目的:观察糖肾清2号提取物对高糖环境下的小鼠肾小球系膜细胞株AMPK-α1、IκBα、TLR-4mRNA转录和蛋白表达的影响,探讨该方抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株免疫炎性病理损伤的分子机制。方法:采用小鼠肾小球系膜细胞株SV40 MES 13,在5%...目的:观察糖肾清2号提取物对高糖环境下的小鼠肾小球系膜细胞株AMPK-α1、IκBα、TLR-4mRNA转录和蛋白表达的影响,探讨该方抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株免疫炎性病理损伤的分子机制。方法:采用小鼠肾小球系膜细胞株SV40 MES 13,在5%CO_2、37℃恒温培养箱常规培养。实验分组:空白对照组(D-葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L)、中药低浓度组(高糖+糖肾清2号提取物5μmol/L)、中药中浓度组(高糖+糖肾清2号提取物10μmol/L)、中药高浓度组(高糖+糖肾清2号提取物20μmol/L),共同孵育12、24、36 h进行指标检测。采用RT-PCR技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4 mRNA转录水平;Western-blot技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,高糖组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平及蛋白表达下调(P<0.05),TLR4 mRNA转录水平及蛋白表达水平上调(P<0.01),差异有统计学意义。与高糖组比较,中药各浓度组AMPKα1、IκBα蛋白表达水平上调(P<0.05),中药高、低浓度组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平上调(P<0.05)。中药各浓度组TLR4mRNA转录水平下调(P<0.01),中、高浓度组TLR4蛋白表达水平下调(P<0.01)。结论:糖肾清2号抑制高糖环境下肾小球系膜细胞免疫炎性代谢性损伤,此分子机制可能与调节AMPK信号通路相关。展开更多
文摘目的观察秦苓液对尿酸性肾病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptor coactivator-1 alpha,PGC-1α)、白介素-1β(interleukin beta,IL-1β)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)的影响。方法采用腺嘌呤灌胃伴酵母饲料喂养大鼠的方法进行造模,成模后随机分为模型组,阳性药物组,秦苓液大、中、小剂量组,每组12只大鼠。选6只正常大鼠作为正常对照组。各组分别用药连续干预6周和8周后采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫组化和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠PGC-1α、IL-1β、RANTES基因和蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,6周时和8周时模型组PGC-1α蛋白表达水平及8周时PGC-1α基因转录水平显著下调,6周时IL-1β基因转录、蛋白表达水平和RANTES蛋白表达水平及8周时两者水平显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,6周时秦苓液各剂量组PGC-1α蛋白表达水平及8周时中、小剂量组PGC-1α基因水平及蛋白表达水平显著上调,6周时秦苓液各剂量组IL-1β基因转录及大、中剂量组IL-1β蛋白表达水平以及各剂量组RANTES蛋白表达水平显著下调,8周时秦苓液小剂量组IL-1β及中、小剂量组RANTES基因转录及中、小剂量组IL-1β、RANTES蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论秦苓液抑制UN模型大鼠免疫炎性损伤,其分子机制可能与上调PGC-1α的水平,抑制IL-1β、RANTES的生物学活性有关。
