狂犬病毒内部蛋白和细胞因子的免疫学进展

狂犬病毒内部蛋白和细胞因子的免疫学进展张德礼，白泉阳，高显明，高步先（北京军区后勤部卫生防疫队，北京军区兽医防治中心病毒基因工程研究室，北京１０００７１）狂犬病毒是弹状病毒科狂犬病毒属的典型种，具有脂蛋白包膜，包膜内囊有螺旋对称的核衣壳，其核酸是单股...

检测猪源牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR方法的建立与监测分析

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′-UTR保守序列建立的特异性荧光RT-PCR,对采自福州市周边屠宰场的359份屠宰猪血清进行BVDV感染的病原学检测。结果待检的359份血清样品BVDV阳性52份,阳性率为14.5%(52/359)。对其中13份BVDV阳性样品5′端UTR片段进行序列测定分析,发现所测13份BVDV阳性样品5′端UTR片段均与VEDEVAC进化谱系较为密切,均为基因Ⅰ型。以上结果表明以牛源BVDV建立的特异性荧光RT-PCR方法适用于猪源BVDV感染的监测,并揭示福州市屠宰猪存在BVDV感染。

H9亚型禽流感病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较

将禽流感病毒(AIV)接种犬肾上皮细胞(MDCK),24h后以鸡抗禽流感抗体和兔抗鸡荧光抗体进行间接免疫荧光试验(IFA),结果于细胞核、细胞质内观察到特异性的荧光。利用96孔细胞板培养MDCK细胞,以间接免疫荧光作为判定指标对禽流感病毒进行毒力测定,并与禽流感病毒通用荧光反转录-聚合酶链反应(荧光RT-PCR)检测方法进行比较。结果表明间接IFA、荧光RT-PCR对同一样品检测的最高稀释度分别为10-5.25TCID50和10-6,Ct<30,两种方法对禽流感病毒的检测敏感性均很高。但由于荧光RT-PCR仅对抽提的RNA进行检测,而间接IFA是对禽流感活病毒进行检测,因此在临床样品检测和动物产品检疫中间接IFA更具准确性和实用性。

不同咸蛋腌制温度对禽流感毒灭活的影响

经人工接种H9亚型禽流感病毒(AIV)的鸭蛋,分别在12℃、22℃和32℃条件下按常规方法腌制于饱和盐水中,同时以置饱和盐水中的禽流感病毒和未经处理禽流感病毒样品作为对照,通过MDCK细胞培养、间接免疫荧光方法定期进行禽流感病毒毒力测定,结果在12℃、22℃和32℃条件下腌制鸭蛋中的禽流感病毒分别于49天、27天和4天失去毒力,置饱和盐水中的禽流感病毒分别在27天、9天和2天失去毒力,而未经处理的禽流感病毒分别在92天、29天和17天失去毒力;不同试验温度条件下,以荧光RT-PCR检测腌制鸭蛋和对照样品中的禽流感病毒,在100天后仍可检出病毒核酸(Ct<30)。以上检测结果表明,在腌制鸭蛋时于常温下置饱和盐水腌制40天以上的传统咸蛋生产工艺,可使禽流感病毒完全失去毒力,腌制的鲜咸蛋携带或传播禽流感病毒的风险极低或不存在风险。

鸭疫里氏杆菌敏感烈性噬菌体的分离鉴定

为探索鸭疫里氏杆菌病的生物疗法,以富集法对健康番鸭的粪便进行了分离,获得1株鸭疫里氏杆菌敏感的烈性噬菌体,命名为RAP15。该噬菌体能裂解2株鸭疫里氏杆菌(RAf63和RAf71),说明噬菌谱较窄。透射电镜观察结果显示,该噬菌体由呈多面体的头部(直径约55 nm)和细长的尾部(长约200 nm)组成。RAP15的基因组可以被DNaseⅠ消化,但不能被RNase A和绿豆核酸酶消化,提示其核酸类型为双股DNA。形态学和分子特征提示,RAP15属于长尾病毒科。

进境蜜蜂疫病传入风险分析

为有效防范疫病传入,保护国内生态和环境安全,本文根据新西兰风险分析模型,从传入释放的可能性、定殖和扩散的可能性以及对经济和生态的潜在危害性3个方面对进境蜜蜂所可能携带的病毒、细菌、真菌、寄生物和敌害等危害进行风险分析。结果表明,蜂群崩溃失调病Colony Collapse Disorder、美洲幼虫腐臭病American Foulbrood、欧洲幼虫腐臭病European Foulbrood、武氏蜂盾螨Acrapis woodi、小蜂螨Tropilaelaps spp.、狄斯瓦螨Varroa destructor、蚤蝇Apocephalus borealis和蜂巢小甲虫Small Hive Beetle(Aethina tumida Murray,SHB)等8种病虫害能给国内蜜蜂带来一定的风险,根据风险评估结果,提出了相应的风险管理措施。研究结果能为制定相应的检疫措施提供科学依据。

纳米胶体金免疫标记技术在牛病检测中的研究和应用

作者综述了以胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法为代表的纳米胶体金免疫标记技术近年来在牛病检测方面的研究和应用进展,并分析和预测其应用前景,为该技术在牛病临床检测领域的进一步研究与应用提供参考。

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。

尼帕病毒巢式RT-PCR方法的建立和初步应用

目的建立灵敏、特异的检测尼帕病毒的巢式RT-PCR方法。方法根据GenBank公布的尼帕病毒N基因序列,设计2对特异性引物(外引物和内引物),建立巢式RT-PCR方法,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行临床样品的检测。结果该方法扩增的片段序列与源序列同源性均为100%。特异性试验结果表明本试验设计的内外侧引物不能从新城疫病毒、牛瘟病毒和日本乙型脑炎病毒中扩增出条带。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测出的标准模板RNA浓度为39fg/μL。100份临床样品检测结果全部为阴性。结论初步建立了快速、灵敏、特异的检测尼帕病毒N基因的巢式RT-PCR方法,可用于动物疫病监测和检验检疫等领域。

猪链球菌2型实验室检测技术的进展

猪链球菌可引起猪的一种以发烧、败血症、脑膜炎、肺炎、关节炎等为主要特征的传染病,其中以2型流行最广,危害最大,是一种重要的人畜共患病原菌。本文综合了近年来国内外猪链球菌2型实验室检测技术的有关成果,从微生物学诊断、分子生物学诊断和动物试验等方面进行了较全面的论述,以期为实验室检测人员提供有益的资料。

进口鱼粉中沙门菌监测与分析

为了解进口鱼粉中沙门菌的污染状况,给制定相关的检验检疫措施提供必要的理论依据,对2011年到2014年期间来自18个国家的543份鱼粉样品进行沙门菌检测。鱼粉样品经过增菌、沙门茵平板分离、VITEKⅡ生化试验和血清学鉴定后,共分离鉴定到27株沙门菌,分属于B、C、E 3个群。沙门茵的总检出率为4.97%,且来自不同国家的鱼粉阳性率不同。结果显示,进口鱼粉中存在着不同程度的沙门菌污染,应加强进口鱼粉的检疫和监管,减少沙门菌病的发生。

噬菌体对感染鸭疫里默氏菌鸭的疗效

为观察5株鸭疫里默氏菌敏感的烈性噬菌体对传染性浆膜炎的治疗效果,将鸭疫里默氏菌RAf71人工感染樱桃谷鸭的同时皮下注射噬菌体,结果显示,不同的噬菌体能对鸭疫里默氏菌的人工感染提供不同程度的保护,噬菌体RAP44的保护率最高;噬菌体RAP44的含量越高,保护率越高。试验表明,噬菌体RAP44具备临床应用潜力,可作为生物防治鸭疫里默氏菌病的候选噬菌体株。

应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法。【方法】基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性。【结果】以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的。优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5μmol/L,扩增循环数35次。对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性。将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4 h,具有良好的适用性。【结论】研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫。

进境甲壳类水生动物风险分析

我国是一个渔业大国,也是一个水产养殖大国,有数以百万计的人以渔业和水产养殖为生,然而水生动物疾病给水产养殖行业造成的经济损失越来越巨大,每年我国因渔业病害带来的经济损失达100多亿元。近年来我国从境外引进水产苗种逐年增多,随之而来的是一些新的水生动物疫病开始传人我国,这些新的水生动物疫病来到了新的气候环境,面对新的养殖结构,摆脱了其在源发地的一些天然控制机制的束缚,呈现出暴发式的流行,给我国的养殖业带来巨大的经济损失。

从台湾地区输入牛肉及其产品传入动物疫病的风险分析

根据风险分析基本原理,通过危害识别、风险评估和风险管理3个阶段,对从台湾地区输入牛肉及产品进行动物疫病传入风险分析。通过对29种牛病进行危害识别,结果发现有12种病存在潜在危害;通过进一步风险筛选,发现有7种疫病需要进行风险评估。评估结果显示,口蹄疫、副结核病、牛病毒性腹泻的风险高,能带来一定危害。根据风险分析结果,可以考虑在确定台湾地区动物检疫和卫生条件已经达到要求的情况下,采取相应的风险管理措施,有条件地从台湾地区进口相关牛肉及其产品。

从台湾地区输入羊肉及其制品传入动物疫病的风险分析

本文借鉴新西兰风险分析模型,从动物疫病传入释放可能性、定殖扩散可能性以及对经济和生态的潜在危害性等3个方面,对从台湾地区输入羊肉进行了动物疫病传入风险分析。结果表明,口蹄疫和绵羊/山羊痘2种动物疫病能给大陆地区养羊业带来较高风险。根据风险分析结果,提出了相应的风险管理措施。

病毒载体疫苗研究进展

从非复制性病毒（家禽痘、野鸟痘、痘苗和人类腺病毒）载体重组活疫苗、腺病毒载体重组口服活疫苗和杆状病毒载体重组亚单位疫苗三方面，评述了以病毒为表达载体的基因工程疫苗近年研究取得的重大进展。

牛分枝杆菌抗体的时间分辨荧光检测方法的建立

牛结核病（Bovine tuberculosis，BT）主要是由牛分枝杆菌（Mycobacterium boris）引起的动物和人的一种慢性细菌性疾病，以在多种组织器官中形成结核结节，继而结节中心干酪样坏死或钙化为病理特征。世界动物卫生组织（OIE）将牛结核病列为B类动物传染病，在我国被列为二类动物疫病。