牙鲆胚后发育过程中Ⅰ型脱碘酶基因的原位表达谱

甲状腺激素T3在鱼类胚后发育与变态发育过程中发挥着重要作用,甲状腺激素T4通过Ⅰ型甲状腺氨酸脱碘酶(Dio1)生成T3,因此,调查Dio1基因在胚后发育包括变态发育过程中原位表达谱,有助于理解T3在胚后发育中的具体作用。利用RNA整体原位杂交技术,发现Dio1主要在牙鲆肠道、鳃、肝、肌肉、鳍、眼睛周围等器官和组织表达,鳃、肠道、奇鳍中的Dio1原位表达谱有一定的规律性,尤其在生骨肌细胞向鳍褶中迁移、臀鳍和背鳍(包括冠状幼鳍)的鳍条和支鳍骨的发生过程中,Dio1可能通过影响这些组织器官的T3水平而发挥重要作用。

内吞型EpCAM纳米抗体的筛选及鉴定

上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)是肿瘤靶向治疗的热门靶点,本研究开发了3株高特异性针对EpCAM的胞吞型纳米抗体,为基于此靶点的免疫毒素研究提供基础。研究前期对骆驼免疫EpCAM-Fc蛋白,构建了高质量的噬菌体展示纳米抗体文库,运用噬菌体展示技术通过3轮淘选成功获得了17株互补决定区(complementarity determining region,CDR)3序列不同的EpCAM纳米抗体,原核纯化获得高纯度的抗体蛋白后,流式细胞术确定其中7株具有细胞水平高结合活性。动物实验经复旦大学药学院实验动物伦理委员会(IACUC)批准。通过流式细胞术和激光共聚焦显微术最终鉴定出3株具有较高胞吞活性的EpCAM纳米抗体,且ForteBio测定具高亲和力。本研究以期为EpCAM阳性肿瘤的靶向治疗开辟新的途径,并为其他靶点的纳米抗体免疫毒素研究提供指导。

TIM-3纳米抗体噬菌体展示文库的构建及筛选

肿瘤免疫治疗是肿瘤治疗的一个重要突破口。T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule-3,TIM-3)作为T细胞抑制性免疫检查点,在肿瘤抗体治疗中具有独特的应用优势。骆驼科动物体内存在的一种天然缺失轻链的纳米抗体(nanobody,Nb),逐渐成为新一代抗体治疗的新兴力量。本研究利用TIM-3抗原成功免疫新疆双峰驼,建立噬菌体展示文库,并通过噬菌体展示技术初步筛选出29株序列差异的TIM-3纳米抗体。另外,本研究成功构建了TIM-3稳转细胞株,利用流式细胞仪从这29株纳米抗体中筛选出10株特异性强且亲和力高的TIM-3纳米抗体。本研究将为功能性阻断型TIM-3纳米抗体的后续筛选和TIM-3全人源纳米抗体创新药物的开发奠定基础。