SH3域结合谷氨酸富含蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义的分析

目的分析SH3域结合谷氨酸富含蛋白(SH3BGR)基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义,研究SH3BGR蛋白对宫颈癌细胞系He La恶性转化、增殖和迁移能力的影响,并初步探索其调控机制。方法采用免疫组织化学染色方法(IHC)检测SH3BGR蛋白在宫颈癌组织中的表达。运用TCGA数据库和生物信息学相关方法分析SH3BGR表达水平与宫颈癌临床分期和患者生存率的关系。采用PCR进行SH3BGR基因的扩增,将其克隆至p HAGE-CMV-MCS-Izs Green载体,构建重组慢病毒表达质粒p HAGE-SH3BGR。将重组质粒p HAGESH3BGR与包膜质粒pMD2. G和包装质粒psPAX2共转染入人胚肾上皮细胞HEK293T,包装重组慢病毒,运用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒SH3BGR感染人宫颈癌细胞系He La,通过Western blot验证SH3BGR蛋白的表达。采用细胞增殖实验(CCK-8)、细胞划痕实验和软琼脂克隆形成实验分别评价过表达SH3BGR对HeLa细胞增殖、迁移及恶性转化能力的影响。运用小干扰RNA(siRNA)敲低人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7基因,观察SH3BGR蛋白的表达。结果 SH3BGR蛋白在宫颈癌组织中表达明显高于癌旁组织,SH3BGR高表达宫颈癌患者生存期显著短于低表达患者。慢病毒载体介导的SH3BGR蛋白的过表达可显著提高He La细胞的增殖、迁移和恶性转化能力。敲低HPV E6/E7可以抑制SH3BGR蛋白的水平。结论 HPV可能通过E6/E7上调SH3BGR蛋白的表达,促进宫颈癌恶性转化、增殖、迁移,SH3BGR蛋白的高表达不利于宫颈癌患者的生存。