油菜亲和性根际菌株的筛选及其促生效果

【目的】从油菜根际土壤中筛选油菜亲和性根际菌株,以期获得油菜专用优良特异性根际促生菌。【方法】采用常规稀释平板法从油菜根际筛选油菜根际细菌,提取油菜凝集素进行复筛,获得油菜亲和性根际细菌,测定复筛菌株的产铁载体、吲哚乙酸(IAA)能力,以及1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶和溶磷活性,采用盆栽试验评价菌株对油菜的促生效果。【结果】经过复筛获得油菜亲和性根际细菌32株,其中30株菌株具有产铁载体能力,16株菌株的产铁载体能力达到5+水平;29株菌株具有溶磷活性,7株菌株产量达到100.00μg/mL;16株菌株能产IAA,菌株P17的产量最高,达到30.48mg/L;7株菌株具有ACC脱氨酶活性。盆栽试验表明,有25株菌株具有不同程度的促生作用,N10和K6促生作用显著,22株菌株的促生作用达到施全肥水平。【结论】采用凝集素作为筛选工具可以快速获得大量与油菜具有特异亲和性的PGPR菌株,菌株N10和K6作为油菜特异性PGPR具有很大的应用潜力。

药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究

以药用植物金银花为材料,对其根部、茎部、叶片不同部位的内生细菌进行分离纯化,对细胞特征采用革兰氏染色、芽孢染色法进行研究,结合菌落特征和生理生化特性将其内生细菌初步分为第1类型和第2类型两大类。采用稀释涂布法对金银花不同部位分别进行可培养内生细菌计数。结果表明,内生菌的总体数量分布为根部>叶片>茎部,说明内生细菌在金银花组织中的分布因部位不同而不同。基于细胞染色特征、显微观察结果和培养特性,内生菌中第1类型符合芽孢杆菌属(Bacillus)的特点,第2类型具有类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的特征。

慢性阻塞性肺疾病血栓前状态研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是我国常见病、多发病,发病率越来越高,其急性加重多由感染引起,核心是气道炎症。在炎症反复刺激过程中,不断的启动凝血纤溶系统,凝血功能改变,致血液高凝状态,即血栓前状态(PTS)。这种血栓前状态极易并发深静脉血栓、肺栓塞及心血管事件等。因此,COPD患者早期及时进行抗凝治疗越来越受到临床医生的重视,而低分子量肝素治疗是临床较为成熟安全有效的抗凝治疗措施。

小麦根际溶钾细菌对小麦生长和吸收钾素的影响

为了考察小麦根际亲和性溶钾细菌对小麦生长和小麦钾肥利用的影响,采用盆栽法栽培小麦,测定小麦干物质积累、叶片含钾量、土壤速效钾含量,考察溶钾细菌对小麦地上部分植株钾素积累量和钾肥利用率的影响。结果显示,11株溶钾细菌接种处理使小麦地上部分干重超过施100%钾肥的对照CK2的水平,WS25和WS27处理的小麦干物质积累极显著高于CK2,分别比CK2高11.66%和23.34%;在小麦苗期,11株溶钾细菌处理的小麦根干重和小麦植株钾素积累量均高于CK2;在旺长期,11株溶钾细菌处理的植株钾积累量均高于施50%钾肥的CK1,3株菌(WS25、WS27、WS28)处理的小麦植株钾素积累量高于CK2,其中WS27极显著高于CK2;11株溶钾细菌处理的钾肥利用率均高于CK1和CK2,其中WS27使得小麦的钾肥利用率在苗期和旺长期分别比CK2高出17%和40%。溶钾细菌可以促进小麦植株对土壤中钾素的吸收和利用,提高肥料利用率,促进小麦植株的生长和发育。

miR-22-3p靶向抑制SIRT1信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

目的探讨miR-22-3p是否通过沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路影响慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生发展。方法将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组,每组12只。对照组大鼠正常饲养,其他组大鼠建立香烟烟雾(CS)和脂多糖(LPS)诱导的COPD大鼠模型。CS暴露当天开始,模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组大鼠分别尾静脉注射生理盐水、antagomir-NC、antagomir-miR-22-3p和SIRT1抑制剂EX527,每2周注射1次,CS暴露90 d内共注射6次。CS暴露90 d后,使用肺功能分析系统测定肺功能指标:最大自主分钟通气量(MVV)、0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)和最大呼气峰流速(PEF)。按照ELISA试剂盒测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)水平。按照试剂盒说明对肺组织进行苏木素伊红(HE)染色。按照试剂盒说明检测肺组织氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)]。通过RT-PCR检测肺组织中miR-22-3p和SIRT1的mRNA水平。通过Western blot检测肺组织中SIRT1、核因子-κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65和叉头盒O3a(FoxO3a)蛋白表达。结果与模型组和antagomir-NC组比较,antagomir-miR-22-3p组大鼠中MVV、FEV0.3/FVC和PEF升高,BALF中IL-1β、TNF-α和MIP-2水平降低,肺组织病变减轻,肺组织中SOD和CAT水平升高,MDA水平降低,miR-22-3p水平降低,SIRT1 mRNA水平升高,SIRT1和FoxO3a蛋白水平升高,p-NF-κB p65蛋白水平降低(均P<0.05)。与antagomir-miR-22-3p组比较,antagomir-miR-22-3p+EX527组大鼠中MVV、FEV0.3/FVC和PEF降低,BALF中IL-1β、TNF-α和MIP-2水平升高,肺组织病变加重,肺组织中SOD和CAT水平降低,MDA水平升高,SIRT1 mRNA水平降低,SIRT1和FoxO3a蛋白水平降低,p-NF-κB p65蛋白水平升高(均P<0.05)。结论沉默miR-22-3p通过上调SIRT1的表达有效提高了COPD大鼠的肺功能并减轻了肺损伤。

α-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和FGF23表达的影响

目的探讨α-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和成纤维细胞生长因子23(FGF23)表达的影响。方法选取50只SPF级雄性SD大鼠建立卵白蛋白(OVA)诱导的哮喘SD大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、OVA组(哮喘模型大鼠)、OVA+40 mg/kg ALA组(采用40 mg/kg的α-亚麻酸治疗哮喘模型大鼠)、OVA+80 mg/kg ALA组(采用80 mg/kg的α-亚麻酸治疗哮喘模型大鼠)和OVA+Dex组(采用0.25 mg/kg的地塞米松治疗哮喘模型大鼠),每组10只。各组大鼠均连续治疗处理7 d。通过HE染色评价肺组织形态。通过ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17和IL-10的水平。采用自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。通过免疫组化、Western blot或qRT-PCR检测肺组织FGF23、FGFR4、Klotho、E-cadherin和α-SMA的表达。结果与OVA组相比,OVA+40 mg/kg ALA组、OVA+80 mg/kg ALA组和OVA+Dex组大鼠肺组织病变均明显减轻。与OVA组相比,OVA+40 mg/kg ALA组、OVA+80 mg/kg ALA组和OVA+Dex组大鼠BALF中IFN-γ和IL-10的水平升高,而IL-4和IL-17降低(均P<0.05)。与OVA组相比,OVA+40 mg/kg ALA组、OVA+80 mg/kg ALA组和OVA+Dex组大鼠血清中TC、TG和LDL水平降低,而HDL升高(均P<0.05)。与OVA组相比,OVA+40 mg/kg ALA组、OVA+80 mg/kg ALA组和OVA+Dex组大鼠肺组织E-cadherin的蛋白表达水平升高,而α-SMA降低(均P<0.05)。与OVA组相比,OVA+40 mg/kg ALA组、OVA+80 mg/kg ALA组和OVA+Dex组大鼠肺组织FGF23和FGFR4的mRNA和蛋白表达水平降低,而Klotho水平升高(均P<0.05)。结论α-亚麻酸可抑制哮喘大鼠的气道炎症和上皮-间充质转化、改善脂代谢,其机制可能是通过纠正Th1/Th2和Treg/Th17的失衡及调节FGF23-Klotho-FGFR4信号来实现的。

大黄素甲醚通过调节RAGE/MAPK信号通路减轻糖尿病性骨质疏松损伤

目的 探究大黄素甲醚(PHY)治疗糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠的效果及机制。方法 将大鼠分为对照组(n=15)、模型组(n=18)、PHY低剂量组(n=18)、PHY中剂量组(n=18)和PHY高剂量组(n=18)。对照组大鼠正常饲养,其他组大鼠通过高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)注射诱导建立DOP大鼠模型。建模成功后,PHY低、中和高剂量组大鼠分别灌胃2 ml的10,20,30 mg/kg大黄素甲醚;对照组和模型组大鼠分别灌胃2 ml 5%二甲基亚砜(DMSO)。各组大鼠均治疗12周。末次治疗24 h后,分别检测各组大鼠的空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、血清脂代谢指标(TC、TG、LDL-C、HDL-C)和血清氧化应激指标(SOD、CAT、GSH-PX和MDA)水平。通过HE染色评价大鼠胫骨组织学改变。通过micro-CT测量胫骨力学参数(BMD、Tb.N和Tb.Th)。通过免疫组织化学染色和Western blot检测RAGE、p38 MAPK和p-p38 MAPK的蛋白表达。通过qRT-PCR检测成骨/破骨基因(RAGE、Runx2、OCN、OPN、ALP、BMP-2、RANK、RANKL和OPG)的转录。结果 与对照组比较,模型组大鼠中FPG和FINS水平升高,血清TC、TG和LDL-C水平升高,HDL-C水平降低,血清SOD、CAT和GSH-PX水平降低,MDA水平升高,胫骨出现明显的骨质疏松,胫骨BMD、Tb.N和Tb.Th水平降低,胫骨组织中Runx2、OCN、OPN、ALP、BMP-2和OPG的mRNA相对表达量降低,RANK和RANKL mRNA相对表达量升高,RAGE的mRNA和蛋白水平及p38 MAPK的磷酸化水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,PHY低剂量组、PHY中剂量组和PHY高剂量组大鼠的FPG和FINS水平降低,血清TC、TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平升高,血清SOD、CAT和GSH-PX水平升高,MDA水平降低,胫骨组织形态改善,胫骨BMD、Tb.N和Tb.Th水平升高,胫骨组织中Runx2、OCN、OPN、ALP、BMP-2和OPG的mRNA相对表达量升高,RANK和RANKL mRNA相对表达量降低,RAGE的mRNA和蛋白水平及p38 MAPK的磷酸化水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与PHY低剂量组比较,PHY中剂量组和PHY高剂量组大鼠中FPG和FINS水平降低,血清TC、TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平升高,血清SOD、CAT和GSH-PX水平升高,MDA水平降低,胫骨组织形态改善,胫骨BMD、Tb.N和Tb.Th水平升高,胫骨组织中Runx2、OCN、OPN、ALP、BMP-2和OPG的mRNA相对表达量升高,RANK和RANKL mRNA相对表达量降低,RAGE的mRNA和蛋白水平及p38 MAPK的磷酸化水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 大黄素甲醚治疗DOP大鼠具有良好的效果,其机制可能与促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞分化和RAGE/MAPK信号通路有关。

沙门氏菌检测的三种方法比对的结果与讨论

参加此次能力验证再次确认实验室检测能力;探求快速、灵敏、可靠的食品中沙门氏菌的检测方法。方法:采用沙门氏菌的国标方法、Petrifilm TM测试纸片法和VIDAS免疫法的定性研究。结果:编号为CODE 2和CODE4的样品为阳性结果,其余四个样品均未检出。结论:3种方法检测沙门氏菌均取得满意结果;进一步确认了本实验室对本实验的能力;Petrifilm TM测试纸片法,简单,方便准确率高,在食品检测中应用中值得推广。

芝麻素通过抑制AKT/GSK3β/NFATc1信号通路减轻2型糖尿病大鼠骨质疏松症

目的:探究芝麻素对2型糖尿病性骨质疏松症(T2DOP)的治疗作用及其可能机制。方法:将健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、低剂量芝麻素组(L-Ses组)和高剂量芝麻素组(H-Ses组),每组10只。模型组、L-Ses组和H-Ses组大鼠给予高脂高糖饲料喂饲4周,并一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量35 mg/kg)溶液建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型。造模成功后,L-Ses组和H-Ses组大鼠分别按照10 mg/kg和40 mg/kg的剂量给予芝麻素灌胃处理,每日1次,持续药物处理8周。对照组和模型组大鼠同时间段给予等量的生理盐水灌胃处理。分别检测大鼠血清中空腹血糖值(Fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)、糖化血红蛋白(Glycosylated hemoglobin,HbA1c)、血清总胆固醇(Serum total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的水平。采用苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色检测大鼠股骨组织形态。μCT扫描仪分析大鼠股骨干骺端三维结构以及骨密度(Bone mineral density,BMD)、骨小梁数(Trabecular number,Tb.N)和骨小梁厚度(Trabecular thickness,Tb.Th)参数,Western blot检测骨形成指标骨碱性磷酸酶(Bone alkaline phosphate,BALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、成骨相关基因2(Runt-related transcription factor 2,Runx2),以及磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphoinositide 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)/糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)/活化T细胞核因子1(Nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清FPG、FINS、HBA1c、TC、TG、LDL-C和MDA水平均升高(P<0.05),HDL-C、SOD、CAT和GSH水平均降低(P<0.05);股骨组织中骨小梁断裂状态较多,排列紊乱,骨质严重流失,BMD、Tb.N和Tb.Th均降低(P<0.05),股骨组织中BALP、OCN和Runx2蛋白表达水平均降低(P<0.05),AKT和NFATc1蛋白磷酸化水平均升高(P<0.05),GSK3β蛋白磷酸化水平降低(P<0.05)。与模型组比较,L-Ses组和H-Ses组大鼠血清中FPG、FINS、HBA1c、TC、TG、LDL-C和MDA水平均降低(P<0.05),HDL-C、SOD、CAT和GSH水平均升高(P<0.05);股骨组织中骨小梁断裂状态较少,排列、形态结构和骨质流失均呈现较大改善,BMD、Tb.N和Tb.Th均升高(P<0.05),股骨组织中BALP、OCN和Runx2蛋白表达水平均升高(P<0.05),AKT和NFATc1蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05),GSK3β蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。与L-Ses组比较,H-Ses组大鼠血清中FPG、FINS、HBA1c、TC、TG、LDL-C、SOD、CAT、GSH和MDA水平均降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);大鼠股骨组织和形态稍有缓解,BMD、Tb.N和Tb.Th均升高(P<0.05),股骨组织中BALP、OCN和Runx2蛋白表达水平均升高(P<0.05),AKT和NFATc1蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05),GSK3β蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。结论:芝麻素可能通过抑制AKT/GSK3β/NFATc1信号通路,促进骨形成,进而缓解T2DOP大鼠的骨质疏松症进展。

miR-22-3p通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

目的:探索miR-22-3p对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的影响及作用机制。方法:将7周龄(体重250~280 g)雄性SD大鼠随机分为5组(n=12):对照组(Con组)、COPD组、COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+mi R-22-3p-antagomir组。Con组大鼠为正常饲养的大鼠,其他组大鼠均通过香烟烟雾(CS)和脂多糖(LPS)诱导COPD动物模型。在CS暴露当天,Con组和COPD组大鼠鼻腔内注射50μL生理盐水,COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠分别鼻腔内注射50μL 10 nmoL的NC-agomir、miR-22-3p-agomir、NC-antagomir和miR-22-3p-antagomir,每2周注射1次,共注射6次。CS暴露90 d后,检测各组大鼠的最大自主分钟通气量(MVV)、0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)和最大呼气峰流速(PEF)。通过ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)水平。通过苏木精-伊红(HE)染色评价肺组织损伤。根据试剂盒说明检测肺组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。通过RT-PCR检测肺组织miR-22-3p、磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD86、CD206和精氨酸酶1(ARG1)mRNA水平。通过Western blot检测肺组织PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子-κB(NF-κB)p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:与COPD组和COPD+NC-antagomir组相比,COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠的MVV、FEV0.3/FVC和PEF均升高(P<0.05);肺泡出血、肺泡壁断裂、肺泡间隔水肿和炎性细胞浸润等病变减轻;BALF中的IL-1β、TNF-α和MIP-2水平均降低(P<0.05);肺组织SOD水平升高,MDA水平降低(P<0.05);肺组织i NOS和CD86 mRNA相对表达量降低,CD206和ARG1 mRNA相对表达量升高(P<0.05);肺组织miR-22-3p相对表达量降低,PTEN mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:miR-22-3p在COPD大鼠肺组织中上调,可能通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路,促进肺组织炎症反应和氧化应激,加重大鼠肺功能障碍和肺组织结构损伤。

miR-204在肺动脉高压模型大鼠中的表达及作用机制研究

目的:探究miR-204在肺动脉高压(PAH)模型大鼠中的作用和相关分子机制。方法:采用一次性腹腔注射野百合碱(MCT,60 mg/kg)溶液方法构建PAH模型大鼠。将PAH大鼠分为PAH组、NC组和miR-204组,每组10只;另取15只健康SD大鼠作为对照组。采用HE染色检测大鼠肺和右心室组织病变,免疫组织化学染色法检测肺组织α-SMA蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因分析miR-204和Runx2关系。将人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)分为对照组、低氧组、mimics NC组、miR-204 mimics组、pcDNA3.1组和Runx2组。采用CCK-8法和EdU法检测PASMCs细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,Transwell实验检测PASMCs细胞迁移。qRT-PCR检测肺组织和PASMCs细胞中miR-204和Runx2表达水平。Western blot检测肺组织或PASMCs细胞中Runx2、α-SMA、CDKN4、Cyclin E和Cyclin D1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PAH组大鼠肺组织中miR-204表达水平降低(P<0.05),Runx2和α-SMA蛋白表达水平均升高(P<0.05),大鼠肺动脉血管壁增厚,管腔狭窄,心肌细胞肥大。与NC组比较,miR-204组大鼠肺组织中miR-204表达水平升高(P<0.05),Runx2和α-SMA蛋白表达水平均降低(P<0.05),大鼠肺动脉血管壁增厚和心肌细胞肥大得到显著改善。miR-204与Runx2存在靶向结合关系。与对照组比较,低氧组细胞miR-204表达水平和CDKN4蛋白表达水平以及G0/G1期分布比例均降低(P<0.05),Runx2 m RNA和蛋白以及Cyclin E和Cyclin D1蛋白表达水平均升高(P<0.05),细胞增殖水平和迁移数量均升高(P<0.05)。与mimics NC组比较,miR-204 mimics组细胞miR-204表达水平和CDKN4蛋白表达水平以及G0/G1期分布比例均升高(P<0.05),Runx2 m RNA和蛋白以及Cyclin E和Cyclin D1蛋白表达水平均降低(P<0.05),细胞增殖水平和迁移数量均降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,Runx2组细胞miR-204表达水平和CDKN4蛋白表达水平以及G0/G1期分布比例均降低(P<0.05),Runx2 m RNA和蛋白以及Cyclin E和Cyclin D1蛋白表达水平均升高(P<0.05),细胞增殖水平和迁移数量均升高(P<0.05)。结论:miR-204在PAH模型大鼠中低表达,过表达miR-204可以抑制PASMCs细胞的增殖和迁移,促进细胞分裂阻滞在G0/G1期,该作用可能与靶向抑制Runx2蛋白表达有关。