乙肝病毒X基因可调控表达细胞模型的构建

利用四环素诱导型慢病毒系统(Lentil-XTMTet-On Advanced Inducible Expression System)构建了含有乙肝病毒X基因(HBx)的可诱导表达载体质粒,利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控元件rt-TA和HBx基因的病毒颗粒,滴度达到108LPs/mL。将两种病毒先后感染HepG2肝癌细胞系,分别利用G418和Puromycin抗生素筛选获得整合有HBx基因的稳定细胞株。在体系中加入Dox时,应用RT-PCR和Western blot方法验证了HBx基因的可诱导表达。可诱导表达细胞模型构建成功,为进一步研究HBx基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了一种较理想的试验模型。

小RNA的组成和功能——三类内源小RNA的研究概况

生物体中存在许多非编码的小RNA,可通过与靶mRNA完全或不完全的碱基互补配对,致使mRNA断裂或翻译抑制,从而达到调节基因表达的目的。这些小RNA组成了细胞中高度复杂的RNA调控网络,在生物的各项生理活动、生长发育过程中发挥着十分重要的作用。内源小RNA主要包括miRNA、siRNA和piRNA三类,概述这3种小RNA的生物发生,作用机制及功能等方面的研究进展。

慢病毒介导的HBV-X基因可调控表达小鼠模型的构建

理想动物模型的缺乏是乙型肝炎病毒(HBV)研究的一个重要障碍.本实验运用可调控慢病毒载体结合精子介导的方法构建体内乙型肝炎病毒X基因(HBV-X)可调控表达的转基因小鼠模型.首先构建了四环素调控的HBV-X基因可调控表达慢病毒颗粒,再对雄性小鼠进行睾丸注射,后与母鼠合笼,母鼠分娩获得子代小鼠,最后利用Southern blot,反向PCR,Western blot以及免疫组织化学等方法分别对子代小鼠体内病毒基因整合情况和可控诱导表达情况进行检测.结果提示子代小鼠体内成功整合HBV-X基因,并在强力霉素(Dox)诱导后,可表达目的蛋白,可调控转基因小鼠构建基本成功.