siRNA沉默肾上腺髓质素基因对A375黑素瘤细胞周期的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默A375黑素瘤细胞肾上腺髓质素(ADM)基因对其细胞周期的影响。方法利用人工合成的ADM靶向小分子干扰RNA转染A375细胞,采用实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)筛选出有效的siRNA,用选出的干扰效果最好的siRNA转染的A375细胞为实验组;转染非特异序列的细胞为阴性对照组;未转染的细胞为空白对照组。流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞周期的情况。结果 FCM结果显示,siRNA干扰组G2/M期细胞比率为(11.360±1.224)%,明显高于未转染组的(1.020±0.990)%和非特异序列转染组的(4.150±1.032)%,差异有统计学意义(P<0.05);未转染组与非特异序列转染组差异无统计学意义(P>0.05)。而siRNA干扰组G1/G0、S期细胞比率分别为(69.443±2.023)%、(19.197±0.890)%,与未转染组(68.567±3.653)%、(30.417±4.582)%和非特异序列转染组(70.530±3.008)%、(23.313±4.645)%比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论 ADM能够将黑素瘤细胞阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖。

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究

目的探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。方法应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。结果转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05)。未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低。

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响

目的探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响。方法体外培养转染T-cadherin的黑素瘤细胞株B16F10(转染T-cadherin组),以及转染pEGFP-N1空载体(转染空载体组)和未转染的黑素瘤细胞株B16F10(未转染组),采用MTT法和流式细胞技术检测黑素瘤B16F10细胞株的增殖凋亡情况。结果 MTT结果显示,转染T-cadherin组细胞吸光度(OD)值(0.383±0.116)明显低于未转染组(1.142±0.053)和转染空载体组(1.250±0.055),差异有统计学意义(P<0.05),未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染T-cadherin组细胞的凋亡率[(28.157±3.692)%]远远高于未转染组[(2.893±0.454)%]和转染空载体组[(2.350±0.578)%],差异有统计学意义(P<0.05);未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T-cadherin对B16F10黑素瘤细胞的增殖有抑制作用,对其凋亡有促进作用。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂和化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效比较

目的比较表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼片和化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和安全性。方法选取2012年5月至2013年5月河北燕达医院收治的177例经病理学确诊的晚期NSCLC患者,按照治疗方法不同分为靶向组和化疗组,其中靶向组(88例)行盐酸埃克替尼片治疗,化疗组(89例)行培美曲塞联合顺铂治疗。比较两组患者5年生存率、无进展生存期、总生存期、疾病控制率、总缓解率和不良反应发生情况。结果随访至2018年7月30日,失访36例(靶向组17例,化疗组19例),失访率为20.34%;靶向组的无进展生存期为24.7个月,明显长于化疗组15.4个月(P<0.05),总生存期为39.7个月,显著长于化疗组16.8个月(P<0.05),5年生存率显著高于化疗组[85.92%(61/71)比45.71%(32/70)](P<0.05)。靶向组患者疾病控制率显著高于化疗组[46.48%(33/71)比12.86%(9/70)],总缓解率高于化疗组[14.89%(21/141)比0.71%(1/141)](P<0.05)。靶向组患者5年后临床治疗效果显著高于化疗组(P<0.05)。两组患者发生的不良反应均以Ⅰ~Ⅱ级和程度不等的Ⅲ级不良反应为主,未发生Ⅳ度不良反应,靶向组患者的不良反应发生率显著低于化疗组(P<0.05)。结论盐酸埃克替尼片靶向治疗晚期NSCLC患者具有较好的临床疗效,能够提高疾病控制率和总缓解率,延长5年生存率、无进展生存期和总生存期,不增加药物不良反应的发生率。

稳定表达T-钙粘蛋白黑素瘤细胞株建立及鉴定

目的:研究T-钙粘蛋白在黑素瘤中的作用,因此首先建立稳定表达T-钙粘蛋白基因的黑素瘤细胞株。方法:应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1/T-cadherin转染到黑素瘤细胞株中,以梯度浓度的G418进行筛选,获得稳定表达克隆;采用荧光显微镜、RT-PCR、Western-blot和免疫细胞化学鉴定。结果:G418筛选14d后,800μg/ml为最佳筛选浓度,600μg/ml为最佳维持培养浓度。筛选后形成抗性细胞克隆,成功转染的细胞在荧光显微镜下观察发出绿色荧光;RT-PCR扩增出T-钙粘蛋白RNA预期的片段;Western-blot、免疫细胞化学证实转染的细胞有T-钙粘蛋白的表达;未转染的细胞则不表达。结论:pEGFPN1/T-cadherin成功转染至黑素瘤细胞株并稳定表达。