贻贝蒸煮液美拉德反应制备海鲜调味基料工艺研究及其挥发性风味分析

为提高贻贝加工过程中产生的副产物利用率,该文以贻贝蒸煮液为原料,经浓缩、酶解后进行美拉德反应,以期制备一种贻贝风味的调味基料。通过单因素试验结合Friedman排序检验法、吸光度测定和响应曲面结合模糊数学感官评价法,探究贻贝蒸煮酶解液美拉德反应最佳工艺条件,并采用GC-MS测定美拉德反应产物的挥发性风味成分。结果表明,贻贝蒸煮液美拉德反应的最佳条件为:还原糖添加量3%(质量分数)、反应温度115℃、反应时间2 h、反应初始pH 7.5。GC-MS分析结果显示,醛类、酮类是美拉德反应产物的主要风味物质,吡嗪类、呋喃类等物质丰富了风味层次,提高了美拉德反应产物的整体香气。该研究结果可为贻贝加工副产物高值化利用提供一定参考。

金松酸对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的:本研究旨在探究金松酸(sciadonic acid,SA)对高脂饮食诱导小鼠肥胖的改善作用。方法:将48只C57BL/6雄鼠适应性喂养一周后随机分为正常组(C)、阳性对照组(S)、模型组(M)、金松酸低剂量组(LSA)、金松酸中剂量组(MSA)和金松酸高剂量组(HSA)。造模和给药同时进行,持续16周,低、高剂量组每日固定时间灌胃不同剂量的金松酸溶液。实验结束后从血脂代谢、肝脏脂肪代谢、肝脏氧化应激、肝脏脂质合成和代谢相关基因的表达等几个方面探讨金松酸调节肥胖小鼠脂质代谢的潜在机制。结果表明,高剂量金松酸干预肥胖小鼠能显著降低血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,增加高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(P<0.05),抑制体重增长,减少附睾脂肪积累,对肝组织损伤具有改善作用。此外,金松酸能明显提高小鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)等抗氧化酶的活性(P<0.05),并显著降低氧化终产物MDA的生成(P<0.05),缓解体内氧化应激反应,并通过调节脂质代谢相关基因的表达,抑制脂质合成,改善脂质代谢。综上,金松酸可通过抑制脂肪积累,缓解氧化应激,调控脂质合成和代谢改善肥胖小鼠脂质代谢紊乱。

香榧油对肥胖小鼠脂质代谢紊乱的作用机制研究

肥胖是一种普遍存在的疾病,与许多严重的并发症有关。为了探究香榧油对肥胖小鼠脂质代谢影响的潜在分子机制,以高脂饮食建立肥胖小鼠模型,评估香榧油的降脂、抗氧化和抗炎症功能。结果表明,与高脂饮食(high-fat diet,HFD)组小鼠相比,香榧油高剂量(Torreya seed oil high-dose,SCH)组小鼠总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的水平均显著降低,高密度脂蛋白胆固醇的水平显著升高(P<0.05)。香榧油能显著抑制体重增长,降低肝脏系数和肾周脂肪积累。此外,香榧油干预后能降低肥胖小鼠血清中肿瘤坏死因子-α和白介素6水平,提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶酶活力,改善氧化应激和炎症反应。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)结果显示,与HFD组相比,香榧油低剂量(Torreya seed oil low-dose,SCL)组小鼠固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SPEBP-1c)表达水平显著降低(P<0.05),而腺苷酸活化蛋白激酶α(adenosine monophosphate(AMP)-activated protein kinase alpha,AMPKα)和脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)的表达水平略有降低但不显著;SCH组小鼠AMPKα、SPEBP-1c和FAS表达均显著降低(P<0.05)。香榧油改善肥胖小鼠脂质代谢紊乱的作用机制可能是通过调节AMPKα/SREBP-1c信号通路,提高抗氧化水平和降低炎症反应实现。

香榧籽油中金松酸提取制备工艺研究

香榧籽油营养丰富,保健功能高。文章旨在探究香榧籽油中金松酸的最适宜的提取工艺。运用尿素包埋法,在单因素试验的基础上,采用响应面法对香榧籽油中金松酸的提取制备工艺进行优化。结果表明,尿素包埋提取香榧籽油中金松酸的最佳实验条件为:结合时间2.07 h、尿素质量33 g、结合温度68.93℃,在此条件下,香榧籽油中的金松酸最佳提取量是4.53 g。

家蚕核型多角体病毒ODV囊膜蛋白基因的融合表达及引导外源蛋白进入多角体的研究

为了探索家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的包涵体衍生病毒(ODV)囊膜蛋白在病毒粒子包涵入多角体过程中的作用,选择2个ODV囊膜蛋白ODV-E25和ODV-E56作为研究对象,利用能够表达多角体蛋白的BmNPV Polh+Bac-to-Bac表达系统构建了融合表达E25-EGFP和E56-EGFP的重组病毒,在家蚕卵巢培养细胞系(BmN)中进行表达和定位分析。结果表明2种融合蛋白均在BmN细胞中成功表达,并于荧光显微镜下观察到绿色荧光主要分布在细胞核中。从感染的BmN细胞中收集纯化多角体,观察到多角体也能激发出绿色荧光,用Western blot方法进一步证实多角体中含有融合蛋白。这一现象表明当囊膜蛋白基因与外源基因融合表达时,外源融合蛋白能够进入多角体内部,推测这2种ODV囊膜蛋白不仅在病毒粒子包涵入多角体的过程中起信号引导作用,并能引导外源目的蛋白进入多角体。

昆虫包涵体衍生病毒囊膜蛋白的分子生物学

了解杆状病毒的囊膜蛋白对揭示病毒入侵、囊膜蛋白核定向转运机制以及研究控制昆虫新策略等方面具有重要意义。目前研究表明,包涵体衍生病毒(occlusion-derived virus,ODV)的囊膜蛋白包括ODV-E25,ODV-E66,ODV-E56,ODV-E18,ODV-E28,P74,PIF1,PIF2,PIF3,GP41,ODV-EC27,ODV-E35,ODV-EC43,BV/ODV-E26,P91和ORF150。本文结合国内外的研究成果系统地综述了囊膜蛋白的结构和功能,其在经口感染、调节细胞周期和囊膜蛋白的传送等方面起作用。囊膜蛋白的核定向转运机制,ODV与昆虫中肠之间和包涵体基质之间相互作用以及ODV结构蛋白之间的相互作用等将是今后的研究重点。

利用BmNPV多角体包埋外源蛋白的观察

家蚕核型多角体病毒在感染晚期大量表达产生多角体蛋白,并形成结构致密的超大分子蛋白质晶体,以有效保护内部包埋的病毒粒子,保证子代病毒的传播。借鉴多角体包埋病毒粒子的原理,观察到多角体也能将外源蛋白质固定入多角体内部。利用能形成多角体的BmNPV Polh+Bac-to-Bac表达系统构建的含有绿色荧光蛋白(EGFP)的重组病毒能在表达、产生正常多角体的同时也表达EGFP蛋白。共聚焦分析表明,该重组病毒感染后形成的多角体能够发射绿色荧光。被包埋的EGFP蛋白放置1个月后仍能检测到绿色荧光,干燥处理30min后仍能检测到荧光。由此说明将多角体与外源基因同时表达,多角体中会包埋外源蛋白,且能较长时间保存外源蛋白的生物活性。这一现象为解决蛋白质长期保存提供了新思路,对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂也有很好的参考意义。

BmNPV多角体蛋白片段引导外源蛋白固定入多角体的研究

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)晚期产生大量多角体,其主要作用是包埋病毒粒子免受外部恶劣环境的影响,为次代感染提供保障。将BmNPV多角体基因分段克隆并与报告基因——增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合,利用BmNPVPolh+Bac-to-Bac表达系统构建重组病毒,使多角体蛋白与融合蛋白在BmN细胞内共表达。分析感染细胞和形成的多角体中融合蛋白的含量,研究不同的多角体蛋白片段引导EGFP固定入多角体的效果,结果表明构建的5种重组病毒都能大量表达融合蛋白,每种多角体蛋白片段都能引导EGFP固定入多角体内部,且外源融合蛋白在多角体总蛋白中占有较高的比例,其中,以多角体蛋白N末端100个氨基酸和完整多角体蛋白序列作为信号固定EGFP的效率最高。这一现象为解决活性蛋白长期保存提供了新思路,同时对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂和新型疫苗的转运载体也具有较好的参考价值。

牡蛎肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

为研究牡蛎肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响及其作用机制,该研究采用细胞计数试剂盒-8分别考察了不同浓度牡蛎肽对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响。通过中性红法、硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)法检测巨噬细胞的吞噬能力、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的分泌量及其mRNA表达量,然后通过蛋白免疫印迹(Western-blot)法测定巨噬细胞中核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路主要蛋白p65和IκBα的磷酸化表达情况。结果表明,质量浓度在1000μg/mL以内时,牡蛎肽对巨噬细胞增殖率无显著影响(P>0.05)。此外,牡蛎肽可增强巨噬细胞吞噬活性,显著提高RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10的分泌量及相关基因mRNA表达水平(P<0.05),其作用效果呈现剂量依赖性。Western-blot结果显示,与脂多糖造模组比较,牡蛎肽能显著降低RAW264.7细胞IκBα及p65蛋白磷酸化水平(P<0.05)。牡蛎肽对小鼠RAW264.7巨噬细胞具有一定的免疫调节作用,其作用机理可能和NF-κB通路的激活有关。

家蚕类免疫球蛋白(hemolin)基因的克隆及表达特征和抗菌活性研究

Hemolin是昆虫的一种重要先天性免疫蛋白,属于免疫球蛋白超家族。克隆了家蚕hemolin基因,其序列全长5 100bp,含有5个外显子和4个内含子,基因cDNA编码含410个氨基酸的蛋白质,预测蛋白的分子质量约44.79 kD,pI 5.12。对该基因表达规律和生物学活性的结果研究表明:该基因只在家蚕蛹期脂肪体内特异性转录和表达,并能够被细菌和病毒诱导在幼虫期表达;该基因体外表达获得的重组蛋白具有抗菌生物学活性,能够有效抑制苏云金芽孢杆菌等的生长,由此暗示家蚕Hemolin蛋白可能在蚕体抵御病毒与细菌的感染过程中发挥重要作用。

激光开壳技术对贻贝肉脱壳率和品质的影响研究

为降低贻贝肉在传统热力开壳中造成的营养损失,提高其可加工性和营养风味,本研究利用激光技术实现贻贝开壳,并结合漂烫或蒸汽技术提高开壳作业的效率和连续性。以传统水煮开壳法和手工开壳法为对照,研究激光开壳、激光-漂烫开壳、激光-蒸汽开壳对贻贝肉感官、营养和滋味品质的影响。结果表明,当激光功率为40 W,处理时间为0.5 s时,闭壳肌脱壳率为100%,且色泽和气味感官评分较高。激光及其组合开壳技术得到的贝肉硬度、弹性和咀嚼性与新鲜贻贝肉比较接近,且较水煮开壳法减少了蛋白质、脂肪、糖类与5′-核苷酸的损失。激光-漂烫开壳和激光-蒸汽开壳还增加了贝肉中游离氨基酸的含量(P<0.05)。因此,激光及其组合开壳技术能有效提高开壳率,减少加工过程中贝肉营养损失,获得品质良好的新鲜脱壳贝肉。本研究结果为激光技术应用于贝类开壳提供了理论依据。

利用家蚕细胞表达重组蝎毒素蛋白及其杀虫效果分析

用天然毒素蛋白杀灭害虫是农林病虫害防治的一个重要发展方向。利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)多角体蛋白基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因(BmK ITa1)融合表达,SDS-PAGE分析通过融合表达策略构建的含有蝎毒素蛋白基因的重组病毒具有较高的蝎毒素蛋白表达水平,重组病毒vBmBac(polh-)PH5B/35B-BmK ITa1.6His,在家蚕BmN细胞内的BmKITa1蛋白表达水平分别为0.4、0.2 mg/mL。以家蚕和棉铃虫为供试昆虫,探讨融合蝎毒素蛋白的杀虫效果,结果表明:经口添食含融合蝎毒素蛋白的BmN细胞液对不同龄期家蚕幼虫均具有毒性,尤其对低龄幼虫的毒性较强,蚁蚕添食后的死亡率达80%;给1龄期的家蚕和棉铃虫幼虫经口添食含有不同剂量融合蝎毒素蛋白的BmN细胞破碎液,当添食剂量在2.8μg/头时,家蚕的死亡率即达100%,棉铃虫的死亡率达74%。研究结果提示:BmNPV多角体蛋白编码基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因融合表达,可提高蝎毒素蛋白的表达水平,且重组病毒表达的蝎毒素蛋白具有较好的杀虫活性,在较低剂量下即可对低龄昆虫产生良好的杀灭效果。

不同香榧品种果实特性比较及脂肪酸组成分析

为明确浙江会稽山脉地区香榧品种的果实品质差异,以茄榧、细榧、油榧、斯宅木榧、珍珠榧和长籽榧为试验材料,对其果实表型特征和含油率指标进行测定,并对脂肪酸组成成分进行分析。结果表明,6个香榧品种中油榧含油率最高,达到63.26%,而珍珠榧含油率最低,只有41.07%。采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析香榧种子油脂肪酸组成,香榧种子油主要含有8种脂肪酸,其中棕榈酸、油酸和亚油酸占总脂肪酸的80%以上。茄榧、油榧、珍珠榧和长籽榧种子油的亚油酸和亚麻酸含量与细榧种子接近;除长籽榧外,茄榧、油榧、斯宅木榧和珍珠榧4种香榧种子油中金松酸的含量显著高于细榧,分别为10.30%、10.30%、15.10%和11.60%。本文的研究结果为香榧的资源化利用提供了理论基础。

氢氧化钠-乳酸协同处理对贻贝壳角质层的净化作用

采用NaOH溶液协同乳酸溶液作为处理剂,以明暗度和质量损失率为指标,研究了NaOH溶液与乳酸溶液的pH和浸泡处理时间对贻贝壳表面角质层脱除作用的影响,得出了pH 13的NaOH溶液浸泡处理36 h,再经pH2乳酸溶液浸泡处理4 h为最佳净化处理条件。对净化处理后样品的扫描电镜、傅里叶变换红外光谱、电感耦合等离子体质谱等检测显示,NaOH-乳酸协同处理有效脱除了贻贝壳表面的黑色素和黏连角质的低纯CaCO_(3),及角质层吸附的Br、Zn、Pb等元素,贝壳表面钙含量从对照组的0.39%上升到37.58%,已近似达到CaCO_(3)中理论钙含量。该研究为制备高品质贻贝壳源钙补充剂提供了一定的理论参考。

贻贝多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

为了探究贻贝多糖对胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)HepG2细胞糖代谢影响的潜在分子机制,以贻贝多糖(Mussel polysaccharides,MP)为研究材料,采用CCK8法检测HepG2细胞的增殖情况,同时筛选不同浓度胰岛素构建细胞胰岛素抵抗模型,检测MP对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。结果显示:当胰岛素浓度处于10-6 mol/L时,HepG2细胞的葡萄糖含量最高,对葡萄糖的消耗能力最弱,是构建胰岛素抵抗模型的最佳浓度。此外,MP(100~1000μg/mL)对HepG2细胞无毒性,能促进细胞增殖。与IR-HepG2细胞相比,200、400、600μg/mL的MP能明显提升糖原含量,分别为17.20%、22.95%和32.50%。同时,高剂量MP能显著上调PI3K和GLUT2的相对基因表达量,并能降低GSK-3β的表达量。为后续MP降血糖提供实验基础,同时有助于促进MP的开发利用。

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除·OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)和羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明:鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O-2·、DPPH自由基、·OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对·OH、DPPH自由基、O-2·的清除率和对Fe3+的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对·OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/(kg?d)时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。

鮟鱇皮胶原蛋白肽最佳制备工艺及自由基清除活性研究

研究提取鮟鱇(Lophius litulon)胶原蛋白肽的最佳制备工艺,测定鱼皮基本成分和多肽的氨基酸组成,探讨鮟鱇多肽组分体外自由基清除效果。结果表明,鱼皮中粗蛋白占28.1%;胃蛋白酶添加量1%,料液比1∶20,酶解时间6h,酶解温度5℃时,羟脯氨酸提取率为11.67%,鮟鱇胶原蛋白肽提取效果最佳;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽在232nm处有紫外吸收峰,胶原肽中Gly(甘氨酸)占36.61%,Pro(脯氨酸)和Hyp(羟脯氨酸)总含量占16.86%,Phe(苯丙氨酸)、Cys(半胱氨酸)、His(组氨酸)三者含量均低于1.1%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O-2·(超氧阴离子自由基)、DPPH·(二苯基苦酰肼基自由基)、·OH(羟自由基)具有一定的清除效果,清除能力与胶原蛋白肽的浓度呈正相关,浓度为10mg/mL时,对·OH、DPPH·、O-2·自由基的清除率和Fe3+还原力分别为70.48%、68.78%、48.33%和0.676。

复合无硫抑制剂对中华管鞭虾中多酚氧化酶的协同作用机理

为抑制虾类黑变的发生,研发无硫复合抑制剂协同防黑变技术。通过优化无硫复合抑制剂主要成分对中华管鞭虾多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)的抑制作用,并从抑制类型、抑制剂分子结构以及动力学模型出发,分析推断抑制交互作用的机理。结果表明,柠檬酸、抗坏血酸、4-己基间苯二酚(4-Hexylresorcinol,4-HR)有极显著的抑制作用,部分抑制剂之间存在显著的交互作用。当4-HR、抗坏血酸、柠檬酸、EDTA-2Na的质量浓度分别为0.46~0.68、0.01~0.018、4.85~7.20、1.58~2.90 mg/mL时,酶活抑制率达60%以上;4种抑制剂均对酶促反应有延滞作用,均表现为竞争性抑制类型,均可与PPO的双铜活性中心结合;在复合抑制剂中,4-HR起主导抑制效果,一定浓度的柠檬酸、抗坏血酸、EDTA-2Na可协同提高抑制效果。该研究为无硫复合抑制剂在海水虾捕捞与加工过程中的应用推广提供了理论依据。

辐照对大管鞭虾冷冻保鲜品质的影响

采用不同辐照剂量对冷藏大管鞭虾进行辐照处理,通过检测菌落总数、挥发性盐基总氮(TVB-N)、pH、氨基酸含量与金属含量等指标,研究辐照处理对大管鞭虾品质和新鲜度的影响。结果显示,1 kGy的辐照剂量即可杀灭大部分的微生物,辐照剂量越高,杀菌作用越强;辐照虽对大管鞭虾所含的TVB-N不产生影响,但可以降低TVB-N的产生速度;经辐照后的大管鞭虾pH值呈先降后升的变化趋势,上升速度较未辐照样品慢;经7 kGy辐照后的大管鞭虾总氨基酸含量增加率最高达7.3%;强度≤20 kGy的辐照对大管鞭虾中金属元素的影响无明显的规律性。

具有抑菌活性的海藻多酚联合提取工艺优化研究

采用超声波、微波联合浸提方式提取海藻多酚，通过正交实验确立了多酚提取工艺条件，并以平板打孔抑制法测定了海藻多酚粗提物对7种细菌和4种真菌的抑菌活性。结果表明：采用料液比（匀浆：乙醇，g/mL）1：7，乙醇浓度85%，浸提温度70℃，浸提次数2次，浸提时间4h，提取效果最佳，海带多酚提取率为2.08%。海藻多酚对供试的2种革兰氏阳性菌和5种革兰氏阴性菌都有一定程度的抑制活性，量效关系均呈剂量依赖型，最小抑菌浓度为10～40μg/mL。其中对大肠杆菌、绿脓杆菌抑制效果较明显，对青霉、白色念珠菌亦有抑制作用。