中药复方从脾虚论治肝癌的作用机制研究

目的:探讨脾虚方对肝癌HepG2细胞凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养HepG2细胞,加入不同中药复方含药血清干预48 h后,用流式细胞仪检测含药血清对HepG2细胞凋亡的影响;Transwell实验检测药物对细胞侵袭能力的影响。结果:干预48 h后,毒痰瘀方组、脾虚方组及索拉非尼组HepG2细胞的凋亡率分别为(11.63±0.87)%、(12.47±0.56)%、(24.20±1.61)%,脾虚方组诱导细胞凋亡效果显著,与正常对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);毒痰瘀方组、脾虚方组及索拉非尼组的迁移细胞数分别为124.6±8.4、121.0±9.6、100.2±7.1,细胞侵袭数分别为80.4±7.6、89.2±8.4、71.4±7.3,脾虚方可有效抑制HepG2细胞的迁移、侵袭能力,与正常对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脾虚方药物血清具有促进HepG2细胞凋亡,抑制HepG2细胞迁移与侵袭的作用。

中医药治疗肝硬化研究进展

中医药通过辨证论治的个体化诊疗方案,在中医药治疗肝硬化上具有明显优势。作者主要介绍有效治疗肝硬化的中药复方、中成药及相关单味药,指出中医药治疗肝硬化的相关机制及靶点尚不明确,仍需我们进一步去研究。

基于毒痰瘀虚理论的抗癌中药对HepG2细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:分析基于毒痰瘀虚理论的抗癌中药对HepG2细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的体外作用。方法:实验大鼠随机分空白组、阴性血清组、索拉菲尼组、全方组、脾虚组、肾虚组、肾阳虚组、肾阴虚组及毒痰瘀组9组,予相应药物灌胃,制备不同含药血清并与HepG2细胞共培养,以流式细胞术检测HepG2细胞凋亡率,Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:不同含药血清作用于HepG2细胞24 h后,与空白组或阴性血清组比较,药物组细胞凋亡率显著升高(P<0.05或P<0.01);全方组促进HepG2细胞凋亡效果优于拆方组方组(P<0.05)。以Western Blot检测不同组Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达,与空白组和阴性血清组比较,各药物组p-GSK-3β、c-myc、cyclinD1、β-catenin、MMP2表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),索拉菲尼组、全方组、脾虚组、肾虚组、肾阳虚组中p-GSK-3β、c-myc、cyclinD1、β-catenin表达下降更为显著(P<0.01);药物组中,索拉菲尼组与全方组相关蛋白表达下降最为显著(两组中相关蛋白表达量差异无统计学意义,分别与拆方组比较时P<0.01)。结论:基于毒痰瘀虚理论的抗癌中药可明显促进HepG2细胞凋亡、下调Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达,全方效果明显优于其拆方组方,全方对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用接近于索拉菲尼。

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P<0.01),对细胞的迁移无明显影响(P>0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。

中药复方对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的:探讨中药复方对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-,MMP-2)及基质金属蛋白酶的组织抑制因子-2(tissue Inhibitor of Matrix Metalloproteinase-2,TIMP-2)表达的影响。方法:将108只小鼠按照随机数字表法分为中药复方I组、中药复方J组、中药复方K组、中药复方L组、空白模型组及对照组,每组各18只。采用血吸虫尾蚴经皮感染小鼠腹部的方法将中药复方I组、中药复方J组、中药复方K组、中药复方L组、空白模型组小鼠制备肝纤维化模型。将基于毒、痰、瘀、虚四大证候要素进行组方的中药复方分别灌胃中药复方I组、中药复方J组、中药复方K组、中药复方L组小鼠,空白模型组与对照组灌胃生理盐水。HE染色后,光镜下观察小鼠肝脏病理切片肝纤维化程度; Masson染色后,采用SABC免疫组织化学技术半定量观察各组小鼠肝脏病理切片中肝组织表达MMP-2、TIMP-2的变化。结果:中药复方L组MMP-2表达最高,TIMP-2表达最低,与中药复方K组、中药复方J组、中药复方I组、空白模型组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。病理结果显示,中药复方L组小鼠的肝脏纤维化程度最低,中药复方K组、中药复方J组、中药复方I组、空白模型组小鼠的肝脏纤维化程度依次加重。结论:血吸虫性肝纤维化小鼠具有毒、痰、瘀、虚的证候要素特点,中药复方能明显改善血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织中MMP-2和TIMP-2的含量。

基于毒痰瘀虚理论的中药复方对肝癌小鼠肿瘤组织的抑制作用

目的:观察基于毒痰瘀虚理论的中药复方及拆方组方对肝癌小鼠肿瘤组织及p-GSK3β、β-catenin蛋白的影响。方法:40只昆明小鼠随机分为8组:空白组、索拉菲尼组、全方组、脾虚组、肾虚组、肾阳虚组、肾阴虚组、毒痰瘀组,构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,每组小鼠予以相应药物灌胃,连续给药2周后,比较肿瘤抑制率,以免疫组化法分析瘤体内微血管密度(MVD),Western blot法检测肿瘤组织中p-GSK3β、β-catenin蛋白的表达。结果:肿瘤体积比较,各中药组小鼠肿瘤体积均小于空白组(P<0.01),全方组、脾虚组小鼠肿瘤体积无明显差异,次于索拉菲尼组,优于其他拆方组(P<0.05);MVD值比较,各中药组小鼠MVD值均低于空白组(P<0.01),全方组、脾虚组、肾虚组、肾阳虚组小鼠MVD值均低于毒痰瘀组(P<0.05);p-GSK3β、β-catenin蛋白表达量比较,各中药组小鼠p-GSK3β、β-catenin蛋白表达量低于空白组(P<0.01或P<0.05),肾虚组小鼠β-catenin蛋白除外,全方组小鼠p-GSK3β蛋白表达量低于其他拆方组方组(P<0.01或P<0.05),索拉菲尼组与全方组小鼠p-GSK3β蛋白表达无明显差异(P>0.05),毒痰瘀组小鼠p-GSK3β蛋白表达量高于其他各中药组(P<0.05)。结论:基于毒痰瘀虚理论的中药复方及其拆方组方均可显著抑制H22肝癌小鼠瘤体及微血管的生长、降低p-GSK3β、β-catenin蛋白的表达,在抑制p-GSK3β、β-catenin蛋白表达方面全方效果更好,其不同拆方组方在抗癌疗效方面有所侧重。

补肾祛邪方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎多中心临床研究中受试者临床依从性及其影响因素

目的探讨补肾祛邪方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎多中心临床研究中患者临床依从性及影响因素。方法选择2012年6月至2016年8月参加国家中医临床研究基地(湖北)重点病种的全国13个临床研究中心的慢性乙型肝炎患者,给予恩替卡韦和补肾祛邪方治疗。回顾性分析受试者的临床依从性,以"到诊率法"对受试者依从性进行评估,应用Logistic回归分析临床依从性的影响因素。结果本研究共纳入受试者620例,随访48周,脱落59例(9.5%),完成所有访视者561例(90.5%),其中按时到访并按要求完成相关检查及试验相关临床资料填写者356例(63.5%),超窗到访或未按要求完成相关检查及试验相关临床资料填写者205例(36.5%)。不同区域受试者4、8、12、24、36、48周依从性均逐渐下降(P<0.01)。单因素分析显示,家族史、研究中心配备临床研究协调员(CRC)、慢性肝病生存质量问卷(CLDQ)、健康状况问卷(SF-36)、健康变化、中医证候积分6项临床依从性差异有统计学意义(P<0.05);回归分析显示,研究中心配备CRC、SF-36得分对临床依从性的影响比较突出,其中CRC与临床依从性呈正相关(P<0.05),SF-36得分与临床依从性呈负相关(P<0.05)。结论随着随访时间的延长按时到访率逐渐下降,研究中心配备CRC、SF-36得分可能是影响受试者临床依从性的重要因素。

中药复方体外抑制肝细胞增殖研究

目的:观察中药复方对H22细胞增殖率的影响。方法:通过CCK-8法,按照“毒”“痰”“瘀”“虚”的证候要素进行拆方、组方,形成6个中药复方组,作用于H22肝癌细胞,研究不同组别、不同时间的H22细胞增殖率。结果:同一浓度中药复方作用H22细胞72 h后效果最好(P<0.05),同一时间中药复方作用H22细胞10μg·L^-1浓度效果较好,且全方组和脾虚组效果明显(P<0.05)。结论:通过拆方、组方研究,为临床相关研究提供思路,为临床医师运用中医药诊疗原发性肝癌提供建议和思考。