中华绒螯蟹点状产气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

为确定诱发中华绒螯蟹肠炎的病原菌,筛选潜在的防控药物,采用传统方法从患肠炎的中华绒螯蟹体内分离到一株病原菌（DD5）,通过API20E 细菌鉴定系统和16SrDNA 序列分析对菌株DD5进行了鉴定,并采用KB纸片扩散法对菌株DD5的抗菌药物敏感性进行了测定.结果表明,菌株DD5为点状产气单胞菌（GenBank登录号：KP260655）,其16SrDNA 序列与基因库中气单胞菌属菌株的16SrDNA 序列有99% ～100% 的同源性,而且与点状产气单胞菌136c株（GenBank 登录号：EU488688）的亲缘关系最近.此外,菌株DD5对四环素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、复方新诺明等抗菌药物高度敏感.本研究证实点状产气单胞菌是中华绒螯蟹肠炎的病原菌,恩诺沙星、庆大霉素等常规渔药可作为点状产气单胞菌引起的中华绒螯蟹肠炎的防控用药.

斑马鱼hoxb7a基因在hox基因簇中的作用研究

斑马鱼hoxb7a基因是hox基因家族在进化过程中第7旁系同源组中仅存的基因。为了研究hoxb7a基因在整个hox基因簇中的作用,利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼hoxb7a基因进行编辑,T7E1结果显示F0敲除效率平均为43%,并在F2成功获得缺失8个碱基(Δ8bp)和缺失23个碱基(Δ23bp)的hoxb7a纯合突变体。进而利用实时荧光定量PCR技术检测48hpf野生型和hoxb7a突变体中旁系同源hox基因的表达量变化,QPCR结果显示,hoxb7a缺失后hox基因簇中相邻的hox基因表达量显著性升高(P<0.001),而基因组上距离hoxb7a较远的hox基因表达量未出现明显变化(P>0.05)。研究表明hoxb7a基因在整个hox基因簇中发挥重要调控作用,通过阐述hoxb7a的作用加深了对hox基因簇加倍后基因功能分化的认识。同时斑马鱼hoxb7a突变体的成功构建,为其基因功能机制的研究奠定了坚实基础。

转录因子Tbx5a与Nkx2.5结合共激活nppa启动子的初步分析

心脏是脊椎动物发育过程中最早形成的重要器官之一,而先天性心脏病(先心病)是常见的先天性畸形类疾病。其中,转录因子Tbx5突变是导致先心病心手综合征的重要原因,Nkx2.5与瓣膜缺失性先心病密切相关。本研究通过启动子构建探究心脏发育重要因子tbx5a与nkx2.5对下游基因nppa的调控作用。本研究通过PCR分别克隆了斑马鱼tbx5a与nkx2.5基因的全长序列1491 bp和957 bp,成功构建了pMEV-2×HA-tbx5a和pcDNA3.1-myc-nkx2.5表达载体。同时合成了斑马鱼nppa基因2014 bp的启动子序列,并构建了荧光素酶报告基因表达载体pGL3-nppa-luc。双荧光素酶报告基因检测(Luciferase)实验结果显示,转染pGL3-nppa-luc载体的293T细胞具有较空载组6.3倍的荧光素酶活性(p<0.001),表明该2014 bp的nppa序列具备其启动子活性。本研究进一步通过与nppa启动子分别转染tbx5a、nkx2.5及两者共转染的Luciferase实验发现,斑马鱼Tbx5a和Nkx2.5可以协同作用并激活基因nppa的表达12倍(p<0.001),表明Tbx5a与Nkx2.5结合对下游nppa具备显著上调作用。本研究为进一步揭示转录因子Tbx5a与Nkx2.5对nppa的调控及其在心脏发育中的作用奠定了基础。同时,本研究成功构建具备活性的斑马鱼nppa启动子,对研究其心脏发育相关信号通路的调控机制具有重要意义。