SSR与SRAP标记在玉米品种鉴定中的比较研究

利用SSR标记和SRAP标记对19个玉米品种及8份莱农15样品进行了分析,比较了2种标记的分辨能力及在亲缘关系和杂交种纯度鉴定中的表现。与SSR标记相比,SRAP标记用于玉米品种鉴定扩增位点数量更多,PIC值更高,具有更高的分辨率;在亲缘关系分析方面,SSR检测的遗传距离变幅更大,2种标记计算的遗传距离呈极显著正相关,分类结果基本一致;在杂交种纯度检测中,SRAP标记的期望位点在杂交种群体中检测率高于SSR标记相应位点,检测杂交种纯度结果更接近田间种植鉴定,因而准确度更高。SRAP在玉米品种鉴定中具有一定的优势,可作为SSR标记技术的有益补充,特别是在杂交种纯度鉴定中应用。

6个玉米杂交种种子纯度的SSR鉴定

玉米杂交种纯度是影响玉米产业发展的重要因素之一,建立快速、准确可靠的纯度检测技术是控制杂交种纯度的有效措施。从30对SSR引物中筛选出6对表现为双亲互补型的引物,建立了6份杂交种纯度鉴定的SSR体系。Umc1002、bnlg1112、bnlg238、Umc1153、phi072、bnlg240可分别用于玉米杂交种农大108、浚单20、郑单958、莱农14、莱农15和鲁玉16的纯度检测。双亲互补型等位变异基因频率在0.028～0.072之间,可较准确地检出样品中的自交株和大部分异型株。SSR鉴定玉米杂交种纯度结果略低于幼苗鉴定,但二者差异不显著,相关系数为r=0.8434。本试验建立的SSR技术体系可用于6个玉米杂交种纯度的快速检测。

山东省玉米骨干自交系和杂交种的SSR指纹图谱构建

构建骨干品种(系)指纹图谱,可为新品种的审定和品种保护建立准确可靠的依据,也是适应玉米育种快速发展的需要。分别利用74对SSR引物对35份骨干自交系和19份主栽杂交种进行了SSR分析。筛选出10对和20对适于玉米自交系和杂交种分析的核心引物,分别检测出115和124个等位变异,将扩增条带数字化,构建了自交系和杂交种的指纹图谱,出现相同指纹图谱的概率分别为3.13×10-11和5.59×10-25。构建的指纹图谱用于玉米品种鉴定是可行的,对玉米新品种审定和品种权保护具有重要意义。

部分栽培葱属植物叶绿体基因组的RAPD分析

提取我国栽培的几种主要葱属植物的叶绿体DNA ,利用RAPD技术进行遗传关系分析。从 5 6个 10bp随机引物中筛选出 18个多态性引物进行扩增分析 ,14个材料共扩增出2 70条带 ,其中 2 4 6条具多态性。UPGMA聚类将供试葱属品种分成 4个组。葱属在进化上存在两个方向 。

大葱雄性不育分子标记辅助选择的研究

大葱雄性不育在杂种优势利用中具有重要价值 ,传统方法选育不育系效率低 ,分子标记辅助育种可提高育种效率。本研究试图建立大葱雄性不育辅助育种的技术体系 ,加快大葱不育系、保持系的育种进程。利用RAPD技术分析了多态性片段S132 80 0 、S3896 0 、S72 30 0 、S73110 0 、S2 0 0 2 4 0 0 与大葱育性的连锁关系 ,重组率分别为 0、 7 5 %、 0、 4 2 %、 0。其中S132 80 0 、S2 0 0 2 4 0 0 能在多数品种中区分N、S胞质 ,且重组率接近 0 ,用于胞质鉴定具有很高的准确率 ,因而具有较高的利用价值。以S132 80 0 、S2 0 0 2 4 0 0 为探针对不育系和保持系mtDNA的酶切片段进行了Southern杂交分析 ,结果表明它们在N、S胞质中存在多态性 ,预示着它们可能是与大葱CMS相关的片段。鉴于RAPD标记的应用有一定局限性 ,进一步对特异片段S132 80 0 、S2 0 0 2 4 0 0 进行了克隆、测序和SCAR标记转化 ,其中S132 80 0 成功转化为SCAR标记 ,而S2 0 0 2 4 0 0 转化后多态性消失。为进一步降低成本 ,简化了SCAR扩增产物的检测技术 ,初步建立了大葱不育系、保持系分子标记辅助选择的技术体系。研究表明 ,SCAR产物加入EB直接检测存在一定误差 ,而通过快速电泳可以快速、准确地鉴定单株的胞质类型。RAPD标记和SCAR标记在育种?

利用RAPD技术进行植物性状标记及辅助选择

近等基因系、混合分离群体法是ＲＡＰＤ 标记的主要策略。目前，ＲＡＰＤ标记广泛用于抗线虫、抗病、雄性不育等辅助选择的研究中，取得了可喜的成绩。由于遗传距离的不同，使ＲＡＰＤ 标记具有基因型的差异。寻找无重组的ＲＡＰＤ 标记或将ＲＡＰＤ标记转化为ＲＦＬＰ标记，可以解决这一问题。随着连锁程度的降低选择效率也随着降低。相斥相的ＲＡＰＤ标注可提高选择效率将ＲＡＰＤ标记转化为ＳＣＡＲｓ、ＡＰＳＰｓ 标记，可以解决ＲＡＰＤ 标记稳定性差的问题。来源于ＲＡＰＤ 标记的ＳＣＡＲｓ 标记将在辅助选择中发挥巨大的作用。

不同条件下牡丹花粉的贮藏寿命

以2个牡丹品种"凤丹白"和"鲁荷红"为试材,以花粉萌发率和授粉结实率为依据,研究了室温(25℃)、4、-20、-86℃条件下的牡丹花粉贮藏寿命,以建立花粉贮藏技术。结果表明:牡丹花粉室温下保存7d、4℃下保存90d、-20℃下保存180d仍有很高的萌发率,-86℃下贮藏1a,花粉萌发率没有明显下降、授粉结实率高。室温干燥24h花粉贮藏后萌发率显著高于未干燥花粉。温度和含水量是影响牡丹花粉贮藏寿命的重要因素。自来水冲洗解冻效果最好。4℃和-86℃贮藏是解决牡丹育种花期不遇的有效措施。

转基因植物的筛选与检测

近年来,转基因的研究进展很快,对转基因植株进行筛选检测是基因转移的必须环节。本文综述了转基因中选择试剂的种类和应用范围;转基因植株的检测方法。Kan抗性基因、Gus基因、Bar基因是可安全使用的选择标记基因,其它选择基因的安全性尚待进一步评价。Gus基因可检测外源基因的表达部位,可作为首选的报告基因。PCR是早期检测的较好方法。Southem杂交特异性强,可以研究外源基因的整和状态、位置数及外源基因的完整性和稳定性,因而应用最多。Westerm杂交结果与性状表现有直接关系。

快速提取大葱细胞质DNA的方法

经匀浆 -差速离心 -裂解 -纯化等步骤 ,可获得纯度较高的胞质DNA ,DNA产率 1～ 2 μg·g-1(FW )。此法比传统的方法用材少 ,对仪器的要求不高 ,成本低 ,提取时间短 ,每人每天可提取 2 4个样品 ,适合大量样品分析。

分子标记技术及其在作物育种中的应用

综述了分子标记的基本类型及其在作物遗传育种中的应用 ,分析了应用过程中存在的问题 ,提出了解决的方法 。

休眠解除过程中牡丹花芽均一化酵母杂交文库的构建

以不同低温处理的牡丹花芽为试材,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术结合SMARTTM(switching mecha-nism at 5'end of RNA transcript)建库技术合成cDNA,cDNA与pGADT7-Rec重组并转化酵母AH109,构建了冬季牡丹低温累积进程中的花芽均一化cDNA文库。经检测,原始文库滴度为1.77×106cfu/ml,库容量为2.3×108。对管家基因18S rRNA均一化前后丰度检测表明,均一化程度>26,随机挑取了188个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1200bp,构建的文库质量较高。该文库为进一步通过酵母杂交技术筛选低温解除牡丹休眠进程中受低温调控的转录因子和互作蛋白,进而为构建低温解除休眠的基因调控网络奠定了基础。

玉米品种纯度SSR鉴定与田间鉴定的相关性

建立快速、准确鉴定玉米种子纯度技术是控制种子质量的有效措施。本研究针对SSR鉴定结果低于种植鉴定结果的问题,分析了可能的原因,提出了解决办法。利用筛选的特异标记测定了标记在原种、大田用自交系、套袋配制杂交种中的检出率,测定了2个杂交种(莱农14和莱农15)共16份样品的纯度。特异标记检出率随着自交系繁殖代数增加呈现逐渐降低的趋势;杂交种出苗率越低,SSR鉴定结果与田间鉴定结果的差值越大,是导致SSR检测纯度偏低的两个主要原因。将SSR结果与田间种植结果相比较,建立了SSR鉴定与田间种植鉴定的回归方程,可准确鉴定杂交种的纯度。

地方高等农业院校生物类专业课程体系的优化

为培养适应社会需求的生物类专业人才,在广泛的专业调研和市场调研基础上,对生物科学、生物技术专业课程体系进行了优化,进一步突显了地方高等农业院校生物类专业人才培养的目标定位。在此基础上,参照专业人才培养质量国家标准进行了课程体系和课程内容的优化,突出了实践教学体系,对培养符合社会需求的人才具有重要指导意义。

大葱胞质雄性不育位点RAPD标记转化为SCAR标记的研究

S132800、S2002400是与大葱胞质不育位点相连锁的RAPD标记,回收、纯化特异性片段S132800、S2002400,连接至pGEM-T-easy载体,转化受体菌后筛选出阳性克隆,并对插入片段进行测序。根据测序结果,设计了3对SCAR引物:SCS13L/SCS13R(S132800的SCAR标记引物)、SCS200L/SCS200R1、SCS200L/SCS200R2(S2002400的SCAR标记引物)。其中SCS13L/SCS13R可成功地区分N、S两类胞质,适宜退火温度为59℃。而S2002400转化为SCAR后多态性消失,讨论了转化SCAR标记失败的可能原因。

新形势下地方农业院校生物类专业培养目标的定位——以青岛农业大学为例

21世纪是生物产业的时代,为生物科学、生物技术、生物工程等生物类专业的发展提供了难得的机遇。正确的培养目标定位是培养适应市场需求人才的前提。该文基于专业内涵、市场需求等,分析了生物类专业的人才层次、职业取向、知识结构、素质能力等方面的定位,探讨了生物类专业特色和实现培养目标定位的措施。

基因工程实践教学改革的探索

本文立足于培养学生实践和创新能力,从优化实验教学内容和教学体系,完善教学设计,丰富实践教学形式,改革考核方式等方面对基因工程实验教学进行了改革探索,取得了较好效果。

低温解除牡丹芽休眠进程中内源激素的变化

以4～5年生牡丹‘胡红’为试材,研究1～7周不同低温处理时间对其开花展叶的影响。根据花芽萌动和开花情况结合激素的变化动态,将低温解除花芽休眠进程划分为:低温累积期、休眠解除启动期、休眠基本解除期、休眠彻底解除期4个时期。分别测定低温处理期内和进入温室后内源GA3,ABA,CTK,IAA及其比值的变化。结果表明:低温期内GA3,ABA,CTK质量分数的增减和GA3/ABA比值的变化可明显地反映低温解除花芽休眠的进程。其中,GA3/ABA比值的变化与休眠的进程直接对应。进入温室后牡丹花芽内各激素的变化进一步证明GA3和CTK是解除休眠的促进物,ABA是解除休眠的抑制物。低温解除牡丹休眠是通过调节休眠解除的促进物和抑制物之间的平衡来实现的,是多因素综合作用的结果。

赤霉素氧化酶PsGA20ox基因参与低温诱导的牡丹内休眠解除

为明确在花芽内休眠进程中牡丹赤霉素氧化酶PsGA20ox基因与内源GA3含量的相关性,以454测序筛选到的PsGA20ox基因部分cDNA序列为基础,经RACE扩增和序列拼接后得到1 391 bp全长cDNA序列,包括16 bp 5'UTR区,212 bp 3'UTR区,17 bp的PolyA和1 146 bp编码区,编码区编码381个氨基酸。同源性分析表明,PsGA20ox与杨树GA20ox同源性最高,为77.6%。表达分析结果表明,在内休眠的前期阶段,PsGA20ox基因的表达水平随着低温处理天数增加而升高,低温处理14 d时PsGA20ox基因表达量最高。酶联免疫反应结果表明,不同低温处理的牡丹花芽内源GA3的含量的变化趋势与PsGA20ox基因表达模式相似。相关分析表明,在鲁荷红休眠解除过程中PsGA20ox基因表达水平与内源GA3含量呈显著正相关。低温累积可诱导PsGA20ox基因的表达,PsGA20ox基因通过调节内源赤霉素含量促进花芽休眠解除。

利用地温构建菏泽牡丹花期预测模型

针对山东菏泽市的国际牡丹花会召开时间难与牡丹花期吻合,影响当地牡丹产业和牡丹文化发展这一现状,通过分析菏泽地区土壤温度与牡丹盛花期之间的关系,建立了地温(1月20日距地温稳定高于4℃的首日的天数和首日距4月10日的平均地温)与盛花期之间的多元非线性回归预测模型,并利用该模型对28 a来的盛花期进行了预测。预测结果与实际开花期的最大误差为±4d,预测效果较好,为确定菏泽国际牡丹花会的召开时间提供了预测方法和模型。

重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用

先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。