GJ-4治疗冈田酸所致阿尔茨海默病的药效学

目的 GJ-4是从中药中提取的富含藏红花色素类的物质,本实验研究GJ-4对冈田酸(OA)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的治疗作用。方法 ICR小鼠随机分成OA模型组和假手术组,OA模型组左侧脑室注射2μL(37.5 mg·L^(-1))溶于10%DMSO的OA造模,假手术组进行假手术注射同样剂量的含10%DMSO的生理盐水,手术24 h后将OA造模后的小鼠随机分成模型组、GJ-4组(12.5,25,50和100 mg·kg-1)及阳性药多奈哌齐组(5 mg·kg-1)。连续给药16 d,于给药第8天进行跳台实验,第9天至16天进行Morris水迷宫实验,末次行为学实验后每组4只灌流取脑,进行免疫组化实验,剩余取海马和皮质,进行各项生化指标测定。结果与模型组相比,GJ-4 50和100 mg·kg-1能显著提高小鼠跳台潜伏期(P<0.01)、减少错误次数(P<0.01),并呈剂量依赖性;在Morris水迷宫实验中GJ-4 50和100 mg·kg-1能剂量依赖性的减少小鼠找到平台的时间,缩短首次穿越目标的时间(P<0.01),增加穿越平台的次数(P<0.01);GJ-4可明显抑制Tau蛋白的过度磷酸化,部分逆转PP2A酶活性的抑制。结论 GJ-4对冈田酸所致AD小鼠模型有改善作用,其机制可能与其提高PP2A酶活性有关。

肠道菌群作用下芬乐胺的代谢活性和药理活性

目的研究肠道菌群在芬乐胺(FLZ)吸收代谢和药理学活性中的作用和具体机制,从而阐明FLZ低生物利用度与较高生物学活性之间的矛盾。方法在体外将FLZ(5 g·L^(-1))与SD大鼠的结肠内容物进行共孵育,在不同的时间点(0, 6, 12,24, 36和48 h)取混合液,进一步处理后通过LC/MS-IT-TOF检测FLZ经肠道菌群代谢生成的产物。在体内利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)和丙磺舒诱导慢性帕金森病(PD)动物模型的建立,在模型成功建立后给药,给药组主要分为单独给予FLZ组和同时给予FLZ和组合抗生素组,LC/MS-IT-TOF检测血、脑和粪便中FLZ及FLZ肠道菌群代谢产物的含量,爬杆和转棍实验检测小鼠的运动能力,免疫组化检测中脑酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和小胶质细胞激活标志物Iba-1,qPCR检测中脑炎症因子和炎症蛋白的表达。结果肠道菌群代谢FLZ生成其脱甲基产物M1。单独给予FLZ能够改善PD模型小鼠的运动障碍和神经损伤;但与单独给予FLZ组相比,同时给予FLZ和抗生素组后,PD模型小鼠血和脑中FLZ和M1的含量减少;爬杆实验评分、转棍实验潜伏期减低(P<0.05),即减弱FLZ对PD运动障碍的改善;中脑TH阳性神经元表达减少(P<0.05),激活的小胶质细胞数量、炎症因子IL1β、IL-6及炎症蛋白COX-2和YM-1表达增加(P<0.05),即减弱FLZ对神经炎症的抑制作用。结论肠道菌群可能通过代谢FLZ生成M1,进而促进FLZ的吸收代谢和影响FLZ的治疗活性。

GJ-4对帕金森病模型小鼠的保护作用及其机制

目的观察中药栀子提取物GJ-4对亚急性帕金森病(PD)模型小鼠的保护作用,并探索其可能作用机制。方法将C57/BL6J雄性小鼠随机分成空白对照组、模型对照组、GJ-4各剂量组(25,50,100 mg·kg^(-1))和阳性对照组(左旋多巴组)。除空白对照组外,其他小鼠以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶建立PD模型。GJ-4各剂量组与阳性对照组小鼠分别灌胃不同剂量GJ-4和左旋多巴,空白对照组与模型对照组灌胃相同剂量0.5%羧甲基纤维素钠,均每天1次,连续12 d。免疫组化检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目,蛋白印迹法(Western blot)测定小鼠中脑TH、iNOS蛋白含量变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠中脑肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2mRNA表达。结果与模型对照组比较,GJ-450 mg·kg^(-1)组和GJ-4100 mg·kg^(-1)组小鼠运动障碍改善,且呈剂量依赖性(P<0.05);与模型对照组比较,GJ-4100 mg·kg^(-1)组小鼠黑质TH阳性神经元数目显著升高(P<0.01),中脑TH蛋白表达明显升高(P<0.01),中脑TNF-α、IL-1β表达降低(P<0.05),中脑Bax降低(P<0.05),中脑Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论GJ-4对PD模型小鼠具有保护作用,其机制可能是抑制小鼠中枢神经系统炎症因子产生和细胞凋亡。

GJ-4对冈田酸诱发小鼠学习记忆障碍的神经保护作用和机制研究

GJ-4是从中药栀子中提取出的藏红花色素类活性成分,前期研究发现GJ-4对Aβ诱发的小鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用。本实验采用小鼠侧脑室注射冈田酸(okadaic acid, OA)建立记忆损伤模型(实验中所有操作均获得中国医学科学院北京协和医学院实验动物伦理委员会的批准,批准号:00000318),探讨GJ-4对Tau蛋白过度磷酸化引起神经元病变的改善作用及其机制。小鼠OA侧脑室注射后,连续16天灌胃给予GJ-4。结果显示, GJ-4可显著改善OA诱发的小鼠学习记忆障碍,同时减少小鼠海马区神经元尼氏小体的丢失。GJ-4可提高蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A, PP2A)活性并抑制糖原合成酶激酶-3β (glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)表达,进而降低Tau蛋白Ser396、Thr231和Ser404位点的磷酸化水平。进一步研究发现, GJ-4还可降低OA小鼠脑内氧化应激水平和海马星形胶质细胞活化介导的神经炎症而抑制神经元凋亡,最终发挥改善小鼠学习记忆障碍的作用。以上研究表明, GJ-4具有开发成为治疗阿尔茨海默症新药的良好前景。

泛素-蛋白酶体系统与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是常见的神经退行性疾病,其主要病理特征是神经元外β-淀粉样蛋白沉积导致的老年斑和神经元内神经元纤维缠结的形成。泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)是蛋白质降解的主要途径之一,也是清除异常蛋白和防止神经元内异常蛋白聚集的关键。泛素化蛋白的积累和聚集是许多神经退行性疾病的标志。AD患者脑中UPS功能障碍与β-淀粉样蛋白沉积、Tau蛋白磷酸化、突触功能低下和载脂蛋白E均有密切的关系,UPS在AD的发病机制中备受关注。因此,调控UPS及其相关蛋白的功能对AD有改善作用,可能是治疗AD的潜在靶点。本文就泛素-蛋白酶系统功能障碍与阿尔茨海默病之间的关系做一综述,为阿尔茨海默病的治疗提供新的方向。

栀子提取物GJ-4对利血平致抑郁症小鼠的作用及机制研究

目的探讨栀子提取物GJ-4对利血平致抑郁症小鼠的作用及机制。方法将ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组(利血平组)、氟西汀组(阳性药组,20 mg·kg^(-1))及GJ-4低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg^(-1)),每组17只;灌胃给药,每日1次,连续14 d。灌胃给药30 min后,采用腹腔注射利血平(0.2 mg·kg^(-1))复制抑郁症小鼠模型。采用观察眼睑下垂程度、旷场实验、悬尾实验、糖水偏好实验等行为学方法评价小鼠的抑郁状态;采用荧光法测定小鼠脑皮层单胺氧化酶A(MAO-A)的含量;高效液相色谱-电化学检测法测定小鼠脑皮层内单胺类神经递质[多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、高香草酸(HAV)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)]的含量。结果与正常对照组比较,模型组小鼠的眼睑下垂程度评分明显提高(P<0.001);运动功能明显受到抑制,走出格子的潜伏期明显延长(P<0.001),通过格子数明显减少(P<0.001);悬尾6 min内的不动时间显著增加(P<0.001);糖水偏好系数明显降低,糖水的消耗量明显下降(P<0.001);小鼠脑皮层内MAO-A的含量明显上升(P<0.001),DA、DOPAC、5-HT、HAV含量均明显下降(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,各给药组小鼠眼睑下垂程度评分明显降低(P<0.001);GJ-4中、高剂量组小鼠走出格子的潜伏期明显缩短(P<0.001),GJ-4高剂量组小鼠通过的格子数明显增加(P<0.05);各给药组小鼠的悬尾不动时间明显缩短(P<0.001);GJ-4低、中、高剂量组小鼠的糖水偏好系数明显升高,糖水消耗量明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001);GJ-4高剂量组小鼠脑皮层内MAO-A的含量明显降低(P<0.001),DOPAC、5-HT含量明显升高(P<0.01,P<0.001)。结论GJ-4对利血平致抑郁症模型小鼠具有明显的抗抑郁活性,其机制可能与抑制脑内MAO-A的活性,增加脑内5-HT和DOPAC的含量有关。

番荔枝酰胺衍生物FLZ对肠道功能和多巴胺神经元的保护作用

目的:研究番荔枝酰胺衍生物FLZ对小鼠结肠功能及多巴胺神经元的保护作用和机制。方法:在1-甲基-4-苯基^(-1),2,3,6-四氢吡啶(MPTP)联合丙磺舒(MPTP/p)诱导的慢性帕金森病(PD)小鼠模型中,FLZ 75 mg·kg^(-1)灌胃(ig)给药8周。测量小鼠的排便频率、排便总量和粪便干重,并进行转棍和爬杆测试;采用免疫组化测定中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的数量;采用Western Blot检测小鼠结肠和中脑TH、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)的表达,结肠中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达。结果:FLZ 75 mg·kg^(-1)显著改善慢性PD模型小鼠结肠收缩功能障碍,提高结肠TH的表达,抑制结肠i NOS,COX-2的表达。FLZ显著提高中枢多巴胺能神经元的功能,表现为小鼠转棍测试潜伏期延长和爬杆测试评分增加,中脑TH的数量和表达增加,中脑i NOS,COX-2的表达减少。FLZ抑制结肠PI3K/Akt炎症信号通路的激活。结论:FLZ可能通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠炎症,进而通过肠脑轴而减轻中枢炎症反应,保护多巴胺能神经元,改善PD小鼠运动功能障碍。