白芍总苷调控NF-κB/NLRP3信号通路对急性痛风性关节炎大鼠的影响机制研究

目的:探究白芍总苷(TGP)通过调控核因子-κB(NF-κB)/含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)信号通路对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠炎症的影响。方法:将60只SD大鼠以每组10只随机分为对照组、AGA组、秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组。对照组和AGA组每天进行生理盐水灌胃,秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组每天分别灌胃相应药物,共7 d,除对照组外均于灌胃第5天时构建尿酸钠(MSU)诱导的AGA大鼠模型;观察各组大鼠一般情况;检测大鼠步态及关节炎症指数评价、关节肿胀程度;HE染色观察大鼠踝关节滑膜组织病理学变化;ELISA法检测大鼠关节液中炎症因子水平;Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织NF-κB p65/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组相比,AGA组大鼠关节肿胀、跛行、皮毛无光泽、精神倦怠;秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组、TGP-H组大鼠相关症状均得到有效改善;与对照组相比,AGA组大鼠步态级别、关节炎症指数、关节肿胀程度、组织病理学程度、TNF-α、IL-6、IL-1β、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3和Caspase-1水平显著升高,p-IκBα/IκBα水平显著降低(P<0.05);与AGA组相比,秋水仙碱组、TGP-L组、TGP-M组和TGP-H组大鼠步态级别、关节炎症指数、关节肿胀程度、组织病理学程度、TNF-α、IL-6、IL-1β、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3和Caspase-1水平显著降低,p-IκBα/IκBα水平显著升高,存在TGP剂量依赖性(P<0.05);与秋水仙碱组相比,TGP-H组大鼠步态级别、关节炎症指数、关节肿胀程度、组织病理学程度、TNF-α、IL-6、IL-1β、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα、NLRP3和Caspase-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TGP对AGA大鼠炎症状态的改善可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。

CCL20-CCR6-Th17轴与肝细胞癌血管浸润转移的关系

目的探讨CCL20-CCR6-Th17轴在肝细胞癌血管浸润转移中的作用。方法采用SYBRGreen实时定量PCR测定人肝细胞系L-02、肝细胞癌细胞系Hep3B、Huh7和HepG2中CCL20mRNA的表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中CCL20蛋白的分泌，Transwell迁移实验检测肝细胞癌细胞系对人外周血单个核细胞的趋化作用。采用ELISA定量检测93例肝细胞癌患者（转移组51例，无转移组42例）术前外周血中白细胞介素10L（IL-1α）、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α和CCL20的水平，采用SYBRGreenRT—PCR检测41例肝细胞癌癌组织及其相应的癌旁组织中CCL20和CCR6的表达水平，免疫组织化学染色检测肝细胞癌及其对应的癌旁组织和正常人供肝组织中CCL20的表达水平。结果人肝细胞癌细胞系中CCL20的表达水平高于正常肝细胞，对外周血表达CCR6的T细胞具有趋化作用。93例肝细胞癌患者血清中CCL20蛋白的表达水平为（38．2±28．4）pg／ml，高于肝血管瘤患者[（7．8±17．8）pg／ml，P〈0．01]。肝细胞癌患者血清中CCL20蛋白的表达水平与肿瘤直径呈正相关（r=0．32，P=0．0018）。41例肝细胞癌组织CCL20mRNA的表达水平高于癌旁组织（P〈0．05），CCL20蛋白主要在肝细胞癌细胞质中表达，某些浸润的免疫细胞也有一定程度表达。多因素分析结果显示，血清中IL-17和CCL20水平是影响肝细胞癌患者发生血管浸润转移的独立影响因素（均P〈0．05）。41例肝细胞癌患者癌组织及对应的癌旁组织中CCL20mRNA的表达水平与肝细胞癌发生血管浸润转移均无关（均P〉0．05）。在发生血管浸润转移患者的癌组织及其对应的癌旁组织中CCR6mRNA的表达水平分别为5．75（1．79，19．13）和7．99（4．49，19．54），均高于未发生血管浸润转移的患者[分别为1．69（0．76，2．87）和3．58（1．84，4．32）]，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论ccL20／ccR6／Th17轴可能促进肝细胞癌的血管浸润转移。