一种分子检测魔芋中黄瓜花叶病毒的方法

为建立魔芋(Amorphophallus konjac)中黄瓜花叶病毒的有效检测方法,采用ELISA、RT-PCR、Realtime PCR检测魔芋中黄瓜花叶病毒(CMV)。结果表明,由于黄瓜花叶病毒在魔芋叶片中带毒量少且不稳定,ELISA酶联检测法和RT-PCR均不能有效检测出黄瓜花叶病毒,只有Real-time PCR方法才能将其检出。研究结果为魔芋中黄瓜花叶病毒快速、准确的分子鉴定提供了技术支持。

魔芋芋花叶病毒的检测

为评价魔芋(Amorphophallus konjac)体内芋花叶病毒检测方法,利用人工接种芋花叶病毒的魔芋作为试验材料,分别采用DAS-ELISA、RT-PCR、荧光定量PCR等3种方法进行检测。结果表明,对于人工接种芋花叶病毒1周,植株出现有明显病征的魔芋,荧光定量PCR检测的灵敏度最高、RT-PCR次之,而DAS-ELISA酶联检测法灵敏度较低。

一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统的建立

运动神经元是一类支配运动行为的重要神经元。传统的荧光蛋白标记的转基因斑马鱼品系(用于活体成像分析运动神经元形态发生)存在胞体密集、突触交错、不好区分单个神经元等不足。为了优化活体成像分析运动神经元,本研究旨在建立一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统。首先通过Gateway克隆技术将运动神经元表达基因mnx1启动子序列与绿色荧光蛋白-α-Tubulin融合蛋白序列构建到含有Tol2转座位点的表达载体中,然后将该质粒和Tol2 mRNA同时注射到4~8细胞期斑马鱼受精卵中,在72 hpf(hours post fertilization)进行共聚焦显微成像分析。结果显示,该系统中绿色荧光融合蛋白在3种类型运动神经元中表达,从而实现单个运动神经元嵌合标记。本研究进一步探索注射剂量与嵌合标记神经元数量以及分布频率的关系,并确定了重组蛋白的合适剂量(15 ng)。此外,本研究在该模型上验证了insm1a和kif15表达下调导致的运动神经元异常发育。这些结果表明我们成功建立了一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统,为探究运动神经元的发育和形态发生提供了一个直观和快速的模型,在运动神经元病发病机制和药物筛选等研究中有潜在的应用价值。