巨细胞病毒抗原血症检测在肾移植术后的应用

目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、CMV DNA结果比较,评估CMV pp65抗原血症结果与肌酐、他克莫司(tacrolimus,Tac/FK506)药物浓度、淋巴细胞亚群的相关性。结果CMV pp65抗原血症结果与CMV DNA结果一致性为65.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与淋巴细胞亚群比较中,仅与NK细胞绝对值差异有统计学意义(P<0.05)。结论CMV pp65抗原与CMV IgG抗体结果一致性为57.3%。CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。

三种方法提取毛霉菌核酸效能的比较实验研究

目的 比较改良碱裂解法、一步法和磁珠法提取毛霉菌核酸效能的差异,探索一种用于PCR扩增的快速、高效、简便、经济的毛霉菌核酸提取方法。方法 分别用改良碱裂解法、一步法和磁珠法提取黑根毛霉(Rhizomucor miehei,R.miehei)、伞枝犁头霉(Lichtheimia corymbifera,L. corymbifera)和卷枝毛霉(Mucor circinelloides,M. circinelloides)3株毛霉菌核酸,使用Qbit4核酸浓度测定仪测定核酸浓度,并进行实时荧光定量PCR扩增实验,比较其扩增后的循环阈值(Ct)差异和核酸提取效率。结果 改良碱裂解法、一步法及磁珠法均能提取R. miehei,L. corymbifera和M.circinelloides 3株毛霉菌核酸,其中一步法提取所得核酸的浓度最高,改良碱裂解法次之,磁珠法最低,差异具有统计学意义(F=38.803,2 160.759,325.175,均P<0.05)。改良碱裂解法提取毛霉菌核酸耗时最短(10.00±1.50 min),一步法次之(25.00±1.50 min),磁珠法最长(75.00±1.50 min),差异有统计学意义(F=2 574.074,P<0.01)。磁珠法提取毛霉菌核酸耗费成本和设备依赖度最高,其次是一步法次之,改良碱裂解法最低。改良碱裂解法、一步法及磁珠法提取的3株毛霉菌核酸均能扩增出阳性结果。三种方法提取R. miehei菌株核酸扩增后Ct值分别为18.72±0.18,17.42±0.46和18.97±0.46,差异有统计学意义(F=22.375,P<0.01),其中改良碱裂解法和磁珠法提取的核酸扩增后Ct值差异无统计学意义(t=1.114,P>0.05),一步法提取的核酸扩增后的Ct值小于另外两种方法,差异有统计学意义(t=5.852,5.277,均P<0.05)。提取L. corymbifera菌株核酸扩增后Ct值分别为16.23±0.13,21.23±0.25和14.53±0.04,差异有统计学意义(F=2 298.548,P<0.01),其中改良碱裂解法提取的核酸扩增后的Ct值小于一步法,差异有统计学意义(t=40.031,P<0.01),磁珠法提取的核酸扩增后的Ct值小于另外两种方法,差异有统计学意义(t=27.953,60.265,均P<0.05)。提取M. circinelloides菌株核酸扩增后Ct值分别为16.77±0.28,15.38±0.88和16.13±0.20,差异有统计学意义(F=8.152,P<0.01),其中改良碱裂解法提取的核酸产物扩增后的Ct值大于另外两种方法,差异有统计学意义(t=3.372,4.106,均P <0.05),一步法和磁珠法提取的核酸产物扩增后的Ct值差异无统计学意义(t=1.866,P> 0.05)。结论 改良碱裂解法、一步法及磁珠法均可成功提取毛霉菌核酸,其中改良碱裂解法操作简便、耗时最短、耗费成本和设备依赖性最低,所提取毛霉菌核酸模板能够满足实时荧光定量PCR扩增要求。

基于射频识别技术的检验标本全生命周期管理系统研发

检验前标本质量对检验结果质量有着至关重要的影响,如标本运输时间过长、标本采集时间不正确等均可能对检验结果产生影响。传统采用条形码管理的检验前标本质量控制工作难以开展。基于此,该研究利用UHF-168长距桌面读写器、ZEBRA ZT420射频识别(RFID)标签打印机、ZEBRA TC200J个人数字助手(PDA)等系统硬件及PowerBuilder 9.0开发工具、Oracle 11g数据库,建立基于RFID技术的检验标本全生命周期管理系统,实现对检验标本的全生命周期跟踪和管理。并在各病区和检验科设置检验标本采集区、标本交接区,在采集区和交接区设置固定阅读器,对区域内的电子标签进行识别和记录,将识别的检验标本标签信息,通过数据传输接口写入数据库,使用检验标本全生命周期管理系统实现检验标本的全生命周期管理,持续改进标本转运流程。经实践,使用基于RFID技术的检验标本全生命周期管理系统,可以准确计算检验标本转运时间合格率,持续改进检验标本转运时间,实现检验标本的全生命周期管理,提高标本转运效率,保证医疗安全。

两种方法检测群体反应性抗体的比较分析

目的对流式荧光法和酶联免疫吸附实验(ELISA)法在群体反应性抗体(PRA)的检测中进行比较和评价。方法选取昆明市第一人民医院2016年9月至2019年4月门诊及住院患者2907例,采用流式荧光法或ELISA法检测患者血清PRA,比较两种方法的阳性率,同时抽取40例患者采用两种方法同时进行检测。结果ELISA法PRAⅠ类、Ⅱ类及总阳性率分别为9.0%(103/1142)、8.1%(92/1142)、13.7%(156/1142),流式荧光法分别为22.9%(404/1765)、21.9%(387/1765)、34.3%(606/1765)。采用两种不同方法同时对40例患者PRA进行检测,两种方法的一致性极低。结论流式荧光法检测PRA阳性率明显高于ELISA法,实验室宜采用灵敏度较高的流式荧光法进行PRA检测。