M2-PK蛋白在宫颈及癌变组织中的差异表达

目的:筛选、验证肿瘤标志物M2-PK在宫颈及癌变组织中的差异表达。方法:选择永生化的人宫颈粘膜上皮细胞株H8和人宫颈癌细胞株Caski,采用双向凝胶电泳技术通过比较二者的双向电泳图谱筛选明显差异表达的蛋白质,并行MALDI-TOF-MS质谱鉴定;Western blot法检测差异蛋白质M2-PK在宫颈及癌变组织中的表达。结果:获得H8和Caski细胞的双向电泳图谱;蛋白M2-PK在Caski细胞中的表达量明显高于H8细胞;M2-PK在宫颈的正常组织、癌前病变组织和癌组织中的表达逐渐增加。结论:筛选出H8细胞和Caski细胞间的差异蛋白M2-PK,M2-PK在宫颈及癌变组织中的表达量不同。

比较蛋白质组学研究进展

蛋白质组学作为后基因时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域,尤其是比较蛋白质组学在疾病研究、治疗和制药中得到了更为广泛的应用。本文简要介绍了比较蛋白质组学的基本概念、研究技术和相关的研究现状。

偏头痛大鼠硬脑膜上Artemin表达变化参与偏头痛病理发生过程

目的建立硝酸甘油诱发的大鼠偏头痛模型,观察大鼠硬脑膜上Artemin(Artn)的表达变化,探讨Artn在偏头痛病理发生的作用。方法 40只健康雌性Wistar大鼠随机分为模型组和生理盐水对照组。模型组采用颈部皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)诱发大鼠偏头痛模型,造模成功后0、2、4、6 h取硬脑膜检测。应用免疫荧光染色法定位Artn的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot检测Artn mRNA及蛋白的表达。结果双重免疫荧光结果显示Artn表达在偏头痛大鼠硬脑膜血管平滑肌细胞上,且注射硝酸甘油6 h后Artn的免疫阳性信号与生理盐水对照组相比明显增强。生理盐水对照组各时间点均可见Artn的表达,但各时间点的相对表达差异无统计学意义(P>0.05)。模型组Artn mRNA在2 h时表达量达高峰(1.520±0.048),与生理盐水对照组相比(0.474±0.026),差异具有统计学意义(t2h=33.247,P<0.01)。随后表达量逐步下降,6 h趋于正常对照组水平。模型组Artn的蛋白在0和2 h时与生理盐水对照组相比表达量无变化,而4和6 h表达量迅速增加,差异具有统计学意义(t4h=7.208,P4h<0.05;t6h=16.491,P6h<0.01)。结论 Artn可能通过其表达量的上调参与了偏头痛的病理发生过程。

特异siRNA抑制宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒16型E6表达的研究

目的优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA,抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响。方法选择4个分别针对HPV-16 E6 mRNA外显子和内含子序列为靶序列,合成DNA链,构建表达HPV-16 E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1.0-U6载体,导入HPV-16 DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中,观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化,并观察细胞生长被抑制的情况。结果4种HPV-16 E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率。通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96 h内,可降低细胞生长速度。荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低,其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平。West- ern blot分析表明,4个HPV-16 E6 siRNA作用72 h后,未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16 E6蛋白。结论HPV-16 E6 siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢;选择针对E6内含子的siRNA作用位点,特异性抑制E6表达;而针对E6外显子的siRNA作用位点,可抑制E6和E7基因的表达,是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位。

Wolfram综合征的诊疗及相关分子机制的研究进展

Wolfram综合征是一种罕见的遗传谱系疾病,以尿崩症、糖尿病、视神经萎缩和耳聋为特征,并伴有其他可变的临床表现。目前,这种综合征的预后很差,具体的分子机制尚不明确,缺乏有效的治疗方法来延缓、阻止或逆转Wolfram综合征的发展,许多患者常因严重的神经功能障碍而过早死亡。这增加了Wolfram综合征致病分子机制研究和新疗法开发的紧迫性。本文分析归纳了Wolfram综合征致病分子机制的研究进展和治疗现状,以期为Wolfram综合征的进一步机制研究、预防控制和治疗提供借鉴。

AIF和PARP-1在庆大霉素致前庭毛细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡诱导因子（AIF）和聚（ADP-核糖）聚合酶1（PARP-1）在庆大霉素损伤致前庭毛细胞凋亡中的作用及机制。方法取出生后3～4d的大鼠球囊斑和椭圆囊斑行离体前庭器官培养，经培养过夜后再用2mg／mL庆大霉素培养液继续培养72h。用流式细胞术检测前庭毛细胞凋亡，RT—PCR法检测AIF和PARP-1基因表达情况，Western blotting法分别检测AIF线粒体蛋白和胞浆蛋白的表达，Western blotting法检测PARP-1蛋白表达。结果流式细胞术结果显示庆大霉素组前庭毛细胞凋亡率较对照组显著增加。RT—PCR显示庆大霉素损伤组AIF和PARP-1表达明显增加。Western blotting结果显示庆大霉素损伤组线粒体蛋白表达降低，而胞浆蛋白表达升高。庆大霉素损伤组PARP-1蛋白表达增加。结论AIF介导的非Caspase依赖途径参与了庆大霉素损伤导致前庭毛细胞凋亡，PARP-1可能参与了AIF通路的激活。

TRPV1受体与偏头痛关系的实验研究

目的利用硝酸甘油诱导的偏头痛模型,检测瞬时感受器电位香草酸亚1(TRPV1)的表达,探讨TRPV1受体是否参与硝酸甘油诱导的偏头痛过程。方法成年雌性Wistar大鼠24只,按随机数字法分为硝酸甘油模型组和对照组。模型组大鼠颈部皮下注射硝酸甘油(10mg/kg),对照组在相同部位注射等量生理盐水。观察大鼠行为表现,分别于注射药物1h、2h、4h和8h取大鼠双侧的三叉神经节及硬脑膜,采用RT-PCR、Western Blot及间接免疫荧光法检测TRPV1受体表达。结果对照组各时间点三叉神经节均可见TRPV1受体表达,但各时间点相对表达无显著差异(P>0.05);模型组三叉神经节TRPV1受体1h、2h mRNA和蛋白相对表达量与对照组比较下调,而4h、8h表达升高(P<0.05);模型组三叉神经节TRPV1受体8h表面蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05);间接免疫荧光显示模型组硬脑膜8h TRPV1受体表达高于对照组。结论 TRPV1受体在硝酸甘油诱导的偏头痛模型中表达变化,提示抑制或拮抗TRPV1受体将是治疗偏头痛的新思路。

Peroxynitrite诱导下咽癌细胞凋亡与PDCD4基因活性相关性研究

目的探讨peroxynitrite(ONOO-)作用于下咽癌细胞过程中PDCD4基因表达的变化。方法以体外培养的下咽癌FaDu细胞系为实验材料,不同浓度的ONOO-作用于FaDu细胞,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生存率,采用Ho.33342/PI荧光双染进行形态学观察,RT-PCR及Western-blot检测PDCD4mRNA水平及蛋白表达的变化,评价PDCD4基因在ONOO-诱导FaDu细胞凋亡过程中的作用。结果 ONOO-(50、100、200μmol/L)作用FaDu细胞24h,能够显著抑制细胞增值,并诱导细胞程序性凋亡,同时引起PDCD4mRNA水平显著上调,PDCD4蛋白表达显著增加。结论 PDCD4基因可能在ONOO-诱导下咽癌细胞生长的信号转导调节通路中起到关键作用。

ABCA4基因新突变导致的Stargardt病一家系的临床特征与遗传学分析

目的对1个Stargardt病家系进行临床特征与遗传学分析,并探讨三磷酸腺苷结合盒家族亚科A成员4(ABCA4)基因突变在Stargardt病中的致病性。方法先证者因视力下降于2021年5月就诊于济南市第二人民医院,对先证者及家系成员进行详细的眼科检查,根据Stargardt病临床诊断标准评估确诊先证者为Stargardt病。提取先证者及家系其他成员基因组DNA,对先证者DNA进行全外显子测序寻找致病的突变基因。通过PolyPhen-2、SIFT、MutationTaster等网站分析突变位点危害性,利用Sanger测序验证并确认致病突变,进行同源物种保守性分析及三维蛋白结构功能预测以分析其致病性。结果眼科检查表明先证者双眼视力下降、黄斑萎缩并伴有“牛眼征”,其他家系成员均正常。通过先证者的全外显子测序分析和家系成员及正常对照的Sanger测序验证,ABCA4基因的复合杂合突变(c.215G>A和c.6563T>C)与该家系患者表型共分离。SIFT、PolyPhen-2和MutationTaster网站预测这2个突变均有害,保守性分析和三维蛋白结构模型预测表明该突变导致蛋白的结构发生改变,影响蛋白质功能。结论ABCA4基因的复合杂合突变(c.215G>A和c.6563T>C)为该Stargardt病家系携带的致病突变。