前列腺癌细胞中多烯紫杉醇下调Smad3不依赖TGF-β1信号

多烯紫杉醇(Docetaxel,DOC)来源于欧洲红豆杉针叶,作为紫杉烷类抗癌药物,已被广泛应用于多种癌症临床治疗中,但相关机理还有很多不清楚的地方.本研究主要通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)等方法观察有TGF-b信号存在的前列腺癌细胞PC-3中DOC对Smad3表达水平的调控作用,再利用TGF-b RII缺失的前列腺癌细胞LNCa P来探讨不依赖TGF-b1信号时DOC对细胞生长、Smad3表达的影响及其分子机制.结果发现DOC不仅能以时间和浓度依赖方式下调PC-3细胞中Smad3的m RNA和蛋白表达水平,也能在LNCa P细胞中选择性地降低Smad3表达水平和抑制细胞生长,还能减少几乎不含TGF-b1的PC-3细胞中Smad3表达水平.同时,两种细胞中Stat1表达水平均受到DOC显著抑制,而且,Stat1和Smad3能相互结合形成复合体.进一步分析Smad3核心启动子区域也预测存在5个Stat1结合位点.这些结果说明DOC下调Smad3不依赖于TGF-b1信号通路,且可能是通过调控Stat1在Smad3启动子内的结合来作用.

雄激素依赖性前列腺癌细胞中雄激素受体上调EphA3表达

目的探讨雄激素依赖性前列腺癌细胞中促红细胞生成素产生肝细胞A型受体(EphA)3表达和雄激素受体(AR)信号通路的关联。方法首先通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)分别检测前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中EphA3和AR的mRNA及蛋白水平,然后用双氢睾酮(DHT)刺激48 h,测定细胞EphA3、AR和前列腺特异抗原(PSA)表达水平的变化。同时,将成功构建的荧光素酶报告基因重组质粒EphA3-Luc(-789^+146)与AR表达质粒pc DNA3.1(+)-AR或AR特异性小分子干扰RNA(si AR)共转染22Rv1细胞,分析AR对EphA3转录活动的影响。结果 EphA3在前列腺基质细胞WPMY-1中表达水平极低,但在前列腺癌细胞LNCa P和22Rv1中则明显升高,与AR表达模式相似。10 nmol/L DHT不仅明显上调22Rv1细胞中AR、PSA和EphA3表达水平,也显著升高LNCa P细胞中相关基因和蛋白水平。而且细胞内不同AR表达水平会显著影响EphA3启动子活性。结论 AR通过提高EphA3启动子活性上调EphA3表达水平。

基质金属蛋白酶-14和Bst-2通过蛋白质结构域相互作用而抑制Bst-2的生物活性

Bst-2(骨髓基质细胞抗原-2)是一种II型膜蛋白,其主要功能是抑制病毒从感染细胞释放;基质金属蛋白酶-14(MT1-MMP)是一种膜蛋白酶,其主要功能是通过激活pro MMP2在细胞生长和迁移中扮演重要角色.本研究主要探讨了MT1-MMP抑制Bst-2生物活性的分子机制.实验结果表明,MT1-MMP通过与Bst-2相互作用进而抑制Bst-2的活性和功能;并且,在此相互作用中,这两种膜蛋白的细胞质结构域(Bst-2的N-末端结构域和MT1-MMP的C-末端结构域)起到了极为关键的作用.此外,还发现Bst-2的N-末端结构域在Bst-2抑制MT1-MMP活性的过程中也不可或缺.这些结果为临床上探索抑制病毒感染和肿瘤转移的新方法和新药物研制开发提供了理论依据.

前列腺癌细胞中TNS4新突变体及其作用机制初探

目的:检测前列腺癌细胞中张力蛋白家族第四成员(tensin family member 4,TNS 4)基因的表达和突变情况,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用RT-PCR法分析多种前列腺癌细胞中TNS 4基因表达;并扩增TNS 4基因的全长cDNA,进行限制性核酸内切酶水解和DNA测序分析。构建TNS 4基因野生型和突变体重组质粒,转染前列腺癌PC-3细胞,然后采用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光染色法分别测定野生型和突变体TNS4过表达对信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)mRNA、蛋白表达及定位的影响。结果:与良性前列腺增生细胞BPH1相比,前列腺癌DU145、LNCaP和22Rv1细胞中TNS 4基因呈低表达(P值均<0.01),而前列腺癌PC-3细胞中几乎没有TNS 4基因表达。分析TNS 4基因的全长cDNA序列后发现,前列腺癌DU145和LNCaP细胞中TNS 4基因存在突变位点T427C和G1455A,其中T427C突变导致对应氨基酸构成发生转变(S143P)。成功构建TNS 4基因突变体重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-Mut和野生型TNS 4基因重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-WT并转染前列腺癌PC-3细胞后,TNS4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),STAT 1基因转录水平未见明显变化(P>0.05),但STAT1蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),而且TNS 4基因突变体过表达能够明显促进STAT1蛋白进入细胞核(P<0.01)。结论:前列腺癌细胞中TNS 4基因明显低表达,且存在新的TNS4突变体(S143P);过表达TNS4能够上调STAT1蛋白的表达水平,而且TNS4突变体过表达会进一步改变STAT1蛋白的细胞定位。