原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的生物学特性比较

目的：建立高效脐静脉内皮细胞（human umbilicalvein endothelial cell,HUVEC）体外培养方法,与HUVEC株生物学特性进行对比研究,为组织工程及相关医学基础研究提供更好的细胞来源.方法：在新鲜脐静脉内灌注2.5g/L胰蛋白酶消化获得内皮细胞,内皮细胞培养基（endothelial cellmedium,ECM）进行培养;RPMI1640培养HUVEC株.比较两组细胞形态;免疫组化、RT-PCR检测vWF,CD144的表达;Western Blot检测两组冻存复苏后细胞vWF,CD144蛋白水平的表达.结果：原代HUVEC体外生长2~3d可铺满单层,细胞呈梭形、饱满,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;HU-VEC株胞质多颗粒,细胞单薄.免疫组化原代HUVEC的vWF和CD144表达明显高于HUVEC株[vWF分别为（142.7±3.3）,（113.6±0.7）;CD144分别为（118.6±0.5）,（74.2±0.4）;P〈0.01].在mRNA水平,原代HUVEC基因CD144（577bp）的表达量为HUVEC株的（3.15±0.12）倍（P〈0.05）;vWF（434bp）表达量为HUVEC株的（6.15±0.37）倍（P〈0.05）.蛋白水平冻存复苏的原代HUVEC的CD144（135ku）表达量为HUVEC株的（2.07±0.31）倍（P〈0.05）;vWF（210ku）表达量为HUVEC株的（5.38±0.23）倍（P〈0.05）.结论：脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可迅速获取大量内皮细胞,其生物学特性明显优于HUVEC株,是组织工程及相关医学基础研究更好的细胞来源.

EC9706肿瘤条件培养基对树突状细胞的影响

目的:探讨食管癌EC9706细胞肿瘤条件培养基模拟的体外肿瘤微环境对人单核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响。方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含rhGM-CSF和rhIL-4的RPMI1640培养液诱导DC。第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入含rhGM-CSF、rhIL-4的EC9706肿瘤条件培养基;第4天加入超声破碎法制备的EC9706抗原;第6天加入脂多糖。第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC),显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a基因的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其诱导的细胞毒T细胞(CTL)的增殖能力及对EC9706细胞的杀伤能力。结果:第8天,与正常成熟DC相比,TADC细胞呈发育迟缓状态,CD86、CD1a及CD11c表达降低(P<0.01),CD1a基因不表达(正常DC较强表达),TADC体外刺激形成的CTL增殖率及对EC9706细胞的杀伤率均降低(P<0.01)。结论:EC9706肿瘤条件培养基所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。

食管癌组织微环境对树突状细胞的影响

目的:探讨食管癌组织匀浆上清液体外模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,揭示肿瘤免疫逃逸机制,为DC疫苗的应用提供理论基础。方法:制备新鲜食管癌及癌旁组织匀浆上清液,ELISA检测其VEGF-A含量。密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,含rhGM-CSF和rhIL-4RPMI1640培养液诱导DC,第2天在继续诱导DC基础上设食管癌匀浆上清组、癌旁匀浆上清组、VEGF-A组,均隔天半量换液,第4天加入食管癌细胞株EC9706抗原,第6天加入脂多糖,第8天收集各组细胞。观察DC形态,流式细胞术(FCM)检测免疫表型,RT-PCR检测CD1a表达,CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率。结果:食管癌组织匀浆上清VEGF-A含量[(0.987±0.319)μg/L]明显高于癌旁[(0.152±0.105)μg/L,P<0.05];食管癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制,CD86分子阳性率(%)与正常DC相比由69±8降为42±11、CD1a由56±12降为27±12、CD11c由21±13降为18±13(P<0.01),CD1a基因几乎无表达,刺激T细胞增殖率(%)由112.5±7.2降为70.2±3.5(P<0.01),杀伤率(%)由62.4±0.6降为46.8±1.6(P<0.01);癌旁匀浆上清液组、VEGF-A组结果与正常DC组无统计学意义。结论:食管癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,在该抑制作用中VEGF-A并不起主要作用。

原发性输卵管恶性肿瘤46例临床病理分析

目的:探讨原发性输卵管恶性肿瘤的病理组织类型及临床特征。方法:回顾性分析46例原发性输卵管恶性肿瘤的临床资料及病理特点。结果:原发性输卵管恶性肿瘤患者大部分为绝经后妇女(80.43%),阴道异常排液或流血是最常见的症状,盆腔包块是最常见的体征;病理类型主要为输卵管浆液性腺癌(93.47%),单侧发病居多(69.57%);免疫组化显示原发性输卵管癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素体(FR)的阳性率分别为34.88%(15/43)和23.25%(10/43),高于正常输卵管组织的10%(1/10),差异有统计学意义(P<0.05);原发性输卵管癌组织P53阳性表达率为58.13%(25/43),10例正常输卵管组织未见表达,输卵管癌与正常输卵管组织P53阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:输卵管恶性肿瘤多为浆液性腺癌;在原发性输卵管癌中,ER、PR高于正常组织表达;P53基因的突变可能参与了该肿瘤的发生,并可作为综合判断其恶性程度及患者预后的指标之一。

CD4^+ D25^+调节性T细胞在晚期食管癌中的表达及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在食管癌中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术分析60例食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,与20例健康对照组比较。结果:食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量增加(15.9±4.1)%,表达高于正常人(5.91±3.7)%(P<0.001)。食管癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关(P>0.05),但与淋巴结转移和组织学分化程度有关(P<0.01)。结论:Treg细胞在食管癌患者中比率明显升高,是患者免疫功能紊乱的一个证据。

富于T淋巴细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤临床病理分析

目的探讨富于T淋巴细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(THRLBCL)的组织病理学特征、免疫表型、临床特点。方法回顾性分析郑州大学第二附属医院病理科和河南省肿瘤医院病理科2013年5月至2018年9月确诊的12例THRLBCL患者的临床病理资料,并辅以免疫组化及原位杂交的方法进行分析。结果 12例THRLBCL患者年龄22~74岁,中位年龄58.5岁。男女比例7:5。临床首发症状主要为发热和淋巴结肿大。临床分期主要为Ⅲ~Ⅳ期(75%)。6例累及骨髓,5例累及脾脏,2例累及肝脏。病理检查组织均为淋巴结组织,镜下可见异形大B细胞散布于丰富的小T淋巴细胞和多少不一的组织细胞背景中。肿瘤性大B细胞CD20、BCL6、PAX5阳性,CD30、CD15阴性。背景细胞中的T淋巴细胞CD3、CD5阳性,组织细胞CD68、CD163阳性。EBER原位杂交示EB病毒阴性。结论 THRLBCL组织学形态背景富于T淋巴细胞和组织细胞,肿瘤细胞阳性表达CD20、BCL6、PAX5,阴性表达CD30、CD15,背景T淋巴细胞阳性表达CD3、CD5,组织细胞阳性表达CD68、CD163。该肿瘤应与结节型淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤、经典型富于淋巴细胞型霍奇金淋巴瘤及T淋巴细胞淋巴瘤相鉴别。其发病与EB病毒感染无关。

SISH检测乳腺癌HER2基因及17号染色体倍体分析

目的:评价银增强原位杂交(SISH)用于乳腺癌患者人表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增状态检测的可行性和17号染色体多体的发生情况及其意义。方法:对90例手术后乳腺浸润性导管癌患者标本行全自动免疫组织化学(IHC)染色检测HER2蛋白表达,荧光原位杂交(FISH)和SISH检测HER2基因状态及17号染色体多体的发生率。结果:在IHC(3+)、(2+)、(1+/0)3组中,SISH检测与FISH检测在检测HER2基因扩增方面的总体符合率为96%。17号染色体多体的发生率在IHC(3+)、(2+)、(1+/0)3组中分别为44%,26%和0.02%,其总的发生率为18%。结论:SISH技术用于乳腺癌HER2基因状态检测结果与FISH相当,具有可行性和实际使用价值;17号染色体可能与乳腺癌患者的预后有关。

局部晚期宫颈癌患者血清双肾上腺素样激酶1、黏蛋白1的表达及与放疗预后的关系

目的探讨局部晚期宫颈癌患者血清双肾上腺素样激酶1(DCLK1)、黏蛋白1(MUC1)的表达及与放疗预后的关系。方法收集102例局部晚期宫颈癌患者的临床资料,分析不同临床特征、临床疗效和预后患者血清DCLK1、MUC1表达水平,比较放疗前后患者血清DCLK1、MUC1表达水平。结果不同肿瘤直径、淋巴结转移情况、临床分期和分化程度局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1表达水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。放疗后,局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1表达水平均明显低于放疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同临床疗效局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1表达水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01),且放疗前局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1水平均随着疾病发展逐渐升高。3年生存局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1水平均明显低于1年生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论局部晚期宫颈癌患者血清DCLK1、MUC1表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移情况、临床分期和分化程度有关,放疗前血清DCLK1、MUC1水平与患者临床疗效和预后密切相关,可作为判断肿瘤转归和评估放疗预后的重要指标。

Claudin家族与食管癌发生发展的关系

闭合蛋白(Claudin,CLDN)家族是一种上皮细胞间紧密连接的骨架蛋白,其表达异常可引起细胞黏附性减弱、分化程度降低及侵袭性增加。近年来,许多研究表明CLDN与各种恶性肿瘤的发生发展密切相关。CLDN已经被发现在许多肿瘤细胞中表达,不同组织或细胞中的表达具有明显差异性。然而,其在食管癌发生发展中的表达变化及调控机制暂不明确。研究者们进行了大量临床及基础实验,试图对CLDN的异常表达与食管癌的发生发展的关系进行研究,为未来食管癌的治疗特别是探讨转移机制提供新的分子生物学标志物。本文将对CLDN家族在食管癌中的表达、对肿瘤发生发展的影响及其分子机制进行分类阐述。

外周T细胞淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析

目的分析外周T细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法应用RT—PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3基因，并经基因扫描确定T细胞克隆性，对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物测序分析其CDR3序列。结果4例淋巴瘤患者TCR表达受到明显抑制，仅表达1～4个Vβ亚家族。所有患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增生T细胞，增生形式包括单克隆、双克隆及寡克隆增生趋势。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论外周T细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生，其TCR Vβ呈限制性取用，不同克隆T细胞具有不同的CDR3谱型。

不同病理分型乳腺黏液癌的临床病理特点、Gli1蛋白表达及其相关性

目的:探究不同病理分型乳腺黏液癌的临床病理特点、Gli1蛋白表达及两者的相关性。方法:抽取2018年3月至2022年3月河南省肿瘤医院收治的乳腺黏液癌110例为研究对象,按照病理分型分为单纯型组(58例)与混合型组(52例)。收集两组患者的临床资料,包括肿瘤长径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴转移情况、雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达、人表皮生长因子受体2(HER2)表达。统计不同病理特征的Gli1蛋白表达情况。结果:混合型组肿瘤长径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴转移情况、ER表达、PR表达、HER2表达情况与单纯型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤长径≥2 cm、临床分期Ⅲ期、组织学分级Ⅲ级、腋窝淋巴转移阳性、ER表达阴性、PR表达阳性、HER2表达阳性患者具有较高的Gli1蛋白表达阳性率(P<0.05)。结论:乳腺黏液癌病理特点与Gli1蛋白表达紧密相关,Gli1蛋白可能是评估乳腺黏液癌诊断及预后有效指标,有可能成为有效药物靶点。

结肠癌组织微环境对树突状细胞的影响

目的探讨结肠癌组织匀浆上清液模拟肿瘤微环境对人树突状细胞（DC）分化发育的影响，以及血管内皮生长因子A（VEGF-A）在其中所起的作用。方法制备新鲜结肠癌及癌旁组织匀浆上清液。分离人外周血单个核细胞，含重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和rhIL-4的1640培养液诱导DC，第2天在此基础上设结肠癌匀浆上清组、癌旁组织匀浆上清组、VEGF-A组及正常DC组，第4天加入结肠癌细胞株SW620抗原，第6天加入脂多糖，第8天收集各组细胞。ELISA检测肿瘤组织匀浆上清液中VEGF-A含量。观察DC形态，流式细胞术检测其免疫表型，RT-PCR检测CD1a表达，CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率。结果结肠癌组织匀浆上清VEGF-A含量明显高于癌旁组织（P〈0．05）；与正常DC组相比，结肠癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制，数目减少，表面抗原表达率明显下降（P〈0．01），混合淋巴细胞反应能力及杀伤力也明显下降（P〈0．01）；而VEGF-A组细胞数目及形态与正常DC组相比无明显改变，对所检测的DC表面抗原并无明显抑制（P〉0．05），但在功能实验中它却起到了明显抑制T细胞增殖及杀伤功能的作用。结论结肠癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用，在该过程中VEGF-A起到抑制T细胞免疫功能的作用，但该作用并非通过抑制DC共刺激分子表达而实现。

超声造影引导下细针穿刺活检诊断早期浸润性乳腺癌腋窝前哨淋巴结转移的价值

目的探讨超声造影(contrast-enhanced ultrasound, CEUS)引导下细针穿刺组织活检在早期浸润性乳腺癌腋窝前哨淋巴结转移诊断中的价值。方法早期浸润性乳腺癌患者176例,均行CEUS检查,对检出前哨淋巴结者先行CEUS引导下细针穿刺组织活检再行前哨淋巴结活检术(sentinel lymph node biopsy, SLNB),未检出前哨淋巴结者直接行SLNB,并根据SLNB结果判定是否行腋窝淋巴结清扫术。以SLNB结果为金标准,评估CEUS引导下细针穿刺组织活检诊断早期浸润性乳腺癌腋窝前哨淋巴结转移的价值。结果 176例患者中,170例CEUS检出前哨淋巴结261枚,其中CEUS引导下细针穿刺组织活检诊断淋巴结转移93例;176例SLNB检出前哨淋巴结351枚,组织病理检查证实腋窝前哨淋巴结转移100例。以SLNB结果为金标准,CEUS引导下细针穿刺组织活检诊断早期浸润性乳腺癌患者腋窝前哨淋巴结转移的灵敏度为93.0%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为90.9%,准确率为95.9%。结论前哨淋巴结CEUS引导下细针穿刺组织活检在早期浸润性乳腺癌患者腋窝前哨淋巴结转移诊断中具有较高的价值。

儿童胰腺实性假乳头状瘤12例临床诊治分析

目的 探讨儿童胰腺实性假乳头状瘤的诊断与外科治疗经验.方法 回顾性分析2004年1月至2016年12月郑州大学附属肿瘤医院收治的12例儿童实性假乳头状瘤患儿临床资料,包括一般资料、影像学检查资料、手术方式、术后并发症、随访等情况.结果 12例患儿中男3例,女9例;平均年龄14.3岁（11 ～17岁）.位于胰头4例（33.3％,4/12例）,胰体尾8例（66.7％,8/12例）.临床表现主要为腹痛[33.3％（4/12例）]、腹部包块[16.7％（2/12例）]及外伤后发现[16.7％（2/12例）].肿瘤平均直径8.2 cm（4.0～15.3 cm）;彩超提示不均质回声肿块、边界清楚;CT提示肿瘤为低密度囊实性肿块,边界清楚,增强扫描后肿瘤实性成分及周边呈不规则强化,12例均无周边及实性成分钙化;磁共振成像动态增强扫描检查提示肿瘤实性成分渐进性强化.12例患儿均行手术治疗,行保留器官功能手术4例,行淋巴结清扫4例,保留脾脏胰体尾切除术2例,肿瘤局部切除1例,行胰体尾联合脾脏切除并自体脾片移植1例.4例并淋巴结切除者,共检测淋巴结21枚,均为阴性淋巴结.术后病例诊断胰腺实性假乳头状瘤明确,3例为恶性胰腺实性假乳头状瘤,其中1例并肿瘤破裂出血.平均随访57.7个月（19～156个月）,均无复发转移.结论 胰腺实性假乳头状瘤是一种少见儿童肿瘤,多有临床症状而就诊,首选保留器官功能的手术治疗,手术治疗可获得良好效果.

肝滤泡树突状细胞肉瘤一例并文献复习

目的探讨肝滤泡树突状细胞肉瘤(FDCS)的临床特点。方法回顾性分析2004年郑州大学附属肿瘤医院收治的1例肝FDCS患者临床资料。患者已签署知情同意书,符合医学伦理学规定。患者女,49岁。因上腹部疼痛1月余入院。体检示剑突下可触及12 cm×12 cm肿块,质硬,活动度差,压痛。实验室检查基本正常。CT平扫示肝左叶实性占位,直径约20 cm;增强扫描示动脉期肿瘤不规则强化,延迟期强化减退,肿瘤呈低密度灶。临床诊断为原发性肝癌。结果经过积极术前准备,于2004年8月31日在气管插管全身麻醉下行左半肝切除术。术中见肿瘤位于肝左外叶,大小约23 cm×20 cm,质韧,瘤旁子灶形成,腹腔、盆腔内及腹膜均未见明显转移灶。术后病理学检查示炎性假瘤样FDCS,免疫组化法检查示CD21、CD23、CD35,波形蛋白(VIM)阳性。患者分别于2006年至2014年多次于肝脏、腹腔、胸壁等处发现肿瘤复发转移并行切除术。目前患者病情稳定,定期随访,至投稿日期未见复发或转移。结论肝FDCS是一种极为罕见的疾病,确诊依赖于病理学检查结果。手术切除肿瘤是可靠的治疗手段,预后较好。