人骨形态发生蛋白质7基因转染兔骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化(英文)

背景:骨形态发生蛋白质是目前发现惟一的一类具有成骨能力的细胞因子,它能刺激基质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞方向分化。目的:应用基因工程方法,观察人骨形态发生蛋白质7基因转染兔骨髓基质干细胞向成骨细胞的定向分化。设计:单一样本观察。单位:中山大学附属第一医院骨科。材料:pcDNA1.1/AMP-hBMP7质粒。方法:实验于2004-05/2005-03在中山大学附属第一医院外科实验室完成。全骨髓培养法培养兔骨髓基质干细胞,在体外分别转染pcD-NA1.1/AMP-hBMP7和pcDNA1.1/AMP并留置空白对照。检测转染基因的转录和表达,观察细胞形态和生长情况,通过对感染细胞的碱性磷酸酶染色、钙盐染色、电镜观察胞质中钙质成分以及检测骨钙素鉴定其成骨分化表型。主要观察指标:①兔骨髓基质干细胞的形态及生长。②表达产物的鉴定。③碱性磷酸酶染色(钙钴法)结果。④茜素红染色结果。⑤透射电镜观察结果。⑥扫描电镜观察结果。⑦骨钙素的测定结果。结果:人骨形态发生蛋白质7基因存在于转染后的骨髓基质干细胞中并表达相应的mRNA。目的基因表达后的细胞形态略有变化,但生长曲线与未转染组无明显变化。骨钙素表达较未转染组明显增强。转染组细胞的碱性磷酸酶染色和钙盐染色均为阳性。结论:人骨形态发生蛋白质7基因转染可促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞表型分化。

hBMP7瞬时转染对兔骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

【目的】运用人骨形成蛋白hBMP7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)基因体外转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。【方法】密度梯度离心法培养兔MSCs,在体外分别转染pcDNA1.1/AMP-hBMP7和pcDNA1.1/AMP并留置空白对照。检测转染基因的转录和表达,观察细胞形态和生长情况,检测碱性磷酸酶、钙结节和骨钙素等成骨细胞表型。【结果】hBMP-7基因存在于转染后的骨髓间充质干细胞中并表达相应的mRNA。目的基因表达后细胞形态略有变化,生长曲线与耒诱导组无明显变化.钙结节形成,碱性磷酸酶增加,骨钙素表达增强。电镜见胞质中有钙质成分。【结论】hBMP-7基因可促进兔MSCs向成骨细胞表型转化。hBMP-7基因转染的MSCs有望成为组织工程化骨理想的种子细胞。

胎儿毛乳头细胞分化为类成骨细胞的实验研究

目的研究胎儿毛乳头细胞的体外成骨能力,为骨组织工程提供一种新的种子细胞。方法Ⅰ型胶原酶消化法分离毛乳头,常规成纤维细胞培养液培养毛乳头细胞。第3代和第7代细胞经成骨诱导液诱导培养7d,以免疫荧光、VonKossa等方法鉴定毛乳头细胞及检测细胞的成骨特性。结果培养的毛乳头细胞呈聚集性生长,表达平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原。经成骨诱导后表达骨桥蛋白,有钙结节形成。结论毛乳头细胞具有成骨活性,可作为骨组织工程的种子细胞。