目的 观察脂肪来源间充质干细胞外泌体(exosomes from adipose derived mensenchymal stem cells, ADSCs-exo)对小鼠树突状表皮T细胞(dendritic epidermal T cells,DETC)及皮肤创面炎症反应调控的影响。方法 自2023年1—12月,解放军总...目的 观察脂肪来源间充质干细胞外泌体(exosomes from adipose derived mensenchymal stem cells, ADSCs-exo)对小鼠树突状表皮T细胞(dendritic epidermal T cells,DETC)及皮肤创面炎症反应调控的影响。方法 自2023年1—12月,解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部采用Ⅰ型胶原酶消化法提取ADSCs,收集ADSCs培养上清液利用差速超速离心法提取ADSCs-exo。原代提取并培养DETC,利用流式技术对细胞纯度进行鉴定;利用刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)构建体外DETC细胞炎症模型,用不同浓度的ADSCs-exo对DETC处理后,采用RT-q PCR法检测细胞中IL-2、IL-17A的m RNA表达。构建C57小鼠背部皮肤全层皮肤缺损创面模型,依次分为空白对照组、PBS注射组、ADSCs-exo注射组,蛋白质免疫印迹法检测各时间段创缘皮肤IL-17A、Akt、P-Akt表达情况;利用流式细胞分析技术观察创缘DETC表达情况。结果 DETC体外炎症模型中,ConA组IL-2、IL-17A m RNA表达量均明显高于Control组,ConA+ADSCs-exo各组IL-2、IL-17A m RNA表达量相较于ConA组不同程度降低。在小鼠创面愈合过程中可以观察到ADSCs-exo组小鼠创缘皮肤IL-17A含量要低于PBS组和对照组,而P-Akt表达量要高于PBS组和对照组。小鼠急性创伤造模后第1天,PBS组和ADSCs-exo组创缘DETC表达程度均明显高于对照组。急性创伤后第3天,PBS组创缘DETC表达量仍明显高于对照组;ADSCs-exo组DETC表达出现下降,基本降至对照组水平。结论 ConA能较好诱导活化DETC分泌表达IL-17A和IL-2,而ADSCs-exo能显著抑制其IL-2、IL-17A的表达。在小鼠创面愈合过程中,ADSCs-exo能抑制创缘皮肤IL-17A的表达、提高Akt蛋白磷酸化水平。急性创伤能提高创面DETC表达;ADSCs-exo对于DETC并无明显的趋化富集作用,但却能在较短时间内抑制DETC的表达,避免创面持续、过度的炎症反应发生。展开更多
文摘目的 观察脂肪来源间充质干细胞外泌体(exosomes from adipose derived mensenchymal stem cells, ADSCs-exo)对小鼠树突状表皮T细胞(dendritic epidermal T cells,DETC)及皮肤创面炎症反应调控的影响。方法 自2023年1—12月,解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部采用Ⅰ型胶原酶消化法提取ADSCs,收集ADSCs培养上清液利用差速超速离心法提取ADSCs-exo。原代提取并培养DETC,利用流式技术对细胞纯度进行鉴定;利用刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)构建体外DETC细胞炎症模型,用不同浓度的ADSCs-exo对DETC处理后,采用RT-q PCR法检测细胞中IL-2、IL-17A的m RNA表达。构建C57小鼠背部皮肤全层皮肤缺损创面模型,依次分为空白对照组、PBS注射组、ADSCs-exo注射组,蛋白质免疫印迹法检测各时间段创缘皮肤IL-17A、Akt、P-Akt表达情况;利用流式细胞分析技术观察创缘DETC表达情况。结果 DETC体外炎症模型中,ConA组IL-2、IL-17A m RNA表达量均明显高于Control组,ConA+ADSCs-exo各组IL-2、IL-17A m RNA表达量相较于ConA组不同程度降低。在小鼠创面愈合过程中可以观察到ADSCs-exo组小鼠创缘皮肤IL-17A含量要低于PBS组和对照组,而P-Akt表达量要高于PBS组和对照组。小鼠急性创伤造模后第1天,PBS组和ADSCs-exo组创缘DETC表达程度均明显高于对照组。急性创伤后第3天,PBS组创缘DETC表达量仍明显高于对照组;ADSCs-exo组DETC表达出现下降,基本降至对照组水平。结论 ConA能较好诱导活化DETC分泌表达IL-17A和IL-2,而ADSCs-exo能显著抑制其IL-2、IL-17A的表达。在小鼠创面愈合过程中,ADSCs-exo能抑制创缘皮肤IL-17A的表达、提高Akt蛋白磷酸化水平。急性创伤能提高创面DETC表达;ADSCs-exo对于DETC并无明显的趋化富集作用,但却能在较短时间内抑制DETC的表达,避免创面持续、过度的炎症反应发生。