马钱子致大鼠体内毒性的研究——“装袋”算法和16S rRNA基因测序技术在毒理学研究中的应用

目的中药马钱子(Strychnos nux-vomica L.,SN)在临床上具有消肿止痛的功效,然而,由于含有生物碱类成分,马钱子具有一定毒性。人们对马钱子毒性所引起的大鼠内源性代谢变化及其对肠道微生物群代谢失调的潜在影响知之甚少,因此,马钱子的毒理学研究对其安全性评价具有重要意义。本研究将代谢组学和16S rRNA基因测序技术相结合来探索马钱子的致毒机制。方法通过急性、蓄积性和亚急性毒性试验,分别确定马钱子的中毒剂量、毒性强度和毒性靶器官。超高效液相色谱-质谱联用技术用于分析大鼠灌胃马钱子后的血清、肝脏和肾脏样本。利用基于装袋算法的决策树和K最近邻(K nearest neighbor,KNN)模型对组学数据进行分类。从大鼠粪便中提取样本后,使用高通量测序平台对细菌的16s rRNA V3-V4区域进行分析。结果装袋算法提高了样本分类的准确率。共鉴定出12个生物标志物,这些生物标志物的代谢失调可能是马钱子致体内毒性的原因。拟杆菌、粪厌氧棒菌、颤螺菌、双茎体菌等与肾肝功能的生理指标密切相关,这表明马钱子引起的肝肾损害可能与这些肠道细菌的代谢紊乱有关。结论本文揭示了马钱子的体内致毒机制,为马钱子临床上的安全合理使用提供了科学依据。

蒙药塔日努本草考证及现代研究概述

本文结合经典医籍、历代本草与现代研究,对蒙药塔日努的历史沿革进行梳理,为相关研究利用提供参考。从塔日努基原植物、形态、性味、功效等方面进行本草考证,认为蒙医所用塔日努为大戟科植物狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud.的干燥根,余为代用品或伪品。从化学成分、药理作用及毒性研究、炮制方法及炮制对其毒效影响等方面对塔日努现代研究进行归纳总结。

草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的代谢组学研究

目的基于代谢组学技术分析和探讨草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的生物标志物和可能的作用机制。方法以草乌为示例药物,以大鼠为研究对象,除正常组外,给药组灌胃相应溶液,连续给予28 d。通过代谢组学技术对采集的大鼠血清、肝、肾样本进行检测,用主成分分析结合偏最小二乘判别分析筛选肝肾亚急性毒性敏感标志物及代谢通路。结果代谢组学分析显示,与正常组比较,草乌组血清、肝、肾样本中分别鉴定得到34、23和30个差异代谢物,主要富集于ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢、烟酸和烟酰胺代谢等通路。结论初步认为草乌通过影响ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢等对肝肾造成损伤,亚精胺、羟脯氨酸、葡萄糖、L-亮氨酸和尿素可作为潜在的肝肾毒性敏感生物标志物。

基于大鼠尿液生物标志物探析冬葵果醇提物的利尿作用

目的:采用尿液代谢产物分析方法评价冬葵果醇提物利尿作用机制。方法:选取50只雄性SD大鼠随机分为正常组(Z组),冬葵果醇提物高剂量组(DG组)、冬葵果醇提物中剂量组(DZ组)、冬葵果醇提物低剂量组(DD组),阳性对照组(Y组)。制备大鼠水负荷模型后置代谢笼收集0~1、1~2、2~4、4~6、6~24 h范围内尿液;按照试剂盒要求检测尿液K+、Cl−、Na+及血清ADH、ANP、ALD、cAMP、cGMP、AQP1和AQP2的含量;采用代谢组学方法检测尿液中内源性代谢产物,并进行代谢差异表征,查寻尿液中差异代谢产物。结果:与Z组比较,Y组0~1、1~2、2~4 h三个时间段的尿量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);DD组2~4 h和6~24 h两个时间段的尿量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);DZ组和DG组2~4、4~6 h两个时间段的尿量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与Y组比较,DD组、DZ组和DG组0~1、1~2 h两个时间段尿量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Z组比较,冬葵果醇提物各剂量组能显著升高尿液Na+和Cl-含量,差异有统计学意义(P<0.01)。与Y组比较,DG组Cl-含量显著升高,DZ组和DD组Na+、Cl-含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Z组比较,DG组ANP和AQP2含量显著升高、ADH含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);DD组cAMP和AQP1含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Y组比较,DG组ADH含量显著降低,ANP含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。代谢组学分析显示,与Z组比较,尿液样本中共筛选得出DD组6个、DZ组8个、DG组10个差异代谢物,这些代谢物水平存在明显的变化。结论:羟脯氨酸、葡萄糖酸和儿茶酚是参与冬葵果醇提物利尿作用机制的尿液生物标志物。

制草乌肝毒性效应的代谢通路分析

目的基于代谢组学技术检测制草乌对大鼠肝功能指标及肝组织病理影响从而探究代谢通路分析。方法以制草乌为示例药物,以大鼠为研究对象,将大鼠按体重随机分成4组。根据预试验结果设定正常组、制草乌高剂量组、中剂量组、低剂量组。除正常组外,其余各给药组灌胃相应的药物溶液,1次/d,连续灌胃28 d,末次给药后收集血清样本,检测各组的血清生化指标及采用LC-MS非靶向代谢组学技术对血清内源性代谢产物变化进行分析。结果血清生化指标结果显示,与正常组比较,制草乌高剂量组ALT含量显著升高,有统计学意义(P<0.05);制草乌中和低剂量组指标差异无统计学意义(P>0.05);肝组织病理检测显示,正常组肝小叶结构清晰,肝细胞索和肝血窦大致呈放射状排列,肝细胞圆润、饱满,肝板排列规则、整齐。制草乌高剂量组肝细胞广泛水肿、空泡化、丧失结构完整性;制草乌中和低剂量组未见明显异常;从血清中共筛选出34个内源性差异代谢物,其中上调15个、下调19个,多数涉及烟酸和多种氨基酸代谢。结论明确制草乌具有一定的肝毒性;肝毒性机制主要与烟酰胺(NA)和1-甲基烟酰胺(MNA)代谢有关。

基于网络药理学及动物实验探讨瑞香狼毒治疗RA作用机制

为探讨瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的潜在机制,利用TCMSP、PubMed及TCMID数据库和文献挖掘获得瑞香狼毒主要化学成分,利用Swiss Target Prediction、Uniprot数据库获得瑞香狼毒治疗疾病靶点,运用OMIM、GeneCards及PharmGKB数据库获取RA主要作用靶点,通过对化学成分靶点与疾病基因进行交集整合,筛选瑞香狼毒治疗RA的潜在治疗靶点.使用Cytoscape 3.6.1软件构建“药物-活性成分-靶点-疾病”相互作用网络图,将潜在治疗靶点用DAVID软件分析预测相关的生物学过程,并通过动物实验对主要生物学过程进行验证.采用ELISA检测瑞香狼毒对RA模型大鼠血清炎症因子的影响,该研究共筛选出瑞香狼毒60个活性成分,5017个与RA潜在治疗靶点及380个交集靶点;动物实验结果表明,瑞香狼毒可以通过抑制炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)表达以发挥抗RA作用.该研究揭示了网络药理学预测并指导实验设计的合理性,证实瑞香狼毒可以通过抑制炎症因子以发挥抗RA作用,为瑞香狼毒治疗RA的机制研究提供依据.

基于非靶向代谢组学的诃子解草乌心脏毒性机制分析

目的:采用代谢组学方法分析诃子解草乌心脏毒性机制。方法:以草乌、草乌诃子药对为示例药物,将50只SD大鼠按体质量随机分为正常组,草乌高剂量组、草乌低剂量组、草乌诃子药对高剂量组、草乌诃子药对低剂量组,每组10只。各给药组连续灌胃28 d相应药物溶液。最后一次给药后检测各组心率和心电图、血清生化指标及病理组织学变化,并取心脏组织,采用LC-MS非靶向代谢组学技术分析心脏内源性代谢产物变化。结果:与正常组相比较,草乌高剂量组心率出现明显降低(P<0.05)。各给药组大鼠的心电图结果主要表现为,草乌高剂量组呈现心律失常,室早,宽大畸形的QRS波;草乌低剂量组出现宽大畸形的QRS波;草乌诃子药对高剂量组大鼠表现为ST段压低;草乌诃子药对低剂量组大鼠的心电图偶见ST段抬高。血清生化指标结果显示,草乌高剂量组CK、CKMB显著降低(P<0.05);草乌低剂量组CK、CKMB呈升高趋势。病理学观察结果显示,草乌高剂量组心肌纤维排列略紊乱,胞质疏松淡染,部分细胞水肿;草乌低剂量组心肌纤维排列略紊乱;草乌诃子药对高剂量组个别心肌细胞水肿;草乌诃子药对低剂量组心肌纤维排列紊乱,胞质疏松淡染。草乌高剂量组从心脏样本中共筛出18个差异代谢物,其中上调4个、下调14个;草乌诃子药对高剂量组从心脏样本中共筛出25个差异代谢物,其中上调1个、下调24个,主要涉及ABC转运蛋白和多种氨基酸代谢。结论:诃子解草乌心脏毒性机制主要与心脏N、N-二甲基精氨酸和腺苷蛋氨酸及肌酸代谢有关。

蒙古莸化学成分的研究

目的研究蒙古莸Caryopteris mongholica Bunge的化学成分。方法蒙古莸95%乙醇提取物采用硅胶柱、薄层色谱和高效液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到13个化合物,分别鉴定为royleanone(1)、6,7-didehydroferruginol(2)、11β-hydroxy-8,(9),15-isopimaren-7-one(3)、(16 S)-12,16-epoxy-11,14-dihydroxy-17(15→16)-abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one(4)、demethylcryptojaponol(5)、6α-hydroxydemethylcryptojaponol(6)、incanone(7)、3β-乙酰基齐墩果酸(8)、香草酸(9)、麦芽酚(10)、曲酸(11)、3,5-dihydroxy-2-hydroxymethyl-4 H-pyran-4-one(12)、植醇(13)。结论化合物1~3、7~13为首次从莸属植物中分离得到。

蒙药红花水提物的毒性观察

目的:血清动态观察蒙药红花水提物(HS)对肝、心、肾的毒性作用。方法:将蒙药红花水提物分为低、中、高剂量组及正常组,分别灌胃3个月HS,每天灌胃1次,每14 d尾部采血1次,动态观察血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、三酰甘油酯(TG)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)水平的变化;3个月后处死大鼠,取肝、心、肺、肾、脾、胃、肠、脑组织做苏木精-伊红染色(HE)病理观察。结果:HS低、中、高剂量组持续用药3个月后大鼠血清GPT、GOT、TG、LDH、CK、Urea、Cr水平和组织病理切片结果发现对肝、心、肾基本无损伤。结论:根据血清GPT、GOT、TG、CK、LDH、Gr、Urea水平和组织病理学观察发现,服用HS(0.4767~8.5806 g/kg)长达3个月对肝、心、肾基本无毒性。

三叶 五叶木通提取物药效及对药酶影响的比较研究

目的:比较三叶木通[Akebia trifolia ta(Thunb.)Koidz,简称AK]和五叶木通[Akebia quina ta(Thunb)Decne,简称AD]水提物抗炎、利尿及抗菌作用的同时,探索性观察了两种木通对细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平的影响。方法:抗炎作用采用小鼠腹腔毛细血管通透法和小鼠耳肿胀法,观察其抗炎作用;利尿作用采用大鼠代谢笼法,观察其利尿作用;采用体外抑菌实验,观察其抑菌作用。用聚乙二醇制备肝微粒体,测定肝和小肠CYP3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:两种木通均明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出,抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀;并利尿和抑菌作用明显;三叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平有一定的抑制作用。与正常对照组相比差异显著(P<0.05);五叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平无明显作用,与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:两种木通抗炎、利尿及抑菌作用基本相等;三叶木通水提物可能是肝CYP3A和P-gp的抑制剂;但五叶木通对CYP3A和P-gp影响不明显。

嘎日迪-5对心脏毒性的代谢通路分析

目的:采用代谢组学方法分析嘎日迪-5心脏毒性机制。方法:以大鼠为研究对象,以嘎日迪-5为示例药物,将大鼠按体质量随机分为正常组,嘎日迪-5高、中、低剂量组。除正常组外,各给药组灌胃药物溶液,连续灌胃28 d,末次给药后收集血清样本,采用LC-MS非靶向代谢组学技术分析血清内源性代谢产物变化。结果:与正常组比较,嘎日迪-5高剂量组CK、CKMB含量显著升高(P<0.05),嘎日迪-5中剂量、嘎日迪-5低剂量组CKMB含量显著降低(P<0.05)。各给药组大鼠的心电图主要表现为嘎日迪-5高剂量组心动过缓,ST段压低;嘎日迪-5中剂量组室早,宽大畸形的QRS波(P<0.05);嘎日迪-5低剂量组ST段压低。心脏组织病理检测显示,正常组心肌纤维排列整齐规则,胞核呈蓝色,胞质呈淡粉色,细胞结构清晰。嘎日迪-5高剂量、嘎日迪-5中剂量组心肌纤维排列紊乱,胞质疏松淡染,部分细胞水肿。嘎日迪-5低剂量组心肌纤维排列略紊乱,胞质疏松淡染;嘎日迪-5高剂量(GG)组心脏样本中筛出121个差异代谢物。结论:嘎日迪-5心脏毒性机制与大鼠心脏内ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢等通路有关。

常态虚寒状态小鼠CYP3A活性P-gp水平比较研究

目的:比较虚寒状态与常态小鼠肝和小肠细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平情况。方法:肌注氢化可的松复制小鼠虚寒状态模型,采用聚乙二醇法制备肝和小肠微粒体,测定肝和小肠细胞色素CYP 3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:虚寒状态组和正常状态组肝和小肠微粒体内CYP3A活性和P-gp水平存在差异,即正常状态CYP3A活性、P-gp水平高于虚寒状态,且差异显著(P<0.05)。结论:初步发现,CYP3A活性和P-gp水平存在机体状态差异。

蒙药那如-3丸对佐剂性关节炎的治疗作用及机制

目的:研究那如-3丸对大鼠佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及部分机制。方法:用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型;足容积法测量继发性足肿胀度;比色法测定脾淋巴细胞增值反应;用ELISA法测定IL-1、TNF-a、PGE2水平;用比色法测定NO、SOD、MDA含量。结果:致炎后第15天,大鼠继发性关节炎出现,致炎后第8天开始预防给予不同剂量的那如-3丸,连续15d,从致炎后第15天起开始各给药组足跖容积和足跖肿胀度明显下降,同时大鼠关节组织的IL-1、TNFa、PGE2、NO的含量明显下降,但那如-3对SOD、MDA含量无明显影响。结论:那如-3丸对AA大鼠继发性炎症具有治疗作用,起作用机制可能与调节机体异常的免疫功能和维持细胞因子网络平衡有关。

肋柱花粉剂抗乙型肝炎病毒体外实验研究

目的:探讨肋柱花粉剂体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:将肋柱花粉剂作用于HepG2.2.15细胞系,MTT法检测样品对HepG2.2.15细胞的毒性,ELISA法检测细胞上清中HBsAg、HBeAg的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞与其上清中总HBVDNA含量,综合评价肋柱花粉剂及胶囊剂体外抗HBV效果,并探讨其药理机制。结果:肋柱花对HepG2.2.15细胞毒性低,对细胞分泌HBsAg、HBeAg无抑制作用,对细胞内HBVDNA拷贝数有一定的抑制作用。结论:肋柱花在体外有一定的抗乙肝病毒作用,可能是通过抑制HBVDNA,诱导感染HBV的HepG2.2.15细胞凋亡而发挥抗病毒活性。

草乌不同药用部位的急性毒性实验研究

目的:评价草乌不同药用部位的急性毒性。方法:以草乌不同药用部位水煎醇提取液,经一次性灌胃予昆明种小鼠,并观察14d内小鼠的毒性反应及死亡情况。结果:生草乌LD50值为4.03g.kg-1,草乌叶LD50值为121.7g.kg-1,草乌花LD50值为125.3g.kg-1,草乌芽LD50值为136.2g.kg-1。结论:根据WHO急性毒性分级方法,初步认为生草乌煎煮后仍具有低毒,草乌芽、草乌花和草乌叶煎煮后均无明显毒性。

蒙药肝乐康胶囊剂抗乙型肝炎病毒体外实验研究

目的:探讨蒙药肝乐康胶囊剂体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:将蒙药肝乐康胶囊剂作用于HepG2.2.15细胞系,MTT法检测样品对HepG2.2.15细胞的毒性,ELISA法检测细胞上清中HBsAg、HBeAg的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞与其上清中总HBVDNA含量,综合评价蒙药肝乐康胶囊剂体外抗HBV效果,并探讨其药理机制。结果:蒙药肝乐康胶囊剂对HepG2.2.15细胞毒性低,对细胞分泌HBsAg、HBeAg较弱的抑制作用,对细胞内HBVDNA拷贝数有一定的抑制作用。结论:蒙药肝乐胶囊剂在体外有一定的抗乙型肝炎病毒作用,可能是通过抑制HBVDNA,诱导感染HBV的HepG2.2.15细胞凋亡而发挥抗病毒活性。

蒙药枸杞子-7防治子宫内膜异位症复发作用的实验研究

目的评价蒙药枸杞子-7防治子宫内膜异位症复发的药理作用。方法以手术法制备子宫内膜异位症复发大鼠模型,以蒙药枸杞子-7灌胃治疗14 d,分别在给药第1、7、14 d测量异位包块大小,末次给药后麻醉处死大鼠,测定血清E2和P含量,观察子宫组织病理组织学变化。结果与空白组相比,模型组血清E2和P含量升高(P<0.05);与模型组相比,蒙药枸杞子-7组血清E2和P含量下降(P<0.05),病理学变化好转。结论蒙药枸杞子-7在14 d内可有效防治子宫内膜异位症复发。该研究为枸杞子进一步开发研究提供了坚实的工作基础。

蒙药那如-3抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究蒙药那如-3的镇痛、抗炎作用。方法:采用热板刺激、冰醋酸刺激小鼠扭体、小鼠耳肿胀、大鼠棉球致肉芽肿及角叉菜胶致大鼠足肿胀等方法研究蒙药那如-3的镇痛及抗炎作用。结果:蒙药那如-3能明显抑制大鼠足跖肿胀度(P<0.05),明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀(P<0.01),抑制棉球埋藏引起的慢性肉芽肿(P<0.01);延长小鼠疼痛反应时间(P<0.05),减少小鼠扭体次数(P<0.01)。结论:蒙药那如-3具有显著的镇痛、抗炎作用。

浅谈蒙药学研究生教育教学模式改革思路

通过对蒙医药学院高等教育和蒙医药产业发展的现状分析,借鉴国内外研究生培养的经验,浅谈对蒙药学研究生教育教学模式改革思路,提出探索性的几点建议。

蒙药枸杞子-7与P4503A和GSH-Px活性相关性研究

目的:通过动物实验了解蒙药枸杞子-7体内代谢过程,为临床合理用药提供科学依据。方法:本实验以小鼠的研究对象,以枸杞子-7为示例药物,每天灌胃1次,连续灌胃给药10d,提取微粒体,以酶标仪测定其P4503A和GSH-Px活性。结果:与正常对照组相比,蒙药枸杞子-7大、中、小剂量组肝脏组织中的GSH-Px活性显著降低(P<0.05),枸杞子-7中剂量组P4503A活性明显上调(P<0.05)。结论:初步认为蒙药枸杞子-7可能是GSH-Px抑制剂;枸杞子-7体内代谢与P4503A有关。