锂对磷酸肌醇3位羟基激酶抑制剂LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用

观察硫酸锂对磷酸肌醇 3位羟基激酶LY2 940 0 2 (50 μmol· L-1)诱导体外培养的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用 .结果显示 ,硫酸锂能明显阻断 LY 2 940 0 2诱导的神经元死亡 ,促进神经元存活 (MTT还原法 ) ,IC50 为 1 .2 5- 2 .5mmol· L-1.硫酸锂 (5.0 mmol· L-1)和 LY2 940 0 2同时处理神经元 ,LY2 940 0 2诱导的 DNA片段化(DNA琼脂糖凝胶电泳法 )和核固缩 (Hoechst332 58核染色法 )不再发生 .说明锂离子可对抗LY 2 940 0 2诱导的神经元凋亡 .采用间接荧光免疫法观察磷酸化 c- Jun蛋白免疫阳性神经元数目 ,结果显示 ,LY2 940 0 2组在 1 2 h可见大量磷酸化c- Jun免疫阳性神经元 ,2 4 h荧光更强 ;而硫酸锂(5.0 mmol·L-1)加 LY2 940 0 2组在各时间点未见磷酸化 c- Jun蛋白免疫阳性细胞 .提示锂离子抗LY2 940 0 2诱导的神经元凋亡的作用通过抑制c- Jun蛋白磷酸化过程起作用 ,其确切机理有待进一步探讨 .

3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的Ca^(2+)/cAMP不依赖性保护作用

目的 观察 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 ( 3 Isobutyl 1 methylxanthine ,IBMX)对 5mmol·L-1KCl诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用并探讨其与 [cAMP]i和Ca2 +的关系。方法 建立KCl 5mmol·L-1诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型 ,用荧光二酯素法分析神经元存活 ,Hoechest332 5 8核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析凋亡 ,放射免疫法测定cAMP浓度。结果 IBMX呈浓度依赖性拮抗 5mmol·L-1KCl诱导的神经元死亡 ,并明显减少核形态异常的神经元 ,使DNA电泳梯带变浅或完全消失 ;IBMX( 1.0mmol·L-1)可持续升高神经元 [cAMP]i,福司可林 2 .0 μmol·L-1升高 [cAMP]i作用与IBMX类似 ,但不能模拟IBMX的作用 ;此外 ,IBMX的拮抗作用不被cAMP竞争性抑制剂Rp cAMP和PKA的特异阻断药H 89阻断 ;单用或联用钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的特异抑制剂KN 93和磷酯酰肌醇 3位羟基激酶的特异性抑制剂LY2 940 0 2也不能阻断。结论IBMX抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡作用不依赖cAMP和Ca2 +。

3-磷酸甘油醛脱氢酶与神经元凋亡

综述了 3-磷酸甘油醛脱氢酶 ( glyceraldehyde- 3- phosphate dehydrogenase,GAPDH)的基因表达、酶活性及亚细胞定位等三个方面与神经元凋亡的关系的研究新进展 ,并列举了一些 GAPDH参与神经退行性疾病的临床证据。

蛇床子药理研究近况

中药蛇床子及其所含总香豆素、蛇床子素、花椒毒酚等活性成分对心血管系统、中枢神经、生殖系统均有多种药理作用。此外，尚有抗诱变、抗癌作用，并可拮抗糖皮质激素引起的“阳虚”及骨质疏松。蛇床子素通过非竞争性钙拮抗作用而松弛血管、肠道、子宫等平滑肌。

大鼠缺血脑中差异表达基因的研究

目的鉴定大鼠脑缺血差异表达基因。方法复制大鼠大脑中动脉栓塞急性脑缺血模型,采用荧光差异显示RT-PCR法结合反Northern杂交快速鉴定差异表达基因。结果发现差异表达的基因9个,其中6个已知的序列和3个未知序列;已知基因中上调的是musmusculusab1-interactor1,homosapiensCGI-99protein,tissueinhibitorofmetalloproteinase3,homosapiensnuclearreceptorco-repressor,下调的是homo-sapiensnuclearmatrixproteinp84和coatomerproteincomplex,subunitgamma2。结论荧光差异显示法结合反Northern杂交是一种有效的快速鉴定差异表达基因的方法;脑缺血时,缺血侧和非缺血侧存在基因的差异表达。

磷酸化C-JUN不参与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡

观察磷酸化 C- JUN与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关系。在培养的小脑颗粒神经元建立谷氨酸凋亡模型 ;采用 MTT法分析细胞存活率 ,相差显微镜观察形态学 ,DNA凝胶电泳法分析细胞凋亡和原位细胞荧光免疫组织化学法检测磷酸化 C- JUN。结果显示 ,谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元细胞体积缩小 ,突触断裂、消失 ,DNA电泳呈典型的“梯状”条带 ;谷氨酸处理 2 4 h后细胞存活率为 2 8.6%± 5.2 %。神经元在谷氨酸处理 5,30 min及 1 ,2 ,4,8,1 6和 2 4 h后均未检测到有磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,与去极化组 ( 2 5mmol/L KCl)相同。而复极化组 ( 5mmol/L KCl)则在 30 min检测到大量的磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,4h荧光最强并持续。处理 4h后 ,40 0倍荧光显微镜下 ,复极化组、去极化组和谷氨酸组的磷酸化 C- JUN阳性细胞数分别为 1 2 4± 1 7,8± 3,5± 3。上述结果提示 ,谷氨酸诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,磷酸化 C- JUN不参与谷氨酸诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。

花椒毒酚抗实验性心律失常作用的研究

花椒毒酚（xanthotoxol，XT）是从蛇床子乙醇提取物中分离出的一种香豆素。XT对氯仿诱发的小鼠室颤、氯化钙诱发的大鼠室颤均有明显的预防作用，对乌头碱诱发的大鼠心律失常有明显的治疗效果，且能明显提高兔心室电致颤阈。此外，XT还能降低蟾蜍离体坐骨神经干的动作电位振幅。表明XT有抗心律失常的作用。XT的小鼠ivLD50为47．0mg／kg。

咖啡因对谷氨酸诱导神经元凋亡的保护作用

目的 研究咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡是否具有保护作用，并对其机制进行探讨。方法 采用ＤＮＡ凝胶电泳分析及Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８核染色方法进行凋亡分析；使用荧光指示试剂Ｆｕｒａ２检测单细胞内游离钙浓度变化。结果 谷氨酸可诱导小脑颗粒神经元凋亡，咖啡因能拮抗谷氨酸的这一效应，其ＩＣ５０为５－０ｍｍｏｌ·Ｌ－１。咖啡因的这一保护作用不能被ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ模拟，也不能被ＲｐｃＡＭＰ阻断。此外，内质网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体阻断剂ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ也不能取消咖啡因的保护作用，咖啡因不影响谷氨酸诱导的钙超载。结论 咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡具有保护作用，这一保护作用与咖啡因升高细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋水平的药理作用无关。

花椒毒酚镇痛作用的实验研究

花椒毒酚（Ｘａｎｔｈｏｔｘｏｌ，ＸＴ）明显抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，显著提高热板法致痛小鼠的痛阈，此作用不被阿片受体拮抗剂纳洛酮所拮抗。此外，ＸＴ明显降低大鼠角叉菜胶足跖炎症组织内ＰＧＥ含量。这些结果表明ＸＴ确有镇痛作用，其镇痛机制涉及抑制ＰＧ的合成，并非激动阿片受体。

荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280

【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5'端快速扩增PCR(5'RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5'RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区,扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF),RT-PCR及Northernblot印迹结果证实了克隆的结果,同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源,同源性96%,编码166个氨基酸,为结构及功能未明确蛋白质,该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q.13)。【结论】应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KIAA0280相似的基因,其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调,该蛋白质结构及功能均未见报道及研究,其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。

冰片对阿魏酸钠在小鼠血浆和脑区中分布的影响

目的探讨剂量因素及冰片对阿魏酸钠在小鼠血浆和脑区中药动学的影响。方法经ig给予小鼠单用高、低剂量阿魏酸钠或复合不同剂量冰片的低剂量阿魏酸钠,采用HPLC法测定高剂量阿魏酸钠在达峰时间及低剂量阿魏酸钠在不同时间点的血浆和脑区中药物浓度,采用PCNONLIN程序计算药动学参数。结果单给阿魏酸钠低剂量组。其t_(max)为5.0 min,C_(max)为44.1μg/mL,AUC_(0～30)为853.9μg/(mL·min);脑区中海马AUC_(0～30)为11.8μg/(g·min),t_(max)为5.0 min.C_(max)为1.4μg/g;阿魏酸钠高剂量组与低剂量组比较.血药浓度仅增加2.5倍;脑区中浓度增加最多的小脑也仅增加1.9倍。其中海马没有增加;联用冰片后.冰片能加快阿魏酸钠在海马的分布,并显著提高其在海马中的量。阿魏酸钠200 mg/kg联用冰片50 mg/kg,海马C_(max)与AUC_(0～30)分别增加1.2倍和1.7倍。结论单纯加大阿魏酸钠的给药剂量不能相应提高其在脑中的浓度,联用冰片可提高其脑内(特别是海马)的生物利用度,阿魏酸钠联用冰片在治疗脑缺血等中枢神经系统疾病中可能有显著的临床意义。

硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛损伤ARPE-19细胞的保护作用

目的利用丙烯醛建立年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)的细胞损伤模型,并观察硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导ARPE-19细胞损伤的保护作用。方法 MTT比色法检测ARPE-19细胞的生长周期。将25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1丙烯醛加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24h,复制AMD细胞水平的损伤模型并确定其损伤浓度;预先加入50μmol·L-1、100μmol·L-1、150μmol·L-1硫辛酸烟酸二联体及150μmol·L-1硫辛酸预处理对数生长期细胞24h后,再加入已经确定细胞损伤模型的丙烯醛浓度处理24h,前后两次处理后均用MTT比色法检测细胞活性,HE染色法检测细胞数量和形态改变。结果 ARPE-19细胞24h内开始贴壁,4～5d细胞生长开始融合,第1-6天后生长分裂迅速进入对数生长期,6d后即开始随着时间延长活性显著下降。当丙烯醛浓度达到50μmol·L-1时,ARPE-19细胞数量明显减少,细胞肿胀、坏死,胞浆收缩、细胞核聚集;而当硫辛酸烟酸二联体浓度达到100μmol·L-1时即可以明显减少50μmol·L-1丙烯醛诱导的ARPE-19细胞活性的降低,防止凋亡小体的形成。MTT结果显示:100μmol·L-1硫辛酸烟酸二联体+丙烯醛处理组(50μmol·L-1)抗凋亡效果优于100μmol·L-1硫辛酸组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用丙烯醛可以诱导ARPE-19细胞损伤来建立AMD细胞损伤的模型,硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导的ARPE-19细胞损伤具有保护作用。

广东桑根心材的化学成分研究

采用多种层析方法从广东桑根心材的醇提取物中分离了8个已知化合物，经波谱分析手段结合文献分析方法将其分别鉴定为：桑辛素C（1），桑辛素M（2），二氢桑色素（3），氧化白藜芦醇（4），2，4-二羟基苯甲醛（5），伞形花内酯（6），胡萝卜苷（7）和3-羟基-2-哌啶酮（8）。化合物1，3～6和8首次从广东桑Morus atpropur-purea中分离，化合物8亦首次从桑属植物中分离。综合采用DPPH，MTT法测试了多酚类化合物1—4的抗氧化和神经保护作用，结果表明化合物1～4均能清除DPPH自由基，抑制L-谷氨酸钠诱导海马神经元细胞HT22毒性，具有抗氧化和神经保护作用。在20μM浓度下，化合物2的活性显著。

川芎嗪对中枢神经系统的药理作用及其机制的研究进展

川芎嗪药理作用广泛,近几年因其对中枢神经的药理作用多样而逐渐受到重视,作者从抗中枢神经缺血损伤、改善学习记忆、抑制癫痫发作等方面对川芎嗪的中枢神经药理作用及其机制作一综述,并认为川芎嗪的中枢药理作用及其机制研究将可能是今后研究的重点方向之一。

川芎嗪衍生物及其药理活性研究进展

川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）为伞形科植物川芎、姜科植物温莪术根茎及大戟科植物通风麻风树茎中提取的生物碱单体,其化学名为2,3,5,6-四甲基吡嗪（1）（见图1）,现已能人工合成。

基于他克林的多靶点乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是目前治疗阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)的一个重要靶点。其中基于他克林的二联体(dimeric)和杂合体(hybrid)的研究得到广泛重视。设计思路正由同时结合AChE双位点提高抑制活性和选择性转变为针对AD多靶点定向作用的开发。该文综述了基于他克林的二联体或杂合体的抗AD研究进展及对其展望。

网络视频课件在药理学实验教学的应用

改革创新是教育发展的强大动力。在药理学实验教学过程中,尝试采用课堂教学为主、网络视频教学为辅的教学模式。联合教学模式既体现了网络视频教学的自主性和灵活性,又保留了传统课堂教学的现场性和互动性,激发学生的学习兴趣,体现了教学模式的改革,收到了良好的效果。

硫辛酸烟酸二联体拮抗丙烯醛诱导ARPE-19细胞凋亡的作用机制

目的:探讨Bax、Bcl-2蛋白在硫辛酸烟酸二联体拮抗丙烯醛诱导的体外培养ARPE-19细胞凋亡中可能的调控作用。方法:ARPE-19细胞置于含有10%体积分数胎牛血清的DMEM培养基,37℃、体积分数5%CO2培养箱中培养,待培养瓶底部ARPE-19细胞长至70%时,种6孔板,用不含血清的DMEM培养基培养24 h,细胞换液。实验分为3组:空白对照组、丙烯醛组和硫辛酸烟酸二联体组。细胞流式检测各组ARPE-19细胞凋亡情况,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果:细胞流式显示正常细胞在空白对照组中为94.8%,丙烯醛组中为60.98%,硫辛酸烟酸二联体组中为91.34%。Western Blot显示空白对照组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为0.293 9,丙烯醛组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为1.389 2,硫辛酸烟酸二联体组的Bax/Bcl-2蛋白表达的比值为0.555 8。结论:硫辛酸烟酸二联体对ARPE-19细胞的保护作用机制是通过激活抗凋亡蛋白Bcl-2来抑制凋亡蛋白Bax的表达。