MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响

目的:探讨MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响及其可能机制。方法:MN9D细胞分别以0、1μmol/L MPTP处理(对照组和MPTP组),或分别以pcDNA4、pcDNA4-BACE2转染(对照组和BACE2组),采用Western blot法检测BACE2、Cleaved Caspase-3和内源性DSG2蛋白的表达。MN9D细胞分为DSG2组、DSG2+BACE2组和DSG2+BACE2+BACE抑制剂组,分别转染pENTER-DSG2+pcDNA4、pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2以及转染pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2后用1μmol/L的BACE抑制剂处理,采用Western blot法检测DSG2全长以及DSG2各片段的表达。结果:与对照组相比,MPTP组中BACE2及Cleaved Caspase-3表达均上升(P<0.05);与对照组相比,BACE2组Cleaved Caspase-3表达增加,内源性DSG2表达减少(P<0.05)。与DSG2组相比,DSG2+BACE2组中全长DSG2表达下降,DSG2羧基末端片段以及胞外DSG2氨基末端片段均增多(P<0.05),而DSG2+BACE2+BACE抑制剂组中全长DSG2及各DSG2片段的表达与DSG2组相似(P>0.05)。结论:MPTP可通过上调BACE2促进MN9D细胞凋亡,其机制可能与BACE2对DSG2的剪切有关;BACE2和DSG2可能参与了帕金森病的发病。

液相色谱-质谱联用测定蛋粉中胆固醇含量

建立了液相色谱-大气压化学电离-同位素稀释质谱法测定蛋粉中的胆固醇含量的方法。本方法采用选择离子模式检测,用括弧法对蛋粉胆固醇进行定量计算。通过胆固醇一级标准物质保证测量过程的溯源性,通过采用添加胆固醇同位素标记物作为内标减少了样品前处理过程和液相色谱-质谱测定时物质响应所产生的误差,提高了测量结果的准确性。本方法具有较高的测量准确度和精密度,可作为复杂基体胆固醇测定的高准确度测定方法。

液相色谱法测定多元维生素片中4种水溶性维生素

采用高效液相色谱法测定多元维生素片中盐酸硫胺(B1)、核黄素(B2)、泛酸钙(B5)、盐酸吡哆醇(B6)的含量。重点考察了提取条件对于维生素测定的影响,4种维生素在确定的浓度范围内分别与色谱峰面积呈良好的线性关系,r2≥0.9999,加标回收率为99.2%～101.4%。4种维生素的检出限分别为0.30、0.19、0.45、0.11μg/g(S/N>10)。该方法可作为实际测试标准方法使用。

特征脂肪酸在鉴别地沟油中的应用

采用气相色谱法系统考察了正常植物油、地沟油、煎炸老油中的脂肪酸组成和不饱和度。实验发现在正常植物油中辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸未检出或含量极低,而在地沟油和煎炸老油中这4种脂肪酸色谱峰明显,并且地沟油的不饱和度(2.38)明显低于正常植物油。采用判别分析和偏最小二乘法分析发现,十七碳以下的脂肪酸具有显著的指纹图谱特征,可以作为特征脂肪酸有效实现对正常植物油、地沟油和煎炸老油的鉴别。

气相色谱质谱法测定植物油中脂肪酸

建立了气相色谱质谱法测定食用植物性油中脂肪酸检测的方法。植物油中的脂肪酸甘油酯在碱性条件下被水解为游离脂肪酸,随后采用三氟化硼将其转化为脂肪酸甲酯。采用同位素标记脂肪酸进行加标回收试验,回收率在94%以上。通过质谱的选择离子检测模式对硬脂酸、油酸、亚油酸等10种目标脂肪酸进行了检测,结果显示,该方法可用于油品的质量检测和日常分析。

固相萃取-高效液相色谱法测定枣中熊果酸和齐墩果酸

采用正交设计方法优化枣中熊果酸和齐墩果酸的提取工艺,并建立熊果酸和齐墩果酸的固相萃取-高效液相色谱测定方法。样品经乙醇提取,减压浓缩,C18固相萃取小柱净化后,采用高效液相色谱方法分离,以甲醇-磷酸盐溶液作流动相,等度洗脱,紫外检测器检测。齐墩果酸和熊果酸在0.01～1.0mg/mL浓度范围内与峰面积线性良好,线性相关系数分别为0.9998和0.9999。样品的平均加标回收率为95.1%～98.8%,方法的检出限为1.0～3.7μg/mL(S/N=3),同一样品测定结果的相对标准偏差小于2.0%(n=7)。方法具有简单、快速,灵敏、可靠的特点,适用于枣及枣类产品中熊果酸和齐墩果酸含量的测定。

液相色谱串联质谱同位素稀释法测定污水中卡马西平

卡马西平作为主要的水环境药物污染物,具有极高的检出率。为准确测定污水中卡马西平,该文建立同位素稀释液相色谱串联质谱法。采用卡马西平同位素内标,有效地消除样品前处理过程的干扰,实现卡马西平的准确定量检测。方法的检出限为0.045 ng/m L,方法线性系数r2=0.999(0.5~20 ng/m L)。3个污水厂样品测定结果显示,在当前的工艺条件下,卡马西平不能被有效消除,排放水中卡马西平的最高质量浓度可达128.86 ng/L。

17种氨基酸混合溶液标准物质的研制

实验中使用的仪器为氨基酸分析仪（L-8800，Hitachi）。氨基酸纯度标准物质由中国计量科学研究院化学所（原国家标准物质研究中心）提供。实验中所使用的水经Millipore纯水器制备，盐酸（北京化学试剂研究所）为分析纯，经过重蒸处理后使用。本实验中所使用的其他化学试剂如柠檬酸钠、柠檬酸、氯化钠等均为分析纯，分别购自Sigma公司和Merck公司。

水环境中药物计量标准需求探讨

水环境中药物已经成为一种新型"持久性"污染物,大量的药物及其代谢物对生态安全和生物的健康具有潜在的巨大威胁。准确测定水环境中的药物种类和含量,对于环境药物污染防治具有重要意义。水环境中药物标准物质作为量值的载体,在化学测量中具有重要作用。提出了研究开发环境药物计量标准的必要性和意义。

生物计量与环境污染

以温室气体排放为中心议题的哥本哈根会议,在通过了一纸没有约束力的决议后闭幕。但日益严重的环境污染问题并不仅仅只有温室气体的排放,大气污染、水污染、固体废物污染、噪声污染、电磁污染和光污染均给人类的生产与生活带来了重大影响,甚至严重影响了人们的健康,这些污染如何界定,其排放量如何测量,均离不开计量,而在环境污染的监测和治理方面,生物计量的重要作用正逐步显现。

5种脂肪酸甲酯化方法的酯化效率研究

以花生油为样品,采用气相色谱法对常用的5种脂肪酸甲酯化方法进行了评价.结果表明：5种方法的甲酯化效率存在很大差异;三甲基硅重氮甲烷法仅适用于游离态脂肪酸样品的甲酯化分析;硫酸-甲醇法、氢氧化钠-甲醇法、三氟化硼-甲醇法、乙酰氯-甲醇法可以实现样品中脂肪酸的甲酯化,其中乙酰氯-甲醇法的效率最高,其对样品中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的甲酯化效率分别是其他3种方法的1.10～1.70倍和1.03 ～1.44倍.乙酰氯-甲醇法对于结合态的脂肪酸样品测定结果更加准确可靠.

超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎(功率300 W,频率24 kHz)技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2 min;dTMP:4.7 min;dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比(A∶T=0.95,C∶G=0.98)与理论值接近。本方法的测定结果(47.24μg/g)与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR,45.98μg/g)和PicoGreen荧光染料法(46.02μg/g)的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析。

转基因大豆Mon89788基体标准物质协同实验研究

对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认，标准物质的多家实验室协同实验，以及测最的不确定度评估。多家测定分析结果表明，转基因大豆Mon897883种不同外源基因／内源基因含量水平的标准物质参考值和扩展不确定度分别为0．35％±0．17％，0．61％±0．14％，3．17％±1．70％（k=2）。基体为大豆粉的该标准物质可用于转基因大豆含量的定量检测。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定食品中糖醇含量的研究

针对口香糖、饼干、面包、饮料等食品中添加的代糖成分赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇和麦芽糖醇的检测,建立了水和乙腈为流动相,等度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器检测食品中添加的糖醇含量的高效液相色谱方法。赤藓糖醇、木糖醇、山梨醇和麦芽糖醇的线性工作范围分别为140-525、100-500、100-500、100-500μg/m L,线性相关系数R2分别为0.998、0.999、0.999和0.999,对不同类型的食品,四种糖醇的回收率在91.9%-105.2%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于5%,室间再现性变异系数一般都低于10%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、便于操作,测定结果准确,适于复杂食品基质中糖醇含量的测定。

荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析

建立荧光标记寡核苷酸反相离子对色谱分析方法,优化了流动相醋酸三乙胺浓度(0～0.15 mol/L),pH4.5～7.0和洗脱强度等色谱条件。对5-mer,10-mer和15-mer非标记和5′-羧基荧光素(5′FAM)标记寡核苷酸的保留进行比较分析,研究荧光标记寡核苷酸的保留机理,并分离TaqManTM探针等多种常用荧光标记寡核苷酸。结果显示,不同长度荧光标记寡核苷酸在0.01 mol/L醋酸三乙胺,pH7.0的条件下获得最大分离。荧光标记寡核苷酸的保留与非标记寡核苷酸有明显差异,两者可完全分离。在一定长度范围内非标记寡核苷酸随长度的增加,保留时间增长;相反,荧光标记寡核苷酸的长度增加,保留时间减短。荧光染料疏水性对其标记的寡核苷酸在反相柱中的保留有较大影响,荧光染料疏水性越强,其标记寡核苷酸保留时间越长。但疏水性的影响程度随标记寡核苷酸长度增加而逐渐变小。

转基因棉花Monl5985质粒标准物质多家验证实验研究及不确定度分析

对转基因棉花Monl5985实时荧光定量PCR方法进行了方法确认，组织多家实验室进行协同实验验证，对该标准物质参考值进行测定。经统计分析，得出Monl5985质粒分子的参考值为1．02，扩展不确定度为0．04（k=2）。质粒分子与转基因棉花Monl5985的基因组DNA相比，无论是扩增斜率还是线性相关性，均具有可替代性，该棉花转基因Monl5985质粒标准物质，可作为分析检测标准提供相关部门使用。

DNA甲基化定量测量国际比对CCQM P94.2

建立基因组DNA基质中CDKN2A基因甲基化含量的液相色谱同位素稀释质谱法和Sanger序列测定法两种定量方法,应用于国际物质量咨询委员会(consultative committee for amount of substance,CCQM)开展的DNA甲基化定量测量国际比对(CCQM P94.2)研究。考察DNA甲基化效率、酶解条件、色谱分离条件等对测定结果的影响,评定测量结果的不确定度。液相色谱同位素稀释质谱定量两个比对未知样的结果分别为未知样1:64.5%±6.1%;未知样2:46.7%±8.0%。Sanger序列测定法测定两个比对未知样的结果分别为未知样1:48.9%±1.0%;未知样2:48.9%±1.1%。与主导实验室标准值未知样1:51%±5.9%,未知样2:46.9%±4.9%十分符合,为我国DNA甲基化定量测量标准物质的研制奠定坚实的基础。

转基因油菜TOPAS 19/2质粒分子多家协同实验及不确定度评定

质粒分子是转基因产品核酸定量检测的一类新型标准物质,具有易制备、周期短、成本低等特点。采用实时荧光定量PCR技术,并协同7家实验室对转基因油菜TOPAS 19/2质粒分子进行了基因组的可替代性研究、协同实验研究及不确定度评定。T检验表明,质粒和基因组所产生的内源和外源基因标准曲线的斜率和线性相关系数没有显著性差异。对多家定值的数据进行了统计分析得出,TOPAS19/2质粒分子的量值结果为0.910,扩展标准不确定度(K=2)为0.013。

次黄嘌呤核苷酸二钠盐纯度标准物质的研制

采用市售次黄嘌呤核苷酸二钠盐为原料,经重结晶纯化后研制呈味核苷酸标准物质,用红外光谱法和质谱法对纯化后的次黄嘌呤核苷酸二钠盐样品进行定性鉴定,用高效液相色谱法对纯化的核苷酸进行定量分析。探讨了高效液相色谱法分析次黄嘌呤核苷酸二钠盐的分离和检测条件。试验发现有机溶剂可以显著改善次黄嘌呤核苷酸二钠盐的出峰时间,酸度和盐离子浓度可以显著改善色谱的分离度。采用多家实验室联合分析的方法对标准物质进行定值,研制的次黄嘌呤核苷酸二钠盐标准物质的纯度为99.75%,定值结果不确定度为0.32%(k=2)。

腺嘌呤核苷一磷酸纯度标准物质的研制

以市售腺嘌呤核苷一磷酸为原料经纯化后研制脱氧核糖核苷酸标准物质。用红外光谱法和质谱法对纯化后的腺嘌呤核苷一磷酸样品进行定性鉴定,采用高效液相色谱法对腺嘌呤核苷一磷酸样品进行定量分析。探讨了高效液相色谱法分析腺嘌呤核苷一磷酸的分离和检测条件。实验发现,有机溶剂可以显著改善腺嘌呤核苷一磷酸的出峰时间,酸度和盐离子浓度可以显著改善色谱的分离度。采用多家实验室联合分析的方法对标准物质进行定值,研制的腺嘌呤核苷一磷酸标准物质的纯度为99.61%,定值结果不确定度为0.13%(k=2)。