脂肪间充质干细胞对脑出血大鼠自噬的影响及机制探究

目的探讨脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠自噬的影响并探讨其可能的作用机制。方法在无菌环境下分离健康SD大鼠腹股沟周围脂肪,体外培养ADSCs,并培养至第4代,应用流式细胞仪对ADSCs表面标志物进行测定。雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、ICH组、ADSCs组。ICH组和ADSCs组大鼠建立ICH模型,Sham组同样的方法建立模型,但不注射自体血。建模术后2 h,ADSCs组经右侧纹状体区域注射给予5μL细胞悬液(1×10^(5)个细胞),Sham组和ICH组给予等体积的生理盐水。建模成功后分别于第12 h、1 d、3 d、5 d、7 d对大鼠进行Longa神经功能评分,处死大鼠后,HE染色观察大鼠脑组织病理改变、尼氏染色观察未受损神经元数量、测定脑组织水含量、免疫组织化学染色法检测细胞内自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(recombinant human beclin 1,Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(in vitro kinase assay for serine/threonine protein kinase AKT/mammalian target of rapamycin,AKT/mTOR)信号通路磷酸化的表达情况。蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测1 d、3 d脑组织内LC3、Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化蛋白表达水平。结果流式细胞仪检测所培养的大鼠ADSCs中黏附分子CD29、CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达。与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织病理症状均明显增加,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量,自噬相关蛋白LC3和Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平均明显上调(P<0.05)。与ICH组相比,ADSCs组大鼠脑组织病理症状均明显减轻,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量明显降低(P<0.05),自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达水平明显下降(P<0.05),AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论ADSCs移植治疗脑出血可发挥神经保护作用,这种作用可能与通过激活AKT/mTOR信号通路抑制ICH大鼠细胞自噬水平进而减轻大鼠脑损伤程度有关。

节约和保护能源矿产

德育是各学科教学的任务。各学科德育渗透的方法是需要教师精心设计的。 小学自然五册《能源矿产》一课,我设计了三个思考题穿插在教学过程中。 1.这些能源矿产有哪些用途? 学生凭着自己的生活经验和已有知识列举出能源矿产的许多用途。知道它们不但是燃料。

硫氧环蛋白过氧化物酶1对硅沉着病小鼠肺功能的影响

目的探讨硫氧环蛋白过氧化物酶1(Prx-1)对硅沉着病小鼠肺功能的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组(生理盐水)、硅沉着病组(SiO2)、阴性转染组(SiO2+慢病毒空载体)和Prx-1转染组(SiO2+慢病毒Prx-1过表达载体),每组10只。气管插管术辅以呼吸机一次性灌注SiO2悬液和慢病毒载体。模型制备后,小鼠常规饲养12周。HE染色观察肺组织形态变化,免疫组织化学法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)表达,Western blotting法检测肺组织Prx-1、Ⅰ和Ⅲ型胶原水平,Fine Pointe WBP全身体积描记系统检测肺功能。结果对照组小鼠肺组织结构基本正常,硅沉着病组和阴性转染组中可见矽结节形成,Ⅰ和Ⅲ型胶原表达增多,Prx-1转染组肺组织病变减轻,矽结节变小,Ⅰ和Ⅲ型胶原水平降低。与对照组比较,硅沉着病组和阴性转染组8-OHdG水平及Prx-1蛋白表明显增加,但Prx-1转染组的8-OHdG水平较硅沉着病组减少,Prx-1表达较硅沉着病组增加。与对照组比较,硅沉着病组和阴性转染组小鼠肺功能降低,但Prx-1转染组小鼠肺功能明显改善。结论Prx-1高表达可通过降低活性氧,抑制硅沉着病纤维化和改善肺功能。

MAPK通路介导Prx-1抑制硅沉着病小鼠肌成纤维细胞转化

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在硫氧还蛋白过氧化物酶1(Prx-1)抗硅沉着病肌成纤维细胞转化过程中的作用。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(生理盐水)、模型组[二氧化硅(SiO_2)]、转染对照组(SiO_2+慢病毒载体)和Prx-1转染组(SiO_2+Prx-1慢病毒)。生理盐水、SiO_2及慢病毒均经支气管灌注。造模后,小鼠常规饲养12周。采用免疫组化法和免疫荧光法分别检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达。Western blot法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原、Prx-1、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(P-p38)、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)表达。结果模型组和转染对照组可见矽结节和肺间质纤维化,但Prx-1转染组的上述病变减轻。模型组和转染对照组Prx-1表达无区别,但Prx-1转染组较模型组Prx-1表达增高。与对照组比较,其余各组肺组织α-SMA、8-OHdG、Ⅰ型及Ⅲ型胶原、p-ERK1/2、pP38、p-JNK表达增多;与模型组和转染对照组比较,Prx-1转染组的上述指标表达减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 Prx-1具有抑制SiO_2诱导的肌成纤维细胞转化和肺纤维化作用,这种作用与降低活性氧并抑制MAPK通路活化有关。