G-CSF通过miR-146a/Smad4信号通路对HL-60白血病细胞增殖的调控作用

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对白血病细胞株HL-60中mi R-146a/Smad4表达水平和白血病细胞增殖活性的影响。方法采用G-CSF(50 ng/m L)提前48 h处理人白血病HL-60细胞株,另设G-CSF未处理组作为对照。采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,实时荧光定量PCR检测mi R-146a及Smad4 m RNA表达情况,Western blotting检测总Smad4蛋白表达。结果 G-CSF升高白血病细胞mi R-146a表达,同时降低细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白的表达,提高白血病细胞的增殖活性。转染了mi R-146a过表达质粒后的白血病细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白表达均降低,而用G-CSF处理转染后的细胞,其mi R-146a表达升高及Smad4表达降低得更为明显。结论 G-CSF通过调控mi R-146a/Smad4信号轴,影响Smad4表达水平,刺激处于静止状态的白血病细胞进入细胞增殖阶段。

复方苦参注射液影响HL-60细胞迁移的机制研究

目的探讨复方苦参注射液(CKI)影响HL-60细胞迁移的机制。方法选取HL-60细胞株作为研究对象,根据不同加药方案分为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组(40ng/mL)、CKI组(0.5ng/mL)、G-CSF和CKI联合加药组和空白对照组,共培养48h后采用蛋白质印迹法(WB)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测微小RNA-146a(miR-146a)、趋化因子CXC受体4(CXCR4)等信使RNA(mRNA)、CXCR4蛋白表达变化情况;同时采用Transwell小室检测CKI、G-CSF作用前后细胞迁移率变化情况。结果 (1)与空白对照组相比,基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)能促进HL-60细胞的迁移[(2.01±0.13)比(1.05±0.10),P<0.05],而CKI组、G-CSF组、CKI联合GCSF组均能阻断HL-60细胞向SDF-1α迁移[(1.50±0.04)、(1.68±0.08)、(1.27±0.02)比(2.01±0.13),P<0.05]。(2)与空白对照组相比,CKI、G-CSF处理HL60细胞后,CXCR4的mRNA、蛋白表达均受抑[(0.75±0.10)、(0.47±0.09)比(1.00±0.08),P<0.05];与CKI组、G-CSF组相比,CIK联合GCSF组CXCR4的mRNA蛋白表达受抑更明显[(0.24±0.04)比(0.47±0.09)、(0.75±0.10),P<0.05]。(3)与空白对照组比较,G-CSF、CKI处理HL-60细胞后,miR-146a表达显著上调[(5.59±0.46)、(3.53±0.39)比(1.03±0.11),P<0.01];而联合加药组上调更明显[(6.76±0.54)比(5.59±0.46)、(3.53±0.39),P<0.05]。结论 CKI能协同G-CSF上调miR-146a表达,通过降低HL-60细胞表面的CXCR4表达而阻断CXCR4/SDF-1α信号轴,最终导致HL-60细胞体外迁移能力明显下降。

粒细胞集落刺激因子和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的机制研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的作用及其机制。方法:用G-CSF、AMD3100单药或联合处理HL-60细胞株后,与HS-5上清或HS-5细胞共培养,采用CCK-8法检测细胞活力,用AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,流式细胞术和蛋白印迹法分别检测膜表面CXCR4蛋白、总CXCR4蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测mRNA表达情况。结果:HS-5上清或细胞能够保护HL-60细胞免于自发或药物诱导的凋亡,而G-CSF和AMD3100均能够部分逆转这种保护作用,两药联合时更明显;G-CSF能够降低细胞膜表面和细胞质内总CXCR4蛋白及CXCR4 mRNA的表达,同时上调micro RNA-146a(miR-146a)表达;AMD3100只能降低膜表面CXCR4表达,对细胞质内总CXCR4蛋白、CXCR4 mRNA和miR-146a表达无影响。结论:G-CSF和AMD3100通过不同机制降低白血病细胞的CXCR4表达而阻断CXCR4/CXCL12信号轴,从而打破骨髓微环境-白血病细胞间的相互作用,直接增强化疗药物杀伤作用。