鹅不食草心菊内酯对肝星状细胞PI3K/Akt和NF-κB 信号通路的调控作用

目的:研究鹅不食草心菊内酯对IL-1β刺激下LX-2人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)PI3K/Akt和NF-κB信号通路的影响。方法:将LX-2细胞分为正常对照组、模型组、LY294002组及鹅不食草心菊内酯高(2μmol/L)、中(1μmol/L)、低(0.5μmol/L)浓度组。除正常对照组外,其余各组均采用白细胞介素1β(IL-1β)刺激30 min使其增殖活化后,再加入相应药物干预24 h。采用MTT法检测LX-2细胞增殖;试剂盒法检测细胞上清液AST、ALT、LDH水平;实时荧光定量PCR检测相关mRNA表达;Western blot法检测PI3K/Akt和NF-κB信号通路中相关蛋白表达。结果:鹅不食草心菊内酯能显著抑制IL-1β刺激下LX-2细胞活化与增殖,降低细胞内Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、PI3K、P70S6K、Akt、NF-κB P65 mRNA表达,并能显著降低PI3K、P70S6K、Akt、P65、IκBα蛋白磷酸化水平。结论:鹅不食草心菊内酯可显著抑制IL-1β激活的LX-2细胞活化与增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。

敲低Raf激酶抑制蛋白促进LX-2人肝星状细胞增殖

目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在LX-2人肝星状细胞增殖中作用。方法将RKIP小干扰RNA(siRNA-RKIP)重组质粒转染至LX-2细胞,培养5 d,并筛选出稳定转染的细胞。MTT法检测沉默RKIP后LX-2细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期;实时定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和1型胶原蛋白(Col1)mRNA的表达。Western blot法检测RKIP、α-SMA、Col1及胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组相比,RKIP低表达明显诱导LX-2细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加G2期细胞比例,提高Col1、α-SMA mRNA和蛋白表达。此外,RKIP的沉默明显提高ERK/MAPK磷酸化水平。结论敲低RKIP的水平促进LX-2细胞的增殖,其机制与激活ERK/MAPK信号通路有关。

基于网络药理学探讨木棉花抗肝癌作用研究

目的:基于网络药理学、分子对接探究中药木棉花抗肝癌的作用机制。方法:通过Pharmmapper、Ctdbase、TargetNet数据库筛选木棉花作用靶点,借助GeneCards、Disgenet疾病数据库筛选肝癌靶点,取木棉花与肝癌交互靶点;运用STRING数据库与Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络;基于DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析;TIMER和HPA数据库进行核心靶点基因与蛋白表达情况验证;Autodock软件进行分子对接预测。结果:筛选得到木棉花与肝癌共同靶点33个;预测得出ESR1、TNF、EGFR、MDM2、RELA、PTPRC、JAK2、AR、MMP9、MET等10个核心靶点;主要涉及Ras、MAPK、PI3K/Akt等信号通路;分子对接显示活性成分菠菜甾醇、豆甾醇、槲皮素、4-乙烯基氯苄、橙皮素与ESR1蛋白均有较好的结合活性。结论:木棉花抗肝癌作用可能与干预ESR1、TNF、EGFR、MDM2、RELA、PTPRC、JAK2、AR、MMP9、MET等核心靶点进而参与Ras、MAPK、PI3K/Akt等信号通路调控有关。

鹅不食草心菊内酯对肝星状细胞活化的抑制作用机制研究

目的研究鹅不食草心菊内酯(helenalin)对LX-2人肝星状细胞(HSCs)活化的抑制作用及其机制。方法用白细胞介素-1β(IL-1β)20 ng·mL^-1刺激LX-2细胞建立体外细胞模型,另取未刺激细胞作为正常组。将损伤细胞分为5组:模型组、阳性对照组[LY294002(磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶通路抑制剂)20μmol·L^-1]和高、中、低3个剂量实验组(helenalin:2.0,1.0,0.5μmol·L^-1),均干预24 h。用四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量-PCR法检测微小RNA-21(miR-21)基因的表达,蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达(光密度值)。结果Helenalin作用24 h时的IC_(50)为6.98μmol·L^-1,根据细胞的增殖抑制率,选择低于IC_(50)的3个浓度(2.0,1.0,0.5μmol·L^-1)作为后续实验的给药浓度。正常组、模型组和高、中、低3个剂量实验组的miR-21基因相对表达量分别为0.99±0.15,1.71±0.07,1.03±0.04,1.01±0.02和1.19±0.12;正常组、模型组、阳性对照组和高、中、低3个剂量实验组的总凋亡率分别为(1.45±0.33)%,(1.93±0.55)%,(23.33±0.49)%,(19.77±0.65)%,(10.70±0.75)%和(3.01±0.38)%;上述6组的α-SMA蛋白相对表达量分别为0.19±0.02,0.26±0.04,0.15±0.02,0.15±0.02,0.18±0.04和0.20±0.04;上述6组的I型胶原蛋白相对表达量分别为0.15±0.02,0.39±0.05,0.19±0.01,0.24±0.04,0.37±0.04和0.38±0.06;上述6组的Ⅲ型胶原蛋白相对表达量分别为0.07±0.01,0.31±0.04,0.09±0.01,0.05±0.01,0.05±0.01和0.18±0.02。上述指标:模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);3个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论Helenalin抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝星状细胞的增殖活化、诱导细胞凋亡和减少活化细胞内胶原的合成并下调miR-21基因的表达有关。