肾移植术后巨细胞病毒感染的危险因素分析和血清甘露聚糖结合凝集素的预测价值

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(CMV)感染的危险因素,观察天然免疫分子甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对于肾移植术后CMV感染的预测价值。方法选择2010年1月到2011年6月在山东大学附属山东省千佛山医院接受肾移植的83例受者作为研究对象。入选受者均经伦理委员会批准及其本人的同意。所有受者随访时间≥6个月。随访期间定期采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血液、尿液CMV脱氧核糖核酸(DNA)拷贝数,血液或浓缩尿中检测CMVDNA≥103copies/ml诊断为CMV感染。将83例受者分为CMV感染组和非CMV感染组,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组肾移植受者术前血清MBL水平并进行比较。将可能影响CMV感染的6项指标先进行单因素分析,将有统计学意义的因素再进行多因素分析(Logistic回归),筛选出CMV感染的独立危险因素。结果随访6个月内共有18例(22%)受者发生CMV感染(CMV感染组),另65例受者未发生CMV感染(非感染组)。CMV感染组受者的术前血清MBL水平明显低于非感染组受者,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。18例CMV感染受者经更昔洛韦治疗后,病毒拷贝数下降转阴,无一例发生CMV肺炎或移植物失功。单因素分析发现术前供体CMV血清学阳性/受体阴性(D+/R-)、MBL<500ng/ml、应用抗胸腺细胞球蛋白和发生术后排斥反应是CMV感染的危险因素(分别为P=0.018、0.001、0.011、0.005)。Logistic回归分析发现术前MBL水平<500ng/ml是CMV感染的独立危险因素,优势比为5.691,95%可信区间1.746～18.548,P=0.004。CMV血清学阳性/受体阴性(D+/R-)亦是CMV感染的独立危险因素,优势比为7.673,95%可信区间1.107～53.178,P=0.039。结论术前MBL水平(<500ng/ml)和术前供体CMV血清学阳性/受体阴性是肾移植术后CMV感染的独立危险因素。术前检测受者的血浆MBL水平对术后CMV感染有预测价值,一旦术前检测血浆MBL<500ng/ml可以术前提前应用抗病毒预防治疗。在供受体配对方面,应尽量避免将血清CMV阳性供肾移植给CMV阴性的受体。

鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移

目的确定鞘氨醇激酶(SPK)在肝癌转移中的作用。方法用Ad-SPK1腺病毒感染肝癌细胞LM-3使其SPK过表达,Western blot检测SPK1表达及激活情况;Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况。体外管状结构形成实验检测SPK对脐静脉内皮细胞(HUVEC)管状化形成的影响。建立SPK过表达裸鼠模型,体内检测肝癌迁移情况。结果在体外SPK对肝癌细胞的迁移无显著影响;Ad-SPK能够促进HUVEC管状结构形成;裸鼠皮下移植瘤结果显示Ad-SPK促进肿瘤生长和转移。结论鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移。

肝脏特异HPPCn转基因小鼠的建立及表型分析

目的建立高表达HPPCn转基因小鼠,为研究该基因在肝癌发生发展中的功能提供研究模型。方法显微注射外源基因pGEM-A1b/his-HPPCn至FVB/N小鼠原核,注射受精卵移植到假孕受体出生个体。PCR和Southern blot鉴定转基因小鼠基因型,Western blot和Realtime-PCR检测转基因阳性和阴性小鼠肝脏HPPCn蛋白表达情况,HE染色和透射电镜观察肝脏病理改变。结果经检测,显微注射共产生2只首建鼠,转入的重组HPPCn基因能在肝脏中特异表达,并能够稳定遗传。转基因小鼠肝脏内HPPCn含量明显增高。转基因后并未对小鼠造成不良影响。结论 HPPCn参与了肝癌发生发展的过程,其在体内的高水平表达,为在体内研究该基因的功能提供了工具。