HeLa、HEK293、SH-SY5Y细胞中的Tau蛋白

通过间接免疫荧光测定了HeLa、HEK-293、SH-SY5Y细胞内Tau蛋白的分布,观察到在细胞间期单克隆抗体Tau-1的荧光信号分布于细胞质和胞核中.特别是HeLa细胞,其胞核内具有相对较高的Tau蛋白免疫荧光信号.通过分离SH-SY5Y的细胞核,更为清楚地显示了Tau蛋白在细胞核中的分布,并且免疫荧光信号与DNA的Hoechst33258染色信号相重合.Western blotting的测定结果进一步证明了SH-SY5Y细胞的胞质和胞核中均含有Tau蛋白的不同异构体.以上结果提示,Tau蛋白不仅存在于神经、肌肉等细胞内,也存在于肿瘤细胞系,并且分布于间期的胞核中.

非酶糖基化对α-synuclein分子构象的影响

将纯化后的α-synuclein分别与果糖和葡萄糖孵育,通过内源荧光、非酶糖基化衍生物特征荧光、圆二色光谱以及电子显微镜等技术进行检测发现:α-synuclein与还原糖共同孵育后,308nm内源荧光强度明显降低,同时在447nm产生一个非酶糖基化衍生物特征荧光.与果糖孵育的蛋白质样品其非酶糖基化特征荧光的出现速度快于葡萄糖孵育样品.内源荧光与非酶糖基化特征荧光之间存在能量传递现象,提示Tyr残基与非酶糖基化特征荧光发色团在空间距离上彼此接近.圆二色光谱测定结果显示,α-synuclein与果糖孵育后,其α-螺旋含量增加.非酶糖基化的α-synuclein在电子显微镜下表现为短纤维状.非酶糖基化可以诱导α-synuclein蛋白分子聚集,且果糖较葡萄糖更容易使α-synuclein发生非酶糖基化.以上结果提示,非酶糖基化似乎可以导致α-synuclein在细胞内的错误折叠和分子聚集.

S100A7 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的:检测S100A7mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达情况,分析其与胃癌临床病理学参数的关系.方法:应用原位杂交技术和免疫组织化学SP法分别检测53例胃癌组织和53例正常胃黏膜组织中S100A7mRNA和蛋白的表达,并分析其表达与临床病理学参数之间的关系.结果:胃癌组织中S100A7mRNA和蛋白表达的阳性率(分别为77.36%和71.70%)显著高于正常胃黏膜组织(阳性率分别为15.09%和13.21%),χ2分别为41.330、37.110(均P=0.000).此外,S100A7mRNA和蛋白的表达与患者年龄、性别无关(均P>0.05),但与胃癌患者的分化程度、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移密切相关(均P<0.05).结论:S100A7的高表达可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用,其高表达可能是判定胃癌恶性程度十分重要的分子指标.

S100A11表达下调对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭的影响

目的研究S100A11表达下调对胃癌细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响。方法采用Western blot检测不同胃癌细胞株(MKN-28、SGC-7901和MKN-45)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中S100A11蛋白的表达。将S100A11siRNA和对照siRNA分别转染MKN-45细胞,将细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组和S100A11 siRNA组。采用Western blot检测转染前后S100A11蛋白的表达,并利用CCK-8试剂、流式细胞术及Boyden小室分别检测3组细胞的增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blot分析细胞周期和侵袭相关蛋白的表达。结果 S100A11蛋白在胃癌组织中表达的阳性率(69.81%,37/53)明显高于正常胃黏膜组织(16.98%,9/53)(χ2=30.110,P=0.000)。3株胃癌细胞株中S100A11蛋白表达水平显著高于正常胃黏膜上皮细胞(P<0.05),其中S100A11在MKN-45细胞中的表达水平显著高于MKN-28和SGC-7901(P<0.05)。S100A11 siRNA能显著下调MKN-45细胞中S100A11蛋白的水平,其表达下调显著抑制细胞的增殖、改变细胞周期分布和降低细胞的侵袭能力。S100A11表达下调能显著降低Cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达,但增加E-cadherin蛋白的表达水平。结论 S100A11介导胃癌细胞生物学行为的变化可能与Cyclin D1、Cdk2、E-cadherin和MMP-2表达变化密切相关,因而抑制S100A11的水平可能是胃癌潜在的分子治疗靶点。

S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将胃癌SGC-7901细胞分为3组:未转染组、对照siRNA组和S100A7 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和S100A7 siRNA。利用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析检测各组胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达;采用CCK-8和Boyden小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化。最后采用蛋白质印迹分析法检测3组胃癌细胞中cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达。结果S100A7 siRNA能下调胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达。S100A7 mRNA和蛋白表达下调抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达。结论S100A7表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1、Cdk2和MMP-2表达的下调密切相关。

S100A7表达与晚期胃癌化疗效果的相关性研究

在我国，胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其病死率居于首位，其中胃腺癌所占比例超过90％［1］。该病多见于老年人，多数患者在得到确诊时已发现有远处转移，丧失了进行手术根治的机会，治疗的目的仅仅是为了改善生活质量、延长生存时间。作为中晚期胃癌治疗方法之一，化疗是晚期胃腺癌患者首选的、行之有效的治疗方法［2］。NCCN指南推荐的用于晚期胃癌的一线化疗方案有DCF、ECF、ECF 及它们的改良方案等。 S100A7基因是S100基因家族成员之一，定位于人类染色体的1q21，其表达的蛋白质分子量为11．4 kDa［3，4］。研究显示，S100A7蛋白在多种肿瘤组织中呈现高表达，其中包括肺癌、皮肤癌、膀胱癌和食管鳞癌等［5-7］。笔者前期研究显示，胃癌组织中S100A7蛋白表达明显高于癌旁组织。

S100A7表达下调阻断NF-κB途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

S100A7与肿瘤的发生、发展密切相关。我们的前期研究显示，胃癌组织和细胞中均呈现SlooA7的过表达，并且其表达下调能明显抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和迁移。本研究中我们通过流式细胞术分析S100A7表达下调对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响，并探讨其与NF-κB途径之间的关系，为以S100A7为靶点的胃癌基因治疗提供理论依据。