piggyBac转座子在绒山羊基因组中的整合位点及其特征分析

【目的】构建piggyBac(PB)转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA,利用反向PCR检测piggyBac转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合,获得了转基因细胞系;反向PCR检测显示在绒山羊基因组中有21个PB转座子整合位点;整合位点TTAA毗邻一侧的5个碱基组成中,PB转座子3′倾向于插入到富含AT(58.35%)碱基的区域,PB转座子5′倾向于插入到富含GC(57.8%)。【结论】PB转座子可在绒山羊基因组中发生高效转座,获得的整合位点信息可为利用PB转座子开展绒山羊研究提供理论参考。

绵羊同期发情下有效精子数与不返情率关系研究

用每次输精剂量含有效精子数0.2亿、0.3亿、0.4亿、0.5亿、0.6亿、0.7亿的萨福克羊稀释精液对355只同期发情的纯种小尾寒羊母羊人工授精配种,以探讨同期发情时不同有效精子数对绵羊不返情率的影响。试验各组25天不返情率分别为43.24%、42.22%、50%、60.47%、59.62%、62.79%,其中含0.2亿和0.3亿有效精子数试验组羊不返情率差异不显著(P>0.05),0.5亿、0.6亿、0.7亿及对照组羊不返情率差异不显著(P>0.05),0.4亿组比0.2亿和0.3亿组不返情率高(P<0.01),但比0.5亿、0.6亿、0.7亿及对照组不返情率低(P<0.05)。上述结果表明,随着每输精剂量所含有效精子数的增加,试验羊25天不返情率亦逐步提高,二者呈强正相关(R=0.9402)。从提高公羊利用率和保证母羊受胎率出发,绵羊一次输入有效精子数以0.5亿以上较为适宜。

陕北白绒山羊Lhx2毛囊表达载体构建及转染成纤维细胞的研究

以陕北白绒山羊毛囊生长期皮肤组织cDNA为模板,扩增出Lhx2基因的CDS区,成功构建了以KAP6.1为启动子表达Lhx2基因的绿色荧光表达载体pIRES2-KAP-LHX-EGFP.并利用脂质体介导转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系,经PCR检测显示外源基因已整合到细胞基因中.研究结果为进一步开展Lhx2基因对绒山羊毛囊发育的影响和转Lhx2基因绒山羊的生产提供了前期研究基础.

质粒DNA的阴离子交换色谱法纯化及内毒素去除

采用Fractogel(EMD TMAE(M)强阴离子交换介质分离纯化质粒脱氧核糖核酸(DNA),该介质对质粒DNA的动态载样量达0.62mg/mL。用Triton X-114或Triton X-100预先处理质粒DNA的裂解澄清液后,经阴离子交换色谱分离纯化获得的质粒DNA中内毒素含量分别为6.42EU/mg和9.50EU/mg,显著低于未经Triton处理的裂解澄清液(67.82EU/mg)。该法实现了阴离子交换色谱一步纯化质粒DNA的目的,具有简便、省时、成本低等特点。

陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆

【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融合率为71.54%(181/253),体外培养后的卵裂率为68.33%(123/180),囊胚发育率为25.20%(31/123);在此基础上,构建了537枚克隆胚,将其中卵裂的359枚分别移植到32只代孕母羊体内,移植60d后,有2只受体母羊确认妊娠,最终1只受体母羊妊娠第4月流产出2只死羔;另1只受体母羊维持到期并顺产体细胞克隆羊1只。经遗传学鉴定,2只流产羊羔与1只存活个体均为体细胞核移植后代。【结论】获得陕北白绒山羊克隆个体,建立了相对完善的陕北白绒山羊克隆技术体系。

放牧绵羊微量元素摄入量与季节变化的关系研究

采用体质量—口罩法,分别在2、4、6、8、10、12月对天山北坡中段草地放牧的新疆细毛羊采食量进行测定,通过样方对牧草微量元素含量进行测定,计算放牧绵羊微量元素摄入量,另外不同季节绵羊发生周期性生理变化,对微量元素的需要量也不同,把不同季节放牧绵羊微量元素摄入量和需要量进行比较。研究结果得出不同季节绵羊从每天的采食中所获得的铁、锰、钴等微量元素能满足其需要。草地牧草中严重缺锌,母羊除在空怀期外其余时间锌缺乏量为16.0%～82.2%,特别是在母羊泌乳前期只能从牧草中获得需要量17.8%的锌。绵羊怀孕后期和泌乳前期缺铜55%和59%,常年缺硒6%～52%。

萨福克羊精液低温液态保存效果的研究

[目的]为了提高萨福克羊精液低温液态保存的效果。[方法]用葡萄糖、柠檬酸钠、乳糖、卵黄为主要成分配制了5种萨福克羊精液稀释液,分别4、81、21、6倍稀释精液并5℃保存,通过观测精子存活时间、有效存活时间、生存指数等指标,筛选出精液保存时适宜的稀释液、渗透压、pH值及稀释倍数。[结果]4倍稀释不利于精液保存,8、121、6倍稀释精液保存效果好(P<0.01),结合母羊受胎率稀释保存倍数以8倍为宜;以葡萄糖3.0 g、柠檬酸钠2.0 g、卵黄10 ml为主要成分的稀释液保存效果优于其他4种稀释液(P<0.05)。稀释液pH值和渗透压与精液越接近保存效果越好。[结论]调整稀释液成分、稀释倍数、pH值、渗透压,可以提高萨福克羊精液低温液态保存效果。

PMSG诱导新疆军垦细毛羊、哈萨克羊、湖羊同期发情的研究

为了取得良好的同期发情效果和排卵率以提高母羊受孕率,在准噶尔盆地南部山地用PMSG诱导了新疆军垦细毛羊、哈萨克羊、湖羊的同期发情,观察了3个品种羊的排卵情况,并统计了卵巢黄体的平均数目。试验结果表明,哈萨克羊同期发情率最高(90.6%),显著高于新疆军垦细毛羊(84.7%)和湖羊(83.12%)(P<0.05);哈萨克羊、新疆军垦细毛羊和湖羊的排卵率分别为94.28%、95.08%和98.46%,其中,哈萨克羊和新疆军垦细毛羊间差异不显著,而湖羊的排卵率显著高于哈萨克羊和新疆军垦细毛羊(P<0.05);哈萨克羊、新疆军垦细毛羊和湖羊卵巢上黄体生成的平均个数分别为1.192、1.233和3.172个。相比而言,地理环境和气候条件对不同品种母羊发情的影响较大,对排卵率的影响并不明显。

柴达木山羊群体遗传结构及系统地位的研究

采用简单随机抽样法对柴达木山羊群体进行了遗传检测,从毛色、外型特征、体尺、血液蛋白与DNA多态性等5个方面进行了群体遗传结构分析,并探索了其系统地位。结果表明:(1)毛色和形态特征的平均表型异质度分别为0.3419、0.5207;(2)血液蛋白在6个基因座上具有多态性,平均基因座杂合度为0.2584;(3)DNA RAPD标记表现丰富的多样性,基因多样度为0.4085～0.5318。通过对柴达木山羊与国内其他山羊的系统聚类,初步探索了该山羊群体的形成及所属,这些都表明柴达木山羊是一个比较古老的未经较高强度选育的地方山羊品种,其基因资源是我国山羊遗传资源中宝贵的一部分。

放牧绵羊微量元素舔砖研制与饲用效果研究

[目的]探索放牧绵羊微量元素舔砖的制作工艺及饲用效果。[方法]以石粉、食盐、饲料级微量元素、膨润土和糖蜜等为原料研制放牧绵羊微量元素饲用舔砖,并研究所制舔砖对新疆细毛羊生产母羊和育成羊的饲用效果。[结果]添砖的最佳制作工艺为:微量元素预混料8%,石粉5%,食盐66%,膨润土9%,糖蜜12%,冲击压力50 t,阴干时间9 d;试验组育成羊体重、毛长、体高、体长分别增加6.12kg、0.964、.906、.99 cm,而对照组(自由舔食食盐)分别增加1.60 kg、0.36、3.73、5.46 cm;试验组生产母羊的羔羊初生体重、断奶育成羔羊数、羔羊成活率和母羊繁殖率分别为4.02±0.91 kg/只、64只、94.1%、128%,而对照组分别为3.81±0.86 kg/只、54只、81.8%和108%。[结论]所研制舔砖对绵羊的饲用效果较理想。

从羊皮肤组织中提取总RNA方法的改进

在借鉴动物组织RNA提取方法的基础上,结合使用RNAlater保存液和Trizol试剂,改进了提取步骤和反应体系。利用改良的总RNA提取方法,从羊皮肤组织中快速、高效地提取了高质量总RNA,提取的总RNA可满足基于RNA分析技术的相关分子生物学试验需要。

新疆天山北部放牧绵羊牧草营养摄入量动态变化规律研究

本研究每逢双月中旬跟踪绵羊放牧,模仿绵羊摄取可采食性牧草种类、部位和数量,采集各种牧草样品,分类计算重量,按重量比例制成风干混合样品,按常规分析方法测定样品粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、无氮浸出物、Ca、P、灰分的含量并计算总能。总体来说,6、8、10月份牧草营养成分含量较高,12、2、4月份牧草营养成分含量较低。因此为了提高新疆天山北部地区放牧绵羊的生产水平,必须对绵羊在冬、春季节进行补饲,以保证绵羊全年营养均衡供应。

中国美利奴超细型细毛羊新品系的培育

进入21世纪,国家对细毛羊育种的总体规划有了新的要求,在国家863项目、科技攻关项目和科技支撑项目的大力支持下,新疆农垦科学院畜牧兽医所的科技人员用10年的时间培育出了中国美利奴——超细毛羊品系。目前超细品系群达到5.3万只,其中核心群基础母羊6500只,超细毛羊核心群体平均细度16.77μm,最细羊只12.6μm。

陕北白绒山羊Lhx2基因cDNA序列的克隆与原核表达

根据GenBank中已发表的Lhx2基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织克隆Lhx2基因编码区cDNA,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-Lhx2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。最终获得陕北白绒山羊Lhx2基因,长1 221bp;酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-Lhx2构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。

萨湖杂交后代母羊非繁殖季节同期发情配种效果分析

本试验是在新品种培育基础上,为了缩短时代间隔,加快育种进程,利用萨福克肉羊和湖羊的杂交后代(F1、F2代),其中F2代为3/4萨福克血,进行了春季非繁殖季节的同期发情试验。其中非繁殖季节4月同期处理杂一代母羊107只,有发情表现105只,同期率97.23%,配种受胎率83.3%,第一情期受胎率(73/108),67.59%,秋季产羔89胎,产羔羊144只,产羔率161.64%,杂二代母羊第一情期受胎率(72/31),44.93%,秋季产羔29胎,产羔羊37只,产羔率127.59%。

中国美利奴—超细毛羊品系培育

进入21世纪,国家对细毛羊育种的总体规划有了新的要求,在国家863项目、科技攻关项目和科技支撑项目的大力支持下,新疆农垦科学院畜牧兽医所的科技人员用10年的时间培育出了中国美利奴―超细毛羊品系。目前超细品系群达到5.3万只,其中核心群基础母羊6500只,超细毛羊核心群体平均细度16.77μm,最细羊只12.6μm。

《中兽医学》实验课程教学改革探讨与实践

《中兽医学》实验是动物医学专业的一门重要专业课。为了提高《中兽医学》实验课教学效果,针对传统实验教学过程存在的诸多不足,从教学内容、教学手段、方法和考核方式上进行课程教学改革。通过精心设计实验、丰富教学手段和改进教学方法,优化考核方式,充分发挥学生的积极性和主动性,增强学生分析问题和解决问题的能力,提高教学质量。

宁夏农垦五个羊品种舍饲行为比较试验

针对宁夏农垦贺兰山农牧场种羊场舍饲的滩羊、小尾寒羊、特克萨尔羊、萨福克羊、无角道赛特羊,分品种进行24h行为规律观察。结果表明,采食、反刍、休息时间三者的比值为滩羊1∶1.72∶1.78,小尾寒羊1∶1.68∶1.75,特克萨尔羊1∶1.71∶1.72,萨福克羊1∶1.71∶1.77,无角道赛特羊1∶1.71∶1.73,各品种供试羊采食多集中在白天;反刍、休息多集中在夜间。在草料充足的情况下,各品种供试羊采食量占体重的百分比为滩羊5.3%,小尾寒羊5.1%,特克萨尔羊2.94%,萨福克羊3.65%,无角道赛特羊3.83%。