硅胶膜离心柱法能高效、可靠地提取黄秋葵的DNA

黄秋葵(Abelmoschus esculentus)组织中富含影响其DNA提取质量的多糖、多酚。为探究这一特性,本研究以黄秋葵幼叶为材料,探索了一种新的基因组DNA提取方法——硅胶膜离心柱法,利用硅胶膜离心柱与自配的溶液提取了高质量的DNA。此法先用不含十六烷基三甲基溴化铵(cetyl-trimethyl-ammonium bromide, CTAB)的缓冲液去除一部分次生代谢物;然后用3%CTAB缓冲液分离DNA;再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提,之后用硅胶膜离心柱纯化DNA。运用琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR扩增和限制性酶切等方法检测DNA的质量,并与传统CTAB法、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)法和高盐低pH法进行比较分析。结果表明,本法提取的DNA完整性好,纯度高;能被Eco RⅠ完全消化;ISSR扩增得到的条带最清晰、多态性好,明显优于其它3种传统方法。此外,本方法也成功用于石斛(Dendrobium)、葡萄(Vitis spp.)、无花果(Ficus carica)、芦荟(Aloe vera)等植物基因组DNA的提取,因此具有广泛的适用性,可为富含多糖植物基因组DNA的提取提供参考。