低氧诱导因子1及其相关调节蛋白研究进展

低氧诱导因子1(HIF-1)是生物体感应氧浓度变化的重要转录因子,是低氧信号通路的关键分子,在调节机体氧的稳态、生物体生理以及病理过程中发挥重要作用。HIF-1由HIF-1α和HIF-1β两个亚基组成。研究已证明有大量蛋白或因子通过与HIF-1α相互作用,调节HIF-1的降解过程或者蛋白活性,最终影响糖尿病、心脑血管疾病,特别是癌症的发生及发展。本文总结了近年来发现的与HIF-1α相互作用的分子及其作用机制。

以HIF2α为靶点的化合物筛选的细胞模型构建

目的建立稳定表达血管内皮生长因子A(VEGFA)启动子区5×缺氧反应元件(5×HRE)和萤光素酶(Luc)报告基因的人肾透明细胞癌(786-O)单克隆细胞系,构建以缺氧诱导因子2α(HIF2α)为靶点的化合物筛选的细胞模型,并对其应用加以初步验证。方法采用基因重组技术,构建含有VEGFA启动子区5×HRE以及Luc报告基因的慢病毒载体,并感染786-O细胞,经过嘌呤霉素筛选获得能稳定表达Luc活性的786-O-5×HRE-Luc细胞系;采用等浓度梯度稀释获得单克隆细胞系,运用HIF2α抑制剂PT2385和PT2399处理,检测Luc活性变化,筛选对PT2385和PT2399反应更灵敏的单克隆细胞系。结果通过基因测序鉴定,VEGFA启动子区5×HRE和Luc报告基因慢病毒表达载体构建成功,经过嘌呤霉素(Puro)筛选获得稳定表达Luc的786-O-5×HRE-Luc细胞;PT2385和PT2399可剂量依赖性降低细胞Luc的活性;得到对PT2385和PT2399反应灵敏的单克隆细胞系。结论建立了786-O-5×HRE-Luc稳定表达5×HRE和Luc报告基因细胞系,为高通量筛选靶向HIF2α的药物提供一类新的细胞模型。