日本落叶松LkF3H2基因克隆及调控类黄酮代谢功能研究

【目的】日本落叶松黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase 2,LkF3H2)基因在类黄酮生物合成过程中发挥着重要的调控功能。探究LkF3H2基因在日本落叶松中发挥的具体功能和植物类黄酮生物代谢过程。【方法】根据实验室前期转录组数据克隆日本落叶松LkF3H2基因并进行生物信息学分析及组织表达分析。随后将该基因转化烟草进行转基因烟草组织表达分析及类黄酮含量测定,以探究基因表达量与类黄酮含量之间的关系。【结果】LkF3H2基因cDNA序列长度为1074 bp,其蛋白编码358个氨基酸,分子式C_(1785)H_(2807)N_(481)O_(541)S_(18),分子量为40.24 kD,该蛋白是不稳定的亲水性蛋白且不含信号肽;同时系统进化分析得出日本落叶松LkF3H2与火炬松、辐射松、白云杉和欧洲云杉F3H亲缘关系较近并且该蛋白含有保守结构域2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase superfamily,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族。另外组织表达分析显示LkF3H2基因在一月龄日本落叶松幼苗叶中表达量最高,在一年生日本落叶松幼苗茎中表达量最高,并且在转基因烟草叶中也显示了最高的表达量。值得一提的是,转基因烟草叶中的类黄酮含量也是最高的,其次为茎和根,转基因烟草中类黄酮含量与LkF3H2基因表达量呈正相关关系。【结论】日本落叶松LkF3H2基因属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族并且在类黄酮生物合成过程中发挥着重要功能。

生物类及食品类专业本科生对生物化学实验室的安全意识情况实证研究

通过面向生物类专业及食品类专业本科生开展生物化学实验室安全意识情况问卷调查,对生物化学实验室安全相关知识的基本认知及获取途径、实验操作习惯、化学试剂及危险化学品管理与使用、实验废弃物的处理、仪器设备使用、常见事故处理及急救知识掌握情况等实验室安全问题进行了研究分析,并从强化实验室安全意识、落实开放实验过程管理、实验室安全教育与课程思政教育相辅相成三个方面提出改进意见。

日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)酶学特性与抗逆性研究

【目的】植物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是酶促活性氧清除机制中的关键酶之一,对日本落叶松GPX开展酶学特性与抗逆性研究,可以补充和完善林木改良基因资源,也为探究谷胱甘肽过氧化物酶抗逆的分子机制提供理论依据。【方法】本研究以日本落叶松茎部组织为材料克隆谷胱甘肽过氧化物酶基因,进行生物信息学分析和亚细胞定位研究。诱导、纯化目的蛋白进行体外酶学活性测定,通过点斑试验、生长曲线试验验证GPX抗逆性。【结果】从日本落叶松茎中克隆得到了2个GPX基因,分别命名为LkGPX2、LkGPX3,二者都含有完整的特征保守基序。构建系统进化树发现,LkGPXs和具有抗逆功能的PmGPX与PeGPX聚为一支。亚细胞定位显示,LkGPX2和LkGPX3蛋白在细胞核和细胞质中均有表达。以硫氧还蛋白(Trx)为电子供体进行体外酶学活性测定,LkGPX2与LkGPX3对过氧化氢(H2O2)、过氧化氢叔丁醇(t-BHP)和有机氢过氧化物(Cum-OOH)都具有催化活性,LkGPX2对于3种底物的催化活性分别为(0.402±0.037)、(0.424±0.018)、(0.425±0.009)U/mg,LkGPX3对于3种底物的催化活性分别为(0.397±0.027)、(0.449±0.028)、(0.407±0.021)U/mg。大肠杆菌体外逆境处理试验表明,LkGPX2、LkGPX3能够提高大肠杆菌对模拟干旱胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)既能起到活性氧清除作用,同时具备一定应对非生物胁迫的能力。

一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法

SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难.该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔(井)位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDSPAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量.

DNA重组酶FLP原核表达与多步法纯化及其活性检测

DNA重组酶FLP存在于酵母2μ质粒上，能识别34bp的FRT位点，并根据2个FRT位点的相对方向完成位点间DNA序列的交换、重组、删除与逆转，在现代分子生物学理论研究与基因工程技术开发中具有广泛应用。构建了在原核大肠杆菌中高效表达FLP重组酶的表达载体pQE32-flpe并建立起相应的原核高效表达体系，在原核细菌大肠杆菌M15菌株中实现FLP酶蛋白的高效表达，同时建立了相应的纯化方法。纯化时先用硫酸铵沉淀法富集FLP酶蛋白，经透析脱盐后再用镍离子鳌合微柱（0．5—1．0mL）亲合层析梯度洗脱的方法获得纯化的FIJP酶蛋白。通过构建含有2个方向相同的FRT序列位点的质粒pUC18-FRT-gfp-FRT和含有1个FRT位点的表达载体pET30a-FRT，并分别以其为底物来检测FLP重组酶的删除、交换与重组功能的活性。结果表明，该方法不仅能有效表达FLP酶蛋白，并能行之有效地纯化FLP酶蛋白，以及检测纯化的FLP酶蛋白对DNA序列的删除、重组与交换功能。该方法简单易行并能获得有活性的FLP酶蛋白，为深入研究其机理以及研发相应的DNA重组技术提供重要参考。

大学教师素质的现代内涵刍议

大学教师素质的现代内涵,主要应当从大学教师的人格结构、问题意识、教育理念和教学手段等几个层面体现出来。

项目驱动教学法在现代汉语教学中的应用

实施项目驱动教学法要注意转变教学思想、做好项目设计工作和为学生提供良好的学习环境。明确任务、剖析问题,独立探索、合作学习,作品展示、点评总结,项目实训、巩固创新,是项目驱动教学法实施的四个环节。

基于能力培养的分子生物学实验改革

传统分子生物学实验对学生后期研究以及能力培养方面表现不足。通过实验教学模式改革在实验教学过程中引入小组独立设计实验的环节能够有效地提高学生设计、总结、团队配合等诸多能力,对学生今后自主学习与科研具有较强的实践意义。

幼儿师范生职业口语素养的培养路径探究

幼儿语言获得,被称为儿童社会化发展历程中的一个里程碑,对儿童身心健康、全面发展具有积极的影响。培养和提高幼师生的职业口语素养是提高幼儿语言综合能力的主要途径。要通过有针对性的训练,促使幼师生掌握扎实的职业语言技能和灵活的职业语言策略,成为真正适应新时期幼儿教育发展的合格后备教师。

分子生物学实验教学改革初探

分子生物学实验是为了配合分子生物学理论课教学、培养学生的实践动手能力和科研能力,并结合学科前沿帮助学生了解实验的基本过程与掌握实验的基本技能。通过重新安排教学内容、丰富教学手段、完善考核方式三方面的教学改革,有效提高学生的学习兴趣和能力,取得了良好的教学效果。

隐秘重负下的疯狂与毁灭——《雷雨》悲剧根源新探

关于《雷雨》的社会问题剧、伦理情爱悲剧、命运悲剧等等各种解释不一而足,但似乎都未触及悲剧的本质。品读、观赏这部剧的时候,实际上也是作者为我们抽丝剥茧,将秘密逐次揭开的过程。隐秘重负下的疯狂与毁灭或许成为《雷雨》悲剧的终极根源。

从《论语》看如何做好新时期高专学生的道德培养

孔子德育思想博大精深,以＂礼＂为道德规范、以＂仁＂为最高道德准则的道德教育对今天的德育工作,尤其是做好高职高专学生的道德培养仍有积极的借鉴意义。

运用情景模拟法解决写作教学中的难点问题

情景模拟法教学是提高学生学习兴趣和培养学生综合能力的有效途径,是高职语文教师的现实选择。情景模拟教学应注意以下问题:一是情景模拟教学要适应高职院校人才培养的要求,二是教师要提高职业技能,做公正的指导者、评判者。

语言中的超音质音位现象浅析

对于任何语言,语言四要素中的音质无疑是用来区别意义的最重要的要素。但另一方面,语言中还存在着其他区别理性意义的超音质的声音特点,即音长、音强、音高等。能在语言中充作起区别理性意义的单位的任何声音特点都有资格被视为音位,属于超音质音位的范围。

林学类专业分子生物学课程教学方式探索

分子生物学是一门比较抽象的专业基础课程,应用范围广,新理论、新技术更新快,涉及的专业词汇多,一些原理过程相对难理解。因此,探索合适的教学方法,使得学生易于理解并掌握所学内容显得尤为重要。结合多年教学经验,从教学内容设计、改进教学方法与策略等方面探讨了林学类专业分子生物学课程的教学方式,以期提高课程质量,培养更多优秀人才。

HPLC-MS/MS检测杜仲中绿原酸等4种活性成分的分析方法

杜仲作为一种传统的中药材,其活性成分主要包括绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸等。本研究建立了一种HPLC-MS/MS（高效液相色谱质谱联用仪）检测的方法,可同时检测杜仲中桃叶珊瑚苷、京尼平苷、京尼平苷酸和绿原酸的含量。建立的色谱条件：色谱柱XD-C18,流动相为0.1%甲酸水溶液和甲醇,流速0.15 mL/min,柱温30℃。质谱条件：ESI离子源作为裂解源,裂解温度280℃,源内电压4 kV,鞘气辅助气为氮气,流速30 psi,雾化气为氦气,流速10 psi。结果表明：4种目标化合物的色谱峰分离情况良好,质谱鉴定为目标物;绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸标准曲线的相关性系数分别为0.993 5、0.994 2、0.996 9、0.994 8;最低检测限的范围是7.603-8.853 pmol;加样回收率范围是91.838%-108.326%。测定得到杜仲叶中桃叶珊瑚苷的含量为（20.552±4.032）ng/mg干质量,京尼平苷酸含量为（6.913±0.654）ng/mg干质量,绿原酸含量为（25.986±3.412）ng/mg干质量,京尼平苷含量为（0.205±0.015）ng/mg干质量。利用该方法在7种植物组织中进行方法验证,测定得到4种目标化合物的含量,表明本方法有效且适用性广。

马尾松种子萌发与幼苗生长异养转自养生理过程研究

以马尾松成熟种子为研究对象,选取了马尾松种子萌发过程中的5个时期作为观测点,测定了各时期种子生长量的变化,并通过GC-MS技术检测了脂肪酸的差异;用HLPC-MS技术测定种子萌发过程中的蛋白质;利用Li-6400光合测量仪测定了光合作用的起始点。结果显示:在前2个检测时期,马尾松种子的脂肪酸、淀粉含量最高,随着萌发活动的进行转变为小分子物质供给根和芽的生长,在幼苗期含量降至0。由单向电泳可知,在出芽前3个时期的蛋白质条带位置基本不变,仅丰度降低;而在出芽时出现了大分子量的条带,于幼苗期汇聚于52.0 ku的位置。选取成熟期与幼苗期的明显差异蛋白质点进行分析,结果分别表示为贮藏性蛋白——松球蛋白和光合作用关键酶——Rubisco。说明随着贮藏性蛋白质的降解供能,形成了新的功能性蛋白质以调控生长。马尾松因其脂肪含量高,在生长初期主要依靠动员贮藏性脂肪和蛋白质提供能量和原料,尤其是在胚根突破种皮时,物质代谢旺盛。种子萌发过程中进行了由异养到自养的转变,根据G2期出现的Rubisco和CO2补偿点判定此期为转折点。

牡丹江边疆文化特色及文学呈现

牡丹江流域地理环境独特,各种异质文化在这里相互碰撞、交汇与整合,形成了丰富色彩、多元综合的地域文化,并以文本影像的方式得到了或隐或显的呈现。正确认识、继承和发扬牡丹江流域文化的价值观、审美观,使其强大的生命力在更广阔的背景上得以展示就显得尤为重要。

5种杨树苗期形态及生理结构特征比较初探

本研究以毛果杨、毛白杨、银灰杨、欧美杨和胡杨为研究对象,对其苗期生长、光合作用、微观结构、木质素组成、激素含量等多个指标进行分析比较,旨在寻找其苗期生长和生理特征上的差异,探究不同杨树生长速度不同、应用不同的原因,进而指导应用。研究发现毛白杨、银灰杨和欧美杨表现出栽后缓苗迅速、生长速度快的特点。可能是受到较强光合作用(有机物合成积累)和较强蒸腾作用(水和无机盐的运输)双重因素的影响,即光合速率高、光合能力强,能合成积累更多有机物;气孔导度值较高、蒸腾速率高,能够有效吸收CO2进行光合,并且能高效运输水和无机盐,在生产应用中具有很大潜力。毛白杨的木质素含量高,适于建筑用材;银灰杨和欧美杨的木质素含量低,适于造纸。同地区栽培的毛果杨和胡杨生长速度慢、生长状况欠佳,在生产上不宜采用。生长速度缓慢除了受光合、蒸腾影响外,也可能与激素含量有关,赤霉素含量较高会导致木质部细胞早期分化程度高。毛果杨虽生长缓慢,在我国引种相对较少,但是作为林木树种遗传转化研究中的代表种,意义重大。而胡杨能够抵御干旱盐碱,具有防护作用,这可能与其cis-ABA含量较高、气孔导度低、蒸腾速率低、水分丧失少有关。

适用于毛白杨芽双向电泳分析的蛋白质提取方法

本实验以毛白杨芽为实验材料,采用Tris-酚法、三氯乙酸-丙酮法和三氯乙酸-丙酮+Tris-酚法对其蛋白质提取方法进行比较,采用双向电泳分离蛋白质,通过PDQuest软件和质谱对这3种提取方法得到的双向电泳胶进行分析。结果显示,三氯乙酸-丙酮法得到的蛋白点数量为231±4,得到的鲜样中的总蛋白质含量为(3.57±0.618)mg/g,均高于其他两种提取方法,并且所得到的双向电泳胶更清晰,为毛白杨芽蛋白质提取的最适方法。