放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌内高效介导位点特异性重组

目的 证明放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌细胞内介导高效的位点特异性重组。方法 在大肠杆菌内构建分子内重组分析系统。质粒pBZP含有方向相同的attB和attP位点,分别位于lacZ基因的两侧。将pBZP电击导入含有sre基因的大肠杆菌细胞。结果 重组的发生导致lacZ基因的切除,使含有X- Gal成分的培养基上细菌菌落从蓝色变成白色。整合后DNA经酶切、PCR和DNA测序证实。发生10 0 %重组率的attB和attP最小片段分别是5 0bp和4 7bp。结论 在大肠杆菌宿主环境中放线菌噬菌体重组酶Sre高效催化位点特异性重组。本分子内重组分析系统是一个简便而有效的方法。