目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·...目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·L-1组。24 h后,实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形态发生蛋白7(Bmp7)和基质成分Ⅰ型胶原a1(Col1a1)和Ⅲ型胶原a1(Col3a1)m RNA的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果与正常细胞对照相比,AA处理后,肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1,α-SMA和Col3a1 m RNA表达上调,上皮标志物E-钙黏着蛋白m RNA的表达受到抑制,而且导致了Notch1、Jagged1 m RNA表达的上调和Numb m RNA表达的下调(P<0.05),提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积,同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后,Notch1(P<0.01)和Jagged1(P<0.05)的m RNA表达下调,Numb m RNA表达上调(P<0.05),说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外,与AA损伤组相比,DAPT也降低了TGF-β1,α-SMA,Col1a1和Col3a1 m RNA表达(P<0.05),提高BMP-7和E-钙黏着蛋白m RNA表达(P<0.05),提示DAPT抑制了AA诱导的上皮细胞的表型转化与基质累积。结论 DAPT抑制AA诱导的肾小管上皮细胞的表型转化与基质累积,其可能机制是DAPT靶向干预Notch信号的活化。展开更多
目的:研究敲除核因子E2相关因子(Nrf2)对肾组织中肌成纤维细胞的活化及间质纤维化的影响。方法:将实验小鼠分成Nrf2野生型假手术组、Nrf2野生型单侧输尿管梗阻(UUO)组、Nrf2敲除型假手术组、Nrf2敲除型UUO组4个小组,每组6只。生化分析...目的:研究敲除核因子E2相关因子(Nrf2)对肾组织中肌成纤维细胞的活化及间质纤维化的影响。方法:将实验小鼠分成Nrf2野生型假手术组、Nrf2野生型单侧输尿管梗阻(UUO)组、Nrf2敲除型假手术组、Nrf2敲除型UUO组4个小组,每组6只。生化分析仪检测血肌酐和尿素氮水平;糖原染色(PAS)观察肾组织损伤程度;Masson染色评价肾间质总胶原累积情况;免疫组织化学染色分析肌成纤维细胞标志物α-SMA、基质成分III型胶原及TGF-β1的表达;RT-q PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果:与Nrf2野生型假手术组比,Nrf2野生型UUO组血肌酐和尿素氮水平明显升高(P<0.05)。Nrf2敲除型UUO组血肌酐和尿素氮水平与Nrf2野生型UUO组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。PAS染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织损伤明显加剧(P<0.01)。Masson染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾间质总胶原累积明显增加(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织α-SMA和III型胶原的表达明显增加(P<0.05),而这可能与Nrf2敲除所致的TGF-β1 m RNA和蛋白表达提高有关(P<0.05)。结论:Nrf2敲除可加剧输尿管梗阻引起的肾损伤及纤维化程度,其机制可能为Nrf2敲除通过提高TGF-β1水平,进而促进肌成纤维细胞过度活化和胶原在肾间质的过度累积。展开更多
文摘目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·L-1组。24 h后,实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形态发生蛋白7(Bmp7)和基质成分Ⅰ型胶原a1(Col1a1)和Ⅲ型胶原a1(Col3a1)m RNA的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果与正常细胞对照相比,AA处理后,肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1,α-SMA和Col3a1 m RNA表达上调,上皮标志物E-钙黏着蛋白m RNA的表达受到抑制,而且导致了Notch1、Jagged1 m RNA表达的上调和Numb m RNA表达的下调(P<0.05),提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积,同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后,Notch1(P<0.01)和Jagged1(P<0.05)的m RNA表达下调,Numb m RNA表达上调(P<0.05),说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外,与AA损伤组相比,DAPT也降低了TGF-β1,α-SMA,Col1a1和Col3a1 m RNA表达(P<0.05),提高BMP-7和E-钙黏着蛋白m RNA表达(P<0.05),提示DAPT抑制了AA诱导的上皮细胞的表型转化与基质累积。结论 DAPT抑制AA诱导的肾小管上皮细胞的表型转化与基质累积,其可能机制是DAPT靶向干预Notch信号的活化。
文摘目的:探讨Hedgehog(HH)信号通路的活化和抑制对肾小管上皮细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为对照组、活化组(10μg/L Shh)和干预组(10μg/L Shh加5μmol/L环杷明)。细胞培养24 h后,细胞免疫荧光染色检测HH信号关键分子Ptch1、Smo和Gli1,以及细胞增殖标志物PCNA的表达,real-time RT-PCR检测Ptch1和Smo m RNA的表达。结果:免疫荧光染色显示,对照组细胞维持一定的增殖状态,HH信号活性较低,PCNA表达水平较低;当外源性重组蛋白Shh活化NRK-52E细胞24 h后,Smo和Gli1 m RNA和蛋白表达显著升高,Ptch1的表达显著下调,这提示Shh可激活HH信号(P<0.05)。在此过程中,PCNA表达水平显著升高,NRK-52E细胞数量增加,同时伴随细胞形态的改变;在Shh的基础上加入环杷明干预后,HH信号被抑制(P<0.05),PCNA表达下降,NRK-52E细胞增殖被抑制,出现凋亡或坏死。结论:HH信号与肾小管上皮细胞的增殖密切相关。通过药物调控HH信号的活化,可影响PCNA的表达,进而影响细胞增殖效应。
文摘目的:研究敲除核因子E2相关因子(Nrf2)对肾组织中肌成纤维细胞的活化及间质纤维化的影响。方法:将实验小鼠分成Nrf2野生型假手术组、Nrf2野生型单侧输尿管梗阻(UUO)组、Nrf2敲除型假手术组、Nrf2敲除型UUO组4个小组,每组6只。生化分析仪检测血肌酐和尿素氮水平;糖原染色(PAS)观察肾组织损伤程度;Masson染色评价肾间质总胶原累积情况;免疫组织化学染色分析肌成纤维细胞标志物α-SMA、基质成分III型胶原及TGF-β1的表达;RT-q PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果:与Nrf2野生型假手术组比,Nrf2野生型UUO组血肌酐和尿素氮水平明显升高(P<0.05)。Nrf2敲除型UUO组血肌酐和尿素氮水平与Nrf2野生型UUO组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。PAS染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织损伤明显加剧(P<0.01)。Masson染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾间质总胶原累积明显增加(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织α-SMA和III型胶原的表达明显增加(P<0.05),而这可能与Nrf2敲除所致的TGF-β1 m RNA和蛋白表达提高有关(P<0.05)。结论:Nrf2敲除可加剧输尿管梗阻引起的肾损伤及纤维化程度,其机制可能为Nrf2敲除通过提高TGF-β1水平,进而促进肌成纤维细胞过度活化和胶原在肾间质的过度累积。
