拟胚胎微环境逆转肿瘤的研究进展

肿瘤的发生和发展源于一小部分具有自我更新能力的肿瘤干细胞。胚胎干细胞也具有自我更新和多向分化的特性。胚胎干细胞特异的基质微环境能够提供干细胞正常生长的调控分子,在细胞不断更新的情况下,使增殖和分化达到平衡。受胚胎干细胞调节的基质或胚胎微环境作用于肿瘤细胞,可以使肿瘤细胞获得更多的分化表型,显著降低其恶性程度,抑制肿瘤细胞的侵袭行为。进一步的分子机制研究发现,在肿瘤细胞中高表达的Nodal蛋白会抑制肿瘤细胞分化,而胚胎干细胞分泌的糖基化Lefty蛋白可以负反馈调节Nodal蛋白的作用,从而降低肿瘤细胞的恶性程度。利用组织工程来模拟胚胎干细胞微环境,保留Lefty蛋白,从而逆转肿瘤的方法具有广阔的前景。