50％三氯醋酸治疗女性生殖道尖锐湿疣204例

５０％三氯醋酸治疗女性生殖道尖锐湿疣２０４例盖文丽（１０００３５北京积水潭医院）女性生殖道尖锐湿疣（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ ａｃｕｍｉｎａｔｕｍ，ＣＡ）是由人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染所致，其传染性强。在欧美是最常见的性传播性疾病（ＳＴＤ），在我国发病率...

异丙酚静脉麻醉在人工流产手术中的应用

异丙酚静脉麻醉在人工流产手术中的应用北京积水潭医院妇产科（１０００３５）蒲冶青王绍云庞兰盖文丽异丙酚是一种新型短效静脉全麻药〔１〕。由于起效快、作用时间短、恢复迅速、不良反应少，非常适用于门诊短小手术。我们将异丙酚用于人工流产手术，效果满意。１临床资...

应用DMPA与丹那唑治疗子宫内膜异位症的体会

分别用ＤＭＰＡ与丹那唑治疗子宫内膜异位症各１６例。用ＤＭＰＡ后ＦＳＨ、ＬＨ、Ｅ２、Ｔ均被抑制；用丹那唑后ＦＳＨ、ＬＨ被抑制，但Ｅ２与Ｔ上升。临床上两组均抑制排卯及有雌激素低效应，缓解症状满意，体征有一定的改善。一个疗程后ＤＭＰＡ组闭经比丹那唑组少，而不规则出血则多于丹那唑组；在增加体重、对肝功影响及一般不适上ＤＭＰＡ组好于丹那唑组。临床上两药相比由于ＤＭＰＡ使用简便，副反应轻，可连续多次应用，更受患者欢迎。

耳针对于乳母泌乳量和血清基础泌乳素水平的影响

30例产后即刻行耳针封闭,24小时再行耳穴贴压疗法的产妇,与30例正常分娩产妇比较观察耳针对泌乳量和血清基础泌乳素水平的影响。发现正常产妇产后第2天泌乳素水平高于第1天,第5天已显著下降.耳针治疗组产后第1～7天泌乳量与对照组比较有非常显著性差异。第1天和5天相应基础泌乳素值有显著性差异。结论是:耳针有升高基础泌乳素水平的作用,从而增加了乳汁分泌量,促进了初乳的形成。

耳针对于乳母泌乳量和血清基础泌乳素水平的影响

30例产后即刻行耳针封闭,24小时再行耳穴贴压疗法的产妇,与30例正常分娩产妇比较观察耳针对泌乳量和血清基础泌乳素水平的影响。发现正常产妇产后第2天泌乳素水平高于第1天,第5天已显著下降。耳针治疗组产后1～7天泌乳量与对照组比较差异有非常显著意义。第1和5天相应基础泌乳素值差异亦有显著性。结论是:耳针有升高基础泌乳素水平的作用,从而增加了乳汁分泌量,促进了初乳的形成。

生物活性肽Lunasin的原核表达和分离纯化

目的:利用基因工程的方法在大肠杆菌中表达并纯化生物活性肽Lunasin。方法:将合成的Lunasin基因插入原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点Nde I和Xho I之间,然后将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白的表达。然后利用亲和层析技术将含有6×His标签的蛋白分离纯化、脱盐、冻干。结果:①鉴定结果表明在6kDa位置出现目的条带Lunasin重组蛋白。②亲和层析在100mM咪唑时得到了洗脱的重组蛋白。结论:在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并且纯化出了生物活性肽Lunasin。

小鼠Daintain/AIF-1基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建

目的:对Daintain/AIF-1(大炎肽/同种异体移植炎症因子-1)基因启动子进行克隆并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究Daintain/AIF-1的转录调控作用提供了质粒资源。方法:提取单核巨噬细胞系RAW264.7基因组DNA,以其为模板采用PCR方法克隆出Daintain/AIF-1基因5'端UTR区1.6 kb DNA序列,将该序列同源重组到pGL3-Basic载体上,转化感受态DH5α并酶切鉴定和测序。结果:PCR产物片段与预期结果一致,Daintain/AIF-1基因5'端UTR区1.6 kb DNA序列连接到pGL3-Basic载体上,构建成pGL3-Basic-Daintain/AIF-1(pGL3-Basic-DT)载体,酶切结果与理论预测值一致,经测序证实无碱基突变。结论:Daintain/AIF-1基因报告基因载体的构建为进一步研究Daintain/AIF-1转录调控作用提供了载体资源。

微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(mTG)介导的单一定点修饰的PEG IFN-α2a(英文)

PEG修饰被认为是改善重组蛋白药物特性的最有效手段,包括增加蛋白质药物在体内的血浆半衰期,降低免疫原性和抗原性。目前典型的PEG修饰手段为将PEG连接至蛋白质的游离氨基,包括赖氨酸和N-末端,但这种连接缺乏选择性,产物为混合物,活性及工艺稳定性差,难以控制。酶法PEG化修饰能有效克服上述缺点,其中谷氨酰胺转氨酶(TGase)可以作为PEG化定点修饰用酶。文中选择重组人干扰素α2a(IFNα2a)进行酶法修饰反应,通过计算机模拟预测IFNα2a可以在第101位Gln特异性定点修饰。将IFNα2a与40 kDa的Y型PEG在微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(mTG)催化下进行定点PEG化修饰。结果显示,mTG可以介导IFNα2a特异性位点Gln的单一定点PEG修饰,产生分子量为58 495.6 Da的PEG-Gln101-IFNα2a分子。圆二色谱结果显示,PEG-Gln101-IFNα2a与未修饰的IFNα2a具有相同的二级结构。SD大鼠药代结果显示,与IFNα2a相比,PEG-Gln101-IFNα2a能有效提高药代动力学参数,强于已上市PEGIFNα2a-PEGASYS?。

ELISA法测定微生物谷氨酰胺转氨酶残留量

目的:建立微生物谷氨酰胺转氨酶(microbial transglutaminase,MTGase)残留量检测的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行方法学验证,用于MTGase催化偶联的生物制品的质量控制。方法:利用MTGase单抗和MTGase兔多抗,建立了MTGase的双抗体夹心ELISA方法,并验证了该方法的定量限、精密度和准确度、稀释可靠性、稳定性和专属性等,对3批PEG-IFNα2a原液进行重复测定。结果:该方法的定量限为0.165~10 ng·mL^(-1),在0.05~40 ng·mL^(-1)范围内拟合度高,R2>0.99,板内和板间精密度和准确度均在(±)15%以内;样品经不同倍数稀释后,回归计算样品的准确度在±15%以内,精密度小于15%;样品室温放置2 h或冻融1次和3次,结果显示质控样品采用该方法检测的精密度均小于15%,回收率为80%~120%;应用该方法在不同稀释倍数的PEG-IFNα2a原液中等量添加5 ng·mL^(-1)质控样品,结果显示加标样品回收率为97.7%~101.1%。3批PEG-IFNα2a原液MTGase残留量重复测定的板内和板间精密度均在15%以内,MTGase的残留量均低于总蛋白含量的0.01%。结论:ELISA法可用于生物制品中MTGase残留量的检定。

酶法定点制备抗HER2抗体偶联药物的质量研究

目的建立酶法定点偶联制备抗体药物(antibody drug conjugate,ADC)抗表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗-澳瑞他汀(MMAE)的质控方法。方法建立适宜的方法对抗体偶联药物的纯度(分子大小变异体、电荷变异体)、偶联修饰位点和偶联比(antibodydrugratio,DAR)、结合活性和生物学活性、以及偶联过程工艺相关杂质[游离小分子药物和谷氨酰胺转移酶(microbial transglutaminase,mTG)残留]进行控制。结果体积排阻色谱(SEC)纯度主峰为(98.35±0.07)%,非还原十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法(CE-SDS)完整蛋白比例为(95.64±0.07)%,还原轻链比例为(31.15±0.19)%,重链比例为(67.87±0.06)%,全柱成像毛细管电泳(iCIEF)主峰比例为(51.05±0.7)%,偶联反应工艺偶联率95%以上,LC-MS测定的DAR为1.93(完整相对分子量),RP-HPLC测定的DAR为2.0,HC:Q298的连接子毒素(linker and drug,LD)修饰比例近100%,样品相对生物学活性(相对于参比品计算出的相对活性)平均值在(101±6.7)%,相对结合活性平均值为(95±3.8)%,RP-HPLC测定游离小分子含量均低于定量下限15 ng,ELISA法测定残留mTG含量均低于定量下限为0.165 ng·mL^(-1)。结论初步建立了酶法定点偶联制备HER2单抗-MMAE偶联药物质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为酶法定点偶联制备抗体偶联药物的质量研究提供了参考依据。