山柰酚调控Akt/Bcl-2/Caspase通路促进非小细胞肺癌细胞发生凋亡

目的:明确山柰酚在非小细胞肺癌(NSCLC)中的具体生物学作用,并阐释其作用机制。方法:以人NSCLC细胞株H1299和A549为研究对象,MTT法观察山柰酚对其细胞增殖的影响;流式细胞术检测山柰酚对NSCLC细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测山柰酚处理后,肺癌细胞中Caspase、Bcl-2家族、Akt通路及磷酸化Akt的表达水平。结果:山柰酚以浓度和时间依赖性抑制NSCLC细胞活力;山柰酚诱导NSCLC发生细胞凋亡;山柰酚呈浓度依赖性促进凋亡执行因子Caspase-3及Caspase-7蛋白裂解,抑制Bcl-2蛋白表达,提高Bax、Bad蛋白表达;并抑制Akt的磷酸化。结论:山柰酚通过Akt/Bcl-2/Caspase通路促进非小细胞肺癌发生细胞凋亡。

miR-24-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖

目的:探究miR-24-3p是否通过调控STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖。方法:荧光素酶报告基因验证miR-24-3p与STAT3的3'UTR结合,qPCR、Western Blot法检测miR-24-3p对STAT3的mRNA和蛋白表达量的影响,CCK8法检测miR-24-3p对鼻咽癌细胞增殖的抑制作用,并检测过表达STAT3是否逆转miR-24-3p的抑制增殖效果。结果:miR-24-3p与STAT3的3'UTR可直接结合,过表达miR-24-3p可减少STAT3表达量,而抑制miR-24-3p可增加STAT3表达量,过表达miR-24-3p抑制鼻咽癌细胞增殖,这一效果可被过表达STAT3逆转。结论:miR-24-3p通过直接靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖。

重楼皂苷Ⅰ激活IGFBP1信号通路抑制肝癌细胞生长和增殖的作用机制

目的:探讨中药单体重楼皂苷Ⅰ抑制肝癌细胞生长和增殖的分子作用机制。方法:采用MTT和EDU法检测肝癌Bel-7402细胞的生长和增殖情况;Western Blot法检测Bel-7402细胞中肿瘤相关特异蛋白1(Sp1)和胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的表达水平;采用细胞瞬间转染技术将Sp1过表达质粒或IGFBP1 siRNA转染至细胞;双荧光素酶基因报告系统检测IGFBP1启动子活性。结果:MTT结果发现PPI处理肝癌Bel-7402细胞24、48、72 h后,显著抑制细胞的生长,且呈时间和剂量依赖关系;EDU实验结果显示PPI可显著抑制Bel-7402细胞的增殖(P<0.05);双荧光素酶检测结果表明PPI显著上调Bel-7402细胞中IGFBP1启动子活性(P<0.05);Western Blot结果证实,PPI显著下调Sp1蛋白表达水平(P<0.05),上调IGFBP1蛋白表达水平(P<0.05),过表达Sp1可阻断PPI对IGFBP1的上调作用(P<0.05),siRNA沉默IGFBP1有效逆转PPI对肝癌Bel-7402细胞的生长抑制作用(P<0.05)。结论:IGFBP1可能是PPI抑制肝癌Bel-7402细胞生长和增殖的关键靶蛋白,PPI通过调控Sp1/IGFBP1信号通路抑制肝癌Bel-7402细胞的生长和增殖。

斑蝥素引起小鼠急性膀胱炎的作用及相关机制

目的：探索斑蝥素（cantharidin,CTD）在1/2半数致死量（median lethal dose,LD50）条件下灌胃引起的小鼠急性膀胱炎的病理表现及其相关机制。方法：取Balb/c小鼠,分为空白组与CTD给药1~14 d组。给药组分别以CTD 1/2 LD50灌胃给药不同天数,空白组给予等量的0.5%的羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na）,最后1次给药3 h后取小鼠膀胱组织,用苏木素-伊红（HE）染色法分别检测CTD给药1~14 d小鼠膀胱的病理组织学变化,用蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测CTD给药1 d组小鼠的膀胱组织中与炎症相关的信号通路中的蛋白表达情况。结果：HE染色结果表明,与空白组比较,斑蝥素给药1,3,8~12 d组膀胱组织病变比较明显,主要表现为黏膜上皮剥脱、黏膜上皮增生、固有层水肿或伴出血以及黏膜炎细胞浸润等组织炎症性病变。WB结果显示,与空白组相比,CTD给药1 d组,小鼠膀胱组织中磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,蛋白激酶B（Akt）蛋白,磷酸化的核转录因子-kappa B（p-NF-κB）p65蛋白,磷酸化的核转录因子kappa B的抑制蛋白alpha（p-IκBα）,IκBα蛋白表达水平上升（P〈0.01）。结论：CTD给药3 h即可引起小鼠急性膀胱炎,且给药前7 d机体对CTD导致的膀胱损伤尚有修复能力,给药8~14 d膀胱表现出不可逆且逐渐加重的炎症性病变,Akt信号通路及NF-κB信号通路的激活与CTD引起的急性膀胱炎存在一定相关性。