波尔山羊重复超排FSH用量的调整方法与效果

根据218只2～5岁经产波尔山羊的第1次超排反应及回收胚胎数将第2次超排母羊分为5个组(1组只有卵泡未排卵;2组母羊处理后未发情;3组黄体数≤4个;4组黄体数5～14个;5组黄体数≥15个),2次连续超排时间间隔60 d以上,采用递减法用FSH(Folltropin V)进行超排处理,第2次FSH给量根据第一次的超排效果进行调整。结果表明,1～5组的有效供体利用率分别为100%、75%、71.88%、93.10%和93.65%,5组有效供体比例差异不显著(P>0.05);1～5组的总胚胎数分别为14.00±5.73、12.10±6.78、11.77±7.26、13.84±7.04、18.03±9.06枚,5组的总胚胎数极显著高于其他4组(P<0.01);1～5组的回收可用胚胎数分别为12.81±6.04、10.33±8.12、10.08±7.14、11.34±6.58和15.37±7.64枚,5组超排后可用胚胎数显著高于2、3、4组(P<0.05),与1组间差异不显著(P>0.05)。根据供体首次超排效果调整波尔山羊重复超排FSH给量方案可行,首次超排无反应或超排反应差的个体,重复超排时增加FSH给量,可以使70%以上的个体成为有效供体。

电穿孔介导小干扰RNA高效转染小鼠附植前胚胎

使用Cy3标记的阴性对照小干扰RNA(siRNA)转染小鼠附植前胚胎,建立向小鼠附植前胚胎导入siRNA的电穿孔方法。通过控制透明带弱化程度、电压、脉冲时间和脉冲次数等条件,采用不同参数组合并结合使用不同介质作为电转缓冲液将Cy3标记的阴性对照siRNA转染小鼠附植前胚胎。在荧光倒置显微镜下,观察胚胎的存活率、siRNA转染率以及阳性转染存活胚胎的囊胚发育率。结果显示小鼠附植前胚胎在使用台氏液消化胚胎透明带10 s后,以opti-MEM作为电转缓冲液,电穿孔参数设置为30 V,1 ms,3次的条件下取得最佳转染效果。总之,电穿孔方法可实现siRNA简便、高效地转染小鼠附植前胚胎。

人工诱骗子的入核分布对核因子-κB活性的调控作用

探讨了由核定位信号(NLS)多肽介导的核因子-κB(NF-κB)寡核苷酸诱骗子(ODNs decoy)进入HeLa细胞核的效率,以及对细胞核内NF-κB活性的调控作用。利用双功能交联剂(Sulfo-SMCC)共价交联末端氨基修饰的ODNs decoy和末端巯基修饰的NLS多肽,形成NLS多肽共价连接的ODNs decoy。依靠TransME转染试剂的辅助转染NLS-ODNs decoy进入HeLa细胞,用荧光显微镜观察荧光标记的NLS-ODNs在细胞内的分布。用MTT法检测HeLa细胞的活力,以凝胶迁移实验(EMSA)检测TNF-α诱导的HeLa细胞核抽提物中NF-κB的活性。结果表明,NLS多肽成功地连接到ODNs decoy上,NLS-ODNs可高效入核,入核率达到17.9%。转染NLS-ODNs进入HeLa细胞,对细胞活力无明显影响,而显著抑制核内NF-κB的活性。结果表明NLS多肽可提高ODNs decoy的入核效率,显著增强诱骗子对NF-κB活性的抑制效果。