MicroRNA-451和microRNA-503对羟基脲诱导的K562细胞γ珠蛋白基因表达的调控作用

目的:研究羟基脲对K562细胞γ珠蛋白基因表达的影响及其中可能涉及的microRNA(miR)调控作用,以探讨药物治疗β地中海贫血的新思路。方法:用不同浓度(0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L)的羟基脲作用于K562细胞24h、48h、72h、96h,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测γ珠蛋白及相关miR基因相对表达水平。结果:K562细胞γ珠蛋白基因表达显著增高(P<0.05),miR-451a和miR-503-3p基因表达明显升高(P<0.01)。结论:羟基脲能够诱导K562细胞γ珠蛋白基因高表达,其对γ珠蛋白基因的诱导作用可能通过促进miR-451a和miR-503-3p的表达来进行调控。

尿多酸肽对原代红系细胞γ-珠蛋白表达的体外研究

目的:探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对体外培养原代红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白表达的影响,为CDA-Ⅱ对β-地中海贫血的治疗提供新思路。方法:以不同浓度CDA-Ⅱ(0 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL、4 mg/mL)作用原代红系细胞24 h、48 h和72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Cell counting kit-8(CCK-8)法分别检测γ-珠蛋白基因的表达及细胞增殖-毒性情况;以3 mg/mL CDA-Ⅱ为实验组、200 nmol/L地西他滨和100μmol/L羟基脲为阳性对照组以及等体积PBS+DMSO为阴性对照组作用细胞后,采用RT-PCR检测γ-珠蛋白、DNA甲基转移酶1(DNMT1)和FOXO3a mRNA表达的变化;Western Blot(WB)检测γ-珠蛋白表达的情况。结果:RT-PCR结果表明,3 mg/mL CDA-Ⅱ作用细胞48 h和72h后上调γ-珠蛋白基因的表达作用明显(P<0.05),分别为空白对照组(0 mg/mL)的2.5倍和2.68倍;CCK-8结果显示细胞存活率存在时间和浓度依赖性下降,24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(5.28±0.67)mg/mL、(3.89±0.63)mg/mL、(2.35±0.20)mg/mL;与阴性对照组比较,CDA-Ⅱ组与地西他滨、羟基脲阳性对照组既可以降低DNMT1基因的表达(P<0.05)、升高FOXO3a基因的表达,同时可以上调γ-珠蛋白基因和蛋白的表达(P<0.01)。结论:CDA-Ⅱ对红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白的高表达可能与DNMT1和FOXO3a有关。

沙利度胺对人红系细胞γ珠蛋白基因表达的作用及相关机制研究

目的:研究沙利度胺对人红系细胞γ珠蛋白基因表达的作用及相关调控机制。方法:采用一步液体培养法培养人红系细胞,以不同浓度沙利度胺(50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L、300 μmol/L)、100 μmol/L羟基脲(阳性对照)分别作用于人红系细胞24 h、48 h、72 h、96 h,并设无任何干预的人红系细胞为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测γ珠蛋白基因及转录因子BCL11A、KLF1、KLF2、GATA1基因的表达水平,Western blotting法检测γ珠蛋白的表达量。结果:作用于人红系细胞72 h后,100 μmol/L、200 μmol/L、300 μmol/L沙利度胺组γ珠蛋白基因相对表达量高于空白对照组,200 μmol/L、300 μmol/L沙利度胺组及阳性对照组γ珠蛋白表达量明显高于空白对照组(均 P <0.05);与空白对照组比较,200 μmol/L沙利度胺组BCL11A、KLF1基因表达明显下降,阳性对照组BCL11A基因表达下降,KLF2基因表达升高( P <0.05)。结论:沙利度胺能诱导体外人红系细胞γ珠蛋白基因表达,增加γ珠蛋白的生成,BCL11A、KLF1的下调可能是沙利度胺诱导γ珠蛋白基因表达的作用机制之一。