线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔(mPTP)在天麻素抗氧化应激损伤的保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组:正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A(mPTP开放剂)观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷(ATP)试剂盒检测ATP的含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot检测细胞内细胞色素C(Cyt C)含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组(1.98±0.18 vs 3.08±0.14),差异有统计学意义(P=0.014)。环孢菌素A可以阻断氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用(P<0.05),并且在一定程度上阻断了天麻素的抗凋亡作用(5.77±0.75)%vs(1.97±0.82)%,两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。

离心速率对大鼠心肌细胞线粒体提取质量的影响

①目的探讨不同提取方案对心肌细胞线粒体质量的影响。②方法在体外用Langendorff法灌注雄性Wistar大鼠心脏,取左心室组织并分离线粒体; Western blot法检测确定分离线粒体的纯度,透射电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)检测分离线粒体的结构形态,线粒体呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR)测定分离线粒体的功能。③结果当分离转速为3500g时,与12000g相比,分离得到的线粒体Tubulin蛋白和COXⅣ蛋白表达均较低,表明低转速能够提高分离线粒体的纯度。与此结果一致,电镜结果显示与3500g组相比,12000g组可见较多微丝微管结构及线粒体内外膜分离。与12000g组相比,3500g组Ⅲ态呼吸及RCR值明显增高,表明低转速分离获得的线粒体呼吸功能增强。④结论低转速不仅可以提高分离线粒体的纯度,而且有利于维持分离线粒体的正常结构和功能。