全血中DNA6种提取方法的比较

目的比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异。方法收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析。结果常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义。改良有机法得率最低,IQ法得率最高。统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义。结论与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提。

48个X-SNP位点的筛选及法医学应用价值分析

目的对筛选出的48个X-SNP位点进行遗传学分析,评价其法医学应用价值。方法根据NCBI和Hap-Map网站提供的位点信息筛选出48个高信息量X-SNP位点,利用SNPlexTMSystem技术平台进行分型检测,通过中国华东地区汉族人群200个无关个体的调查建立遗传学资料,对48个X-SNP位点的遗传多态性进行研究分析,并进行连锁不平衡检验。结果除rs6527549外,筛选出的48个X-SNP位点在中国华东汉族人群中具有高信息量,多态信息含量均在0.32以上,个体识别率在女性群体和男性群体分别为0.56和0.40以上,非父排除率在二联体和三联体中分别为0.20和0.32以上。检验发现,部分位点存在连锁不平衡现象。结论本实验选取的48个X-SNP位点分型结果稳定,重复性好,在法医生物学研究中具有较高的应用价值,适于开展大规模的高通量检测。

Mentype~ Argus X-8试剂盒在亲权鉴定中的应用价值

目的验证Mentype Argus X-8试剂盒在中国人群中的应用价值,积累该试剂盒中所包含的8个X-STR基因座在中国人群中的遗传学数据。方法应用Mentype Argus X-8试剂盒对华东地区177名汉族无关个体的血样以及104例二联体亲权鉴定案例进行X-STR分型,统计分析试剂盒中所包含的8个X-STR基因座的频率分布及遗传多态性信息。结果8个X-STR基因座在中国人群中的多态性信息量在0.4454～0.9187,其中以DXS10135和DXS10101的多态信息含量最为丰富,在亲权鉴定案例中的排除率亦最高。除DXS7132基因座外,其余7个基因座在男性及女性群体中的分布差异无统计学意义。另外,中国人群中检测到一些新的等位基因:DXS10074(等位基因15.3)、DXS10101(等位基因36)和DXS10134(等位基因37.3)。结论Mentype Argus X-8试剂盒所包含的8个基因座具有高度多态性,在特殊亲权案件的鉴定中具有重要的应用价值。

Y-STR单倍型在大家系中的差异研究

目的研究三种不同的Y-STR分型体系(Yfiler,Yfiler~?Plus和快速突变Y-STRs)在家系遗传过程中所展现出的变异程度。方法选取一遗传关系清晰的汉族家系,利用Yfiler~?Plus复合扩增系统和包含7个快速突变Y-STR基因座的复合扩增系统,得到所采男性样本32个Y-STR基因座的分型数据,统计分析Y-STR单倍型在世代遗传中的变化程度。结果同一家系不同男性个体的Y-STR单倍型具有一定的多样性,并且与Y-STR单倍型包含的基因座数量和基因座突变率有关;当家系中两名男性个体相隔10次减数分裂时,其Yfiler单倍型不一致的概率为7.35%,Yfiler Plus单倍型不一致的概率是91.2%,快速突变Y-STR单倍型不一致的概率则为100%。结论包含不同Y-STR基因座组合的Y-STR单倍型在世代遗传过程中的变化程度差异较大,在亲权鉴定和家系排查过程中特别是当Y-STR分型体系包含快速突变Y-STR基因座时应留心关注。本研究对Y-STR数据库建设中的采样规则和基因座选择也有参考价值。

X染色体上高信息量SNP位点及其法医学价值

人类X染色体长154.8Mb,其上密布SNP位点,蕴涵着大量的信息。用于法医学鉴定的X-SNP标记多态性好、突变率低。本研究从Hapmap、NCBI的数据库中筛选了167个高信息量SNP位点,这些位点的等位基因在北京汉族人群中的分布频率均高于0.3,通过高通量、高灵敏度的检测方法可对各个X-SNP位点进行分型验证,通过正确的统计学分析可得到其法医学多态性参数。X-SNP位点具有一些常染色体遗传标记无法比拟的优点,作为常规STR基因座的补充,能用于解决特殊的亲子鉴定案,性别鉴定和混合斑鉴定。

SNP分型方法及在法医学等领域的应用

随着单倍型图的产生,SNP越来越受到关注。不仅仅在Y染色体和线粒体,常染色体和X染色体上的SNPs的应用潜能也将被发现。SNPs具有比较低的突变率和适合于降解DNA分析的特点,在法医学领域也受到关注。本文综合介绍了SNPs和X-SNPs的一般特性、分型方法及其在法医学的应用。

人体液斑迹与非生物斑迹鉴别的三维荧光光谱分析

目的 利用三维荧光光谱分析技术,建立一种人体液斑迹与非生物斑迹的快速无损鉴别方法。方法 通过对采集的人唾液、3%的血液、咖啡、芬达斑迹的三维荧光光谱数据进行降维处理,经过小波变换、光谱去噪、特征提取后建立分类公式,使用Fisher判别法进行光谱匹配识别,建立区别斑迹类型的分析方法。结果 根据数据训练和比对结果,芬达、咖啡、唾液和血液均能达到91.39%以上的识别准确率,其中唾液达到了100%的识别准确率。结论 三维荧光光谱分析是一种有潜力可实现快速无损鉴别生物斑迹与非生物斑迹的方法。

转录组分析在血液样本时间和供体特征刻画中的应用研究

案件现场生物物证信息深度挖掘与刻画,可以为案件侦查、涉案人员查找提供丰富可靠线索,是当前法医DNA检验的有效补充,也是国内外法庭科学的研究热点之一。本研究以血液样本为研究对象,证实了0~168天内离体血液样本转录组变化的时间相关性,并建立随机森林模型实现不同离体时间血液样本分类。同时,进一步证实相同离体时间段内,不同吸烟习惯和不同性别供体来源的血液样本转录本具有显著差异,HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DQA2可以作为供体吸烟习惯判别标志,Y染色体非重组区(non-recombining Y,NRY)的转录本RPS4Y1和EIF1AY可以作为供体性别特征判别标志。本研究为法庭科学领域建立基于转录组分析的血液样本遗留时间和供体特征刻画方法提供了理论基础和实验依据。

Y染色体遗传标记的法医学应用及展望

作为男性特有的性染色体,Y染色体因父系遗传的特征在法医物证鉴定中具有独特的应用价值。近年来,随着检测技术的发展和分析手段的研发,Y染色体上的多种遗传标记得到了进一步探索,例如应用于家系排查的Y染色体短串联重复序列(Y-chromosome short tandem repeat,Y-STR),突变率极低、具有男性谱系结构特征的Y染色体单核苷酸多态性(Y-chromosomal single nucleotide polymorphism,Y-SNP),以及分型简便且适用于降解检材的插入/缺失多态性(insertion/deletion polymorphism,InDel)。Y染色体遗传标记在法医学家系排查、混合斑检测、群体分析以及人类迁徙等方面的研究进展显著。本文将从Y染色体遗传标记、检测方法及其在法医学领域的研究与应用进行综述,旨在为后期相关研究及实践提供参考。

20723例亲子鉴定中19个STR基因座的突变分析

目的观察并分析肯定亲权关系的案件,探索STR基因座的突变规律。方法采用Goldeneye 20A试剂盒对20723例肯定亲权关系的案件筛选等位基因突变事件,统计各基因座的突变率和突变等位基因的来源、片段大小、突变步数及重复单位的增加或减少情况,分析突变相关因素的特点。结果 19个STR基因座共发现548例突变,观察到557个突变事件,基因座的突变率为0.07‰~2.23‰。父系突变与母系突变的比例为3.06∶1。突变以一步突变为主,增加与减少重复单位的情况相当;二步以上(含二步)突变更易出现重复单位减少。突变主要发生于中等位基因,重复单位增减比例相当,长等位基因突变中重复单位减少显著多于增加。父系突变出现重复单位增加与减少的比例相当,母系突变重复单位减少较增加多见。结论各基因座的突变率差异具有统计学意义,当出现1~2个基因座不符合遗传规律时,应当加测其他检测系统,并结合突变基因座的信息计算PI值,以进一步明确鉴定意见。

疑似Amelogenin等位基因丢失的检测与分析12例

目的观察并分析亲权鉴定案件中Amelogenin等位基因丢失的案例,探讨Amelogenin等位基因丢失的类型、机制以及对性别鉴定的影响和应对方法。方法选择经Si Fa STRTM 23plex DNA身份鉴定系统检测,女性出现Amelogenin X的峰面积与相邻杂合子峰面积一致或低于相邻纯合子峰面积的1/2,男性出现Amelogenin X丢失的样本,进行X-STR分型及Amelogenin X测序,同时对出现Amelogenin Y丢失的男性样本,检测Y-STR分型及Y染色体性别决定区(sex-determining region of Y,SRY)进行验证。统计Amelogenin等位基因丢失的类型及丢失率,分析出现变异的机制及影响。结果 1例男性Amelogenin X等位基因丢失,经测序证实为引物结合区突变;4例女性疑似Amelogenin X等位基因丢失,经测序证实出现引物结合区突变的仅为1例。7例男性出现Amelogenin Y丢失,其中SRY阳性5例,SRY阴性2例。5例SRY阳性案件中4例可检出部分Y-STR分型,1例未检出Y-STR分型,2例SRY阴性案件均未检出Y-STR分型。Amelogenin等位基因丢失率约为0.029%。结论 Amelogenin X丢失不影响性别判定,Amelogenin Y丢失可能对性别造成误判,需要检测Y-STR或SRY来明确性别,对于未检出Y-STR分型且SRY检测为阴性的"男性",建议进行染色体核型分析及性别分化相关基因检测以进一步明确性别。

木材的DNA鉴定技术综述

近年来,涉及木材非法盗伐、非法贸易的刑事案件频发,且呈逐年上升的趋势。同时传统的木材鉴定方法已不适用于当前刑侦工作。本文介绍分析了当前木材鉴定技术的现状,综述了木材DNA技术鉴定应用于刑事技术领域的可能和前景。

现场生物斑迹遗留时间推断研究进展

就现场提取的生物检材而言,我们除了需要准确获得DNA STR分型进行个体识别和亲子鉴定,还希望能够通过技术手段获知其遗留时间、空间定位等更多信息。本文以血迹为主要研究对象,就国内外采用光学、细胞生物学、分子生物学等方法推断生物斑迹遗留时间进行总结,并对法医微生物学这一法庭科学新领域在时空线索推断中的应用做以介绍,为现场生物斑迹遗留时间推断研究提供参考。

尿液中DNA的提取与检验

尿液中DNA的STR分型检验有一定的应用价值:国外文献报道过应用于运动员兴奋剂控制^([1])中可疑尿检样品的个体识别,国内则偶有案发现场提取到尿液、尿冰、尿斑并成功进行个体识别的案例报道。与血液、精斑、唾液等检材相比,尿液STR分型的检出率较低,主要是与尿液中的成份有关。本文重点分析人类尿液成分,分类总结目前可用于提取尿液中DNA的多种方法,分析可能影响尿液STR分型检验结果的因素。

快速DNA检验技术及相关仪器的研究进展

基于微流控芯片技术的现场快速DNA检验仪具备"样本进-结果出"的潜能,能够实现无人为干预的自动快速检验。目前国外先后推出了RapidHIT 200、DNAScan(升级版产品为ANDE 6C)、ParaDNA?现场便携仪等商业化仪器,2小时可以完成全自动检测并生成STR图谱。美国联邦调查局(FBI)实验室自2010年起就致力于推动快速DNA检测项目的发展,同时对快速DNA检验的需求也越来越多。现就快速DNA检验技术及相关仪器的研究进展、验证评估情况以及相关标准、法案等进行简要介绍。

mRNA荧光复合扩增系统鉴别正常和异常精液初探

目的构建mRNA荧光复合扩增体系,实现对不同种类精液(尤其是无精症精液)的区分鉴别。方法收集正常、少精症及无精症的精液样本,制备精斑样本后提取细胞总RNA,利用逆转录PCR技术扩增2个精子特异mRNA标记(PRM1、PRM2)、2个精浆特异mRNA标记(TGM4、SEMG1)和2个管家基因mRNA标记(TEF、UCE)。结果正常精液样本可检测到全部精液mRNA标记表达;少精症精液样本虽然可检测到全部mRNA标记表达,但精子特异mRNA标记表达量较低;无精症精液样本不能检测到精子mRNA标记,只能检测到精浆特异mRNA标记。结论利用mRNA荧光复合扩增系统可以实现对正常和无精症精液的区分,而正常精液和少精症精液相比差异无统计学意义。

非编码RNA在体液斑迹鉴定中的应用

在犯罪现场侦查过程中,正确识别现场留下的生物斑迹组织来源非常重要。非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指转录组中不翻译为蛋白质的RNA分子,它在诸多体液(外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌物等)中皆有丰富的特异性表达,因而具备体液组织来源鉴定的潜力。由于其具备特殊结构,诸多ncRNA标记物展现出较好的灵敏度、特异度及稳定性,具有一定的检验优势。本文对非编码RNA在体液斑迹鉴定中的应用及其前景进行综述。

RNA检验在生物斑迹时间信息分析中的应用

案件现场生物斑迹是最为常见的生物物证种类之一,也是当前法医物证检验的主要对象,在案件侦办相关的同一认定、个体识别、亲权鉴定中发挥着重要作用。而包括“时点、时长、时序”等在内的生物斑迹时间相关信息,不仅可以为案发时间推断、涉案人员甄别、案发过程重建提供参考,也可以有效提升生物物证证据价值。近年来,法庭科学领域开展了大量相关研究,生物斑迹RNA表达或降解规律及其与时间信息的关联关系已经成为一大研究热点。