树莓种苗组织培养技术体系研究

为满足贵州对优质树莓种苗的需求,以树莓幼嫩茎段为外植体进行组织培养,优化建立贵州优质树莓种苗的快繁技术体系。结果表明:贵州野生树莓腋芽的最佳诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.5mg/L+土豆汁100g/L+蔗糖3%+琼脂0.9%,诱导率达100%;最佳增殖培养基为MS+6-BA3.0mg/L+IBA 0.3mg/L+GA3 0.3mg/L+蔗糖3%+琼脂0.9%,增殖倍数达5倍;最佳生根培养基为MS+琼脂0.9%。经组织培养驯化,树莓苗的移栽成活率在80%以上,50d后可移栽大田。此体系可应用于树莓工业化生产。

杂交构树叶片组培快速繁殖体系的建立

为满足市场对杂交构树种苗的需求,以无菌苗叶片为外植体进行组织培养,优化其快速繁殖技术。结果表明:1)愈伤组织诱导及不定芽分化的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L,其愈伤组织诱导率达91.7%,不定芽分化率为88.3%。分化出的不定芽长势较好,叶片的颜色浓绿,且愈伤褐化、软化现象较少。2)继代增殖的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA30.5mg/L,增殖倍数可达5倍;3)生根适宜培养基为改良B5+6-BA 0.01mg/L+NAA 0.3mg/L+IBA0.5mg/L,生根率为60%。

短短芽孢杆菌GZDF3嗜铁素合成酶基因Gene5693的生物信息学分析及原核表达

目的:从短短芽孢杆菌GZDF3菌株中克隆嗜铁素合成酶基因Gene5693,构建其原核表达载体并进行重组表达。方法:利用antiSMASH软件对GZDF3全基因组序列进行次级代谢物预测分析,然后采用ExPASy在线分析预测嗜铁素合成酶基因Gene5693的基本理化性质并进行重组表达。结果:生物信息学分析结果显示,短短芽孢杆菌GZDF3全基因组序列与Petrobactin嗜铁素基因簇的相似性为83%,Gene5693基因编码的蛋白与Petrobactin嗜铁素编码的蛋白AsbE的相似性为51.06%;Gene5693编码蛋白氨基酸长度为327个氨基酸,分子量为39.05kDa,等电点(pI)为4.94,为酸性亲水性蛋白;Gene5693基因的PCR扩增成功获得预测的Gene5693基因片段,菌落PCR及重组DNA分子的双酶切电泳结果显示成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明Gene5693编码的蛋白大小与生物信息学预测的结果一致。结论:成功克隆了嗜铁素合成基因Gene5693,并进行了重组表达。

短短芽孢杆菌GZDF3全基因组密码子偏好性分析

为了解短短芽孢杆菌GZDF3全基因组密码子的使用特性,采用Codon W 1.4.2软件和Mobyle portal在线软件分析菌株GZDF3全基因组密码子偏好性,分析该菌的相对同义密码子使用度(relative synonymous codon usage,RSCU)、密码子适应指数(codon adaption index,CAI)、有效密码子数(effective number of codon,Nc)、同义密码子第3位中G/C含量(GC3s)和高表达优越密码子。结果表明,短短芽孢杆菌GZDF3密码子第2位密码子的GC含量明显低于第1位和第3位,为37.56%,第1位和第3位的GC含量差异较小,分别为55.50%和51.13%;基因组大部分Nc值介于30~60,说明密码子偏好性普遍偏弱;RSCU值大于1的密码子共有27个,其中以A或T结尾的14个,占51.9%,并确定了27个最优密码子,为外源基因表达提供理论基础。