STM1827在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成及环境应激中的调控作用

旨在研究环二鸟苷酸(c-di-GMP)通路代谢基因STM1827对鼠伤寒沙门菌生物被膜的调控及其相关生物学功能。首先通过测定c-di-GMP水平分析STM1827对c-di-GMP合成的影响;进一步通过生物被膜及运动性等试验分析STM1827对生物被膜形成的作用;最后通过氧胁迫和消毒剂胁迫等试验分析STM1827对鼠伤寒沙门菌环境应激适应能力的影响。结果显示,缺失株269ΔSTM1827胞内c-di-GMP水平与野生株相比升高了33.16%;在生物被膜形成方面,缺失株269ΔSTM1827生物被膜形成能力与野生株相比上调了2.19倍,生物被膜相关胞外多糖含量增加1.3倍,且胞外多糖合成基因表达量显著升高(P<0.0001);在运动性方面,与野生株相比,269ΔSM1827运动性降低了13%,鞭毛相关基因表达量显著降低(P<0.05);在氧应激和消毒剂应激条件下,STM1827基因缺失增强鼠伤寒沙门菌在氧胁迫和SDS消毒剂胁迫下的适应能力。研究表明,STM1827可以降解c-di-GMP,且通过抑制胞外多糖的合成与促进细菌运动性,进而抑制生物被膜形成,最终导致细菌在氧胁迫和消毒剂胁迫下的耐受性降低。本研究为鼠伤寒沙门菌病作用靶点的筛查和防控措施的开发提供理论基础。

本科《禽病学》课程思政教育与多场景教学模式的融合

我国养禽业的快速发展离不开禽病工作者的保驾护航,培养德才兼备的高素质禽病专门人才是高等农林教育对动物医学专业学生的培养目标之一。华南农业大学《禽病学》课程在思政教育和多场景教学方面大胆改革与实践,将"课程思政"融入到教学过程的每个环节,将课堂授课场景、实验教学场景和体验式教学场景结合起来,逐步建立了一套成熟的教学体系,在培养"又红又专"的禽病人才方面做出了卓有成效的探索。

新冠疫情下《兽医公共卫生学》课程教学改革与实践

《兽医公共卫生学》是动物医学本科的一门重要专业课程。在新型冠状病毒肺炎疫情下,中国公共卫生体系遭受了巨大的冲击,联系近年来重大人兽共患病事件频发,培养兽医公共卫生专业人才刻不容缓,改革和创新该课程的教学内容与教学模式,也是中国培养一流兽医本科人才教学的迫切需要。该文根据作者的教学实践,结合新冠疫情背景阐述兽医公共卫生学的重要性,分析了兽医公共卫生学课程的教学改革内容,以期打破大众对兽医专业认识的局限性,强调兽医公共卫生的意义,提升《兽医公共卫生学》的课程价值,并为优化教学内容、提高教学质量提供指导。

H6N6亚型禽流感病毒广东分离株分子遗传演化分析

2010年至2011年在中国广东地区活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽和泄殖腔拭子中分离到2株H6N6亚型禽流感病毒,分别命名为A/Duck/Guangdong/C45/2010(H6N6)、A/Duck/Guangdong/C120/2011(H6N6)。应用RT-PCR分别对2株毒株的8个基因片段进行了克隆、测序与分析,结果表明:2毒株的HA裂解位点附近的氨基酸序列为P-Q-I-E-T-R-G,只有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒HA裂解位点附近的氨基酸序列特征;与2毒株HA基因相似性最高的毒株为A/Duck/Guangxi/GXd-5/2010(H6N1),与NA基因相似性最高的毒株分别为A/Duck/Fujian/3242/2007(H6N6)和A/Duck/Fujian/6159/2007(H6N6)。全基因组分子遗传演化分析表明,2毒株的8个基因片段均属于欧亚谱系的禽源演化分支;但HA基因属于ST2853-like分支,NP基因属于HN573-like分支,PB2、PB1、PA、M和NS基因属于ST339-like分支,说明本研究中的2株病毒为不同基因群间基因交换的重组病毒。因此,有必要加强H6亚型禽流感病毒流行病学调查以便及时关注其遗传变异与致病性进化,为中国禽流感的预防与控制提供数据支持和理论指导。

基于机器学习的肉鸡沙门氏菌污染风险敏感性分析

为探究机器学习方法在肉鸡宰后沙门氏菌污染率风险分析中的适用性,将基于分类算法的支持向量机、朴素贝叶斯、神经网络等模型运用到细菌污染率的风险预测中,结合随机森林算法对细菌污染风险进行敏感性分析。模型以日屠宰量、环境温度、环境湿度、宰前污染率、浸烫环节交叉污染、掏膛环节交叉污染、预冷水氯浓度为输入值,肉鸡宰后污染率为输出值。采用训练数据集拟合,验证数据集评估模型的预测效果。结果显示,训练后的支持向量机模型(AUC>0.7,ER=23.8%,RMSE=0.42)对肉鸡宰后沙门氏菌污染率的拟合效果较好。敏感性分析表明,环境温湿度、宰前污染率、掏膛环节的交叉污染及预冷水氯浓度是影响宰后污染率变化的重要因素。本研究可为微生物污染率风险预警提供重要信息。

上海市鸭源沙门菌的分离鉴定、血清分型及耐药性分析

为了解上海市农贸市场和超市中鸭源沙门菌的污染情况、血清型分布及耐药情况,于2014年从上海市各大农贸市场和超市随机采集鸭肉、鸭粪便样品186份,通过常规分离鉴定和PCR鉴定,获得了44株鸭源沙门菌。对分离株采用Kauffman-White法进行血清学分型和K-B纸片法进行16种抗生素的药敏试验。结果显示,鸭源沙门菌分离率为23.65%,共鉴定出13种血清型,优势血清型为鼠伤寒(43.18%)。耐药性结果显示,分离株对萘啶酸(63.64%)的耐药率最高,对磺胺异恶唑(47.73%)、链霉素(47.73%)、四环素(40.91%)的耐药率次之,对头孢吡肟(4.54%)、头孢噻肟(4.54%)、环丙沙星(2.27%)、庆大霉素(2.27%)等耐药率低,对氧氟沙星(0.00%)和亚胺培南(0.00%)两种药物敏感。其中,多重耐药率为43.18%,最多可耐受11种抗菌药物。表明上海市鸭源沙门菌的污染率较高,血清型分布广且耐药模式多样,多重耐药菌株较严重。提示鸭源沙门菌的流行和耐药情况值得我们密切关注,同时为进一步做好食品中沙门菌的防控提供数据支持。

基于微生物遗传技术与兽医学科结合的人才培养改革探索

加快农业科技创新,是实现现代农业的重大要素,是建设社会主义新农村的重大举措,是推进农村改革发展的重要任务,其中人才是关键.培养农业创新型人才有着重要的现实意义.本文从课程内容设计、授课形式等方面对微生物技术与兽医学科交叉结合教育进行探索,并提出微生物遗传技术与兽医学科结合课程建立需考虑的问题,以期为兽医创新人才培养提供参考.

广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析

本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示,245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%(152/245),共鉴定出19种血清型,其中主要血清型有阿贡纳(Salmonella Agona,29/152,19.08%)、科瓦利斯(S.Corvallis,25/152,16.45%)以及肯塔基(S.Kentucky,20/152,13.16%)。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑(100%)、萘啶酸(90%)、四环素(75%)、氨苄西林(65%)、头孢他啶(55%)、环丙沙星(55%)的耐药率较高,有85%(17/20)的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示,95%(19/20)的菌株具有gyr A突变(Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly),其中有57.89%(11/19)的菌株发生gyrA双突变(Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly),5.26%(1/19)发生gyrA三突变(Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly);100%(20/20)的菌株具有parC突变(Tyr62Ser、Ser85Ile)。45%(9/20)分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性(PMQR)基因(aac(6′)-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB),最常见的是aac(6′)-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因bla TEM-1、bla OXA-1和bla CTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示,肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性,部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重,对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重,具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能,为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。

沙门氏菌的检测与分离鉴定技术研究进展

沙门氏菌是重要的人畜共患病病原,不仅造成畜禽养殖业的重大经济损失,其感染后的动物产品也会威胁人类健康,如何有效对其监测和防控具有重大的公共卫生意义。本文通过对当前沙门氏菌的传统培养方法、免疫学方法、分子生物学方法、光谱质谱法、生物传感器等检测方法与分离鉴定技术进行概述和综合比较。每种方法都有其优势与不足,将不同方法联合运用是一个可行的思路。展望未来,检测设备的小型化和自动化是一大趋势,如何开发集预处理和检测于一体的筛选和鉴定方法是未来沙门氏菌检测方法的热门话题。

广西瑶鸡体重、内脏器官生长发育规律的研究

本文旨在研究在广西鸿光农牧有限公司饲养管理规程下瑶鸡体重和内脏器官的生长发育规律。0~15周,每周末随机抽取公鸡120只,母鸡120只,称量每只鸡的体重并记录。随机抽取公鸡和母鸡各5只,解剖后测定心脏、肝脏、脾脏、腺胃、肌胃、法氏囊、胰腺和肠道等主要组织器官的生长发育情况,以器官指数表示。结果显示,第2周龄公鸡和母鸡的体重呈现显著性差异(P<0.05),其余周龄公鸡和母鸡的体重差异极显著(P<0.01)。公鸡的13.71周龄和母鸡的12.59周龄是瑶鸡的生长拐点周龄,拐点体重分别为2238.17 g和1575.96 g。公鸡母鸡的器官指数变化规律一致,公鸡和母鸡的心脏、肌胃、腺胃、肝脏均在第一周的指数最大,随后逐渐减小。由此可见,广西瑶鸡优先发育心脏、肝脏、胃等重要代谢及消化器官,为生长前期快速吸收营养,增长体重奠定基础。这提示,应加强前13周鸡饲料营养配比的全价和平衡管理,以提高瑶鸡的生长效率。

中国H9N2亚型禽流感病毒的流行现状

H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)持续暴发和流行,不但给养禽业造成了重大损失,而且给公共卫生安全带来了潜在威胁。为了解中国H9N2 AIVs的流行现状,作者对H9N2亚型AIVs的抗原性、受体结合特性、致病性进行了总结,并且对2016—2020年的流行毒株进行了分析。结果显示,H9N2 AIVs在20多个省市地区流行,其中江西、广东、贵州、江苏等地区暴发次数较多。H9N2 AIVs主要感染鸡,少数感染水禽和小家禽,零星感染人。H9N2 AIVs主要位于h9.4.2.5分支,极少数毒株隶属h9.4.2.1分支。当前H9N2 AIVs受体的结合特性呈现双嗜性或优先结合α-2,6 SA受体。抗原相关位点处的氨基酸呈现出多态性,抗原性正在发生着改变。PB2、PA和HA蛋白获得了一些适应性突变,增强了其在哺乳动物细胞上的复制能力以及对小鼠的致病性,增加了其跨宿主传播感染哺乳动物甚者人的风险。综上所述,人们要加强对H9N2 AIVs流行情况的监测,密切关注其抗原特性及致病性的变化。

当前我国H5亚型禽流感的流行情况及防控对策

禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种主要感染禽类的人兽共患传染病。禽流感病毒的自然宿主是水禽,但它也可以感染多种家禽和人等哺乳动物,因此禽流感是威胁养禽业和人类健康的主要传染病之一。禽流感病毒在进化过程中易通过基因重排或基因突变而发生变异,导致新的毒株不断出现。另外,我国幅员辽阔、家禽品种繁多、养殖方式多样化,这增加了防控禽流感的难度。

广州市农贸市场猪肉源伦敦沙门菌的流行情况及耐药性分析

本研究旨在探究广州市2016年5-10月农贸市场猪肉源伦敦沙门菌的流行和耐药情况。从广州市农贸市场采集样品198份,分离得到28株猪肉源伦敦沙门菌,用K-B法测定其对18种抗菌药物的耐药性,用PCR方法鉴定其所携带的耐药基因。结果表明,市场猪肉样品中沙门菌的阳性率为74.2%(147/198),伦敦沙门菌的分离率为19%(28/147),其对磺胺异唑、四环素的耐药率分别为78.6%和75.0%;其次为链霉素、复方新诺明、氨苄西林、庆大霉素、氯霉素和氟苯尼考,耐药率依次为71.4%、67.9%、67.9%、67.9%、46.4%和42.8%;对萘啶酸(3.6%)和多黏菌素B(3.6%)耐药水平较低。有71.4%(20/28)的菌株对3种及3种以上抗菌药物耐药。氨基糖苷类耐药基因检出率为100%,aadA2(7.1%)、strA(37.9%)、aadB(100%);酰胺醇类耐药基因检出率为42.6%,cat1b(39.3%)、floR(39.3%);磺胺类耐药基因检出率为67.9%,sul1(60.7%)、sul2(60.7%);四环素类耐药基因的检出率为78.6%,均同时携带tetA和tetB;β内酰胺类耐药基因blaTEM检出率为10.7%;喹诺酮耐药基因qnrA、oqxAB和aac(6’)-lb-cr检出率为3.6%、10.7%和7.1%;黏菌素耐药基因mcr-1检出率为3.6%。伦敦沙门菌在广州农贸市场猪肉中是主要流行血清型之一,其对传统抗菌药物磺胺异唑、四环素、链霉素、复方新诺明、氨苄西林等耐药性严重,携带多种耐药基因,且具有多种多重耐药表型。这提示人们需要对市场沙门菌进行常态化检测与监测,加强对抗生素使用的监管,确保公共卫生和食品安全。

广州市生鲜鸡中肠炎沙门菌的监测及耐药基因的分子鉴定

本研究旨在了解广州市鸡肉中沙门菌的流行情况、血清型分布及肠炎沙门菌耐药性与耐药基因的携带情况。对采集自广州市部分农贸市场的鸡肉样品,参照国标检测方法(GB4789.4-2016)进行分离培养并使用泰国S&A公司沙门菌属诊断血清进行血清分型;用Kirby-Bauer法测定肠炎沙门菌对16种抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测肠炎沙门菌携带的耐药基因。结果显示:316份鸡肉样品中,阳性率为76.9%。共鉴定23种血清型,主要血清型为阿贡纳(Salmonella Agona,19.8%)、科瓦利斯(S.Kottbus,14.0%)、姆班达卡(S.Mbandaka,11.9%)、肯塔基(S.Kentucky,10.3%)、肠炎(S.enteritidis,7.8%)、布伦登卢普(S.Braenderup,7.4%)。耐药性结果显示:肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率最高(100.0%),其次是磺胺复合物(79.0%)、氨苄西林(57.9%)、链霉素(36.8%)、四环素(21.0%)、庆大霉素(21.0%)、头孢噻肟(15.8%)、头孢他啶(5.3%),多重耐药率为68.4%。肠炎沙门菌中喹诺酮耐药决定区基因gyrA、gyrB、parC的突变率分别为94.7%、73.7%、15.8%,最常检出突变为苯丙氨酸-414→丝氨酸(73.7%),其次是天冬氨酸-87→甘氨酸(42.1%)、天冬氨酸-87→色氨酸(31.6%)、丝氨酸-83→色氨酸(21.1%);喹诺酮类耐药质粒的检出率较低。β-内酰胺类耐药基因blaTEM、blaCTX-M的检出率分别为42.1%、10.5%。结果显示,广州市鸡肉中沙门菌的污染率较高,血清型复杂。肠炎沙门菌对萘啶酸、磺胺甲基异恶唑、氨苄西林等常用抗生素的耐药情况较为严重,多重耐药率高。肠炎沙门菌的喹诺酮耐药决定区基因突变率高,与肠炎沙门菌对喹诺酮类药物的耐药结果具有高度的一致性。

广州市鸡肉中科瓦利斯沙门菌的耐药性及分子分型研究

为了分析2016年广州市农贸市场所售的鸡肉中科瓦利斯沙门菌(Salmonella corvallis)耐药性及流行特征,参照国标检测方法(GB4789.4—2016),对广州市农贸市场采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定和血清学分型,用Kirby-Bauer法进行14种抗菌药物的耐药试验,用PCR方法检测携带的耐药基因,根据沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型试验方案进行分子分型。结果显示,21株科瓦利斯沙门菌中,对磺胺异噁唑耐药性最高(95.2%),其次为萘啶酸(90.5%)、四环素(66.7%),对环丙沙星的耐药率为19%,多重耐药菌检出率为81%。21株科瓦利斯沙门菌中喹诺酮类耐药决定区(QRDR)基因parC的突变率为100%,其第57位氨基酸苏氨酸突变为丝氨酸(Thr57→Ser),并且在质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因中检出了qnrS、aac(6′)-Ib-cr和qnrB,检出率分别为90.5%、23.8%和9.5%。21株科瓦利斯沙门菌经PFGE分型后,结果显示其可分为7个血清型,其中具有1个优势克隆型(11株)。研究结果表明,广州市农贸市场鸡肉源科瓦利斯沙门菌分离株呈现耐药模式多样,多重耐药菌株严重,PFGE分子型别呈多态性,有同源菌株存在,提示存在共同来源或者交叉污染,应加强鸡肉中科瓦利斯沙门菌监测,同时为进一步做好食品中沙门菌的防控提供数据支持。

猪传染性胃肠炎病毒入侵细胞及逃避天然免疫机制研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是全球范围内造成仔猪腹泻的原因之一,且常造成混合感染和继发感染,仔猪死亡率可达100%。猪氨肽酶N是TGEV的特异性受体,唾液酸对TGEV有保护作用,如保护TGEV通过胃酸时不会失活。TGEV可以诱导I型干扰素在肠道产生,结构蛋白M、E和非结构蛋白nsp14在其中发挥着重要作用。TGEV已经发展出一系列策略来对抗宿主天然免疫反应,包括基因组中的GAIT样结构、ORF7、非结构蛋白nsp1等自身因素,以及操纵宿主细胞途径,如非折叠蛋白反应。

轮状病毒感染及其免疫逃逸与疫苗研究进展

轮状病毒感染可使感染者(人或动物)出现严重的腹泻,年龄较小、较大或免疫系统功能障碍的感染者都可能出现严重脱水等症状,严重者可导致死亡。全球每年约20万婴幼儿因轮状病毒感染而死亡,给世界公共卫生事业带来巨大挑战。同时,在农业生产方面,猪、牛、羊等关乎民生的经济动物的幼仔,也会因感染轮状病毒而死亡,对养殖业造成一定的经济损失。本文从轮状病毒的基因组特征、感染与增殖特点、诱导机体的免疫应答以及疫苗现状进行了总结,为开发轮状病毒相关疫苗或治疗药物提供借鉴。

屠宰过程黄羽肉鸡弯曲菌的定量风险评估

目的检测屠宰过程黄羽肉鸡弯曲菌阳性率和污染水平,建立屠宰过程黄羽肉鸡弯曲菌的定量风险评估模型,探明其污染的关键风险点。方法用传统分离鉴定方法和最近似数法(most probable numbers,MPN)对屠宰不同环节弯曲菌阳性率和污染水平进行检测,然后运用描述函数对数据进行拟合,并采用@Risk软件进行重复性检验和敏感性分析。结果弯曲菌阳性率和污染水平以活鸡肛拭环节最高(53.600%,1.8300 logMPN/m2),其次为打毛和开膛环节(27.500%,0.5000 logMPN/m2和18.100%,0.0270 logMPN/m2)。根据函数拟合结果建立弯曲菌污染定量风险评估模型,蒙特卡洛(Monte Carlo)模拟分析显示肛拭环节弯曲菌阳性率和污染水平最高(52.920%,1.8896 logMPN),其次是打毛和开膛环节(27.460%,0.4680 logMPN和14.740%,0.4910 logMPN),各个模拟环节数值与分离鉴定结果误差较小(P<0.05),表明模型具有良好的准确性;敏感性分析获得黄羽肉鸡屠宰过程弯曲菌污染的关键风险点为打毛和开膛环节,相关系数分别为0.77和-0.39,高于其他环节。结论本研究以屠宰过程黄羽肉鸡弯曲菌为研究对象进行风险评估,成功建立弯曲菌暴露评估模型,且模型具有较好的准确性,同时揭示了屠宰过程弯曲菌防控的关键风险点,为黄羽肉鸡弯曲菌的防控和风险评估奠定基础。

新型鸭腺病毒4型Fiber2蛋白的表达

Fiber2是鸭腺病毒4型(DAdV-4)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白。本研究以DAdV-4毒株DNA为模板进行PCR扩增Fiber2基因片段,转化DH5a,通过EcoRI和HindII酶切后与pET28α载体通过T4DNA连接酶进行连接,构建重组表达载体,经序列测序鉴定后转化BL21(DE3)构建重组表达菌,利用IPTG诱导表达Fiber2重组蛋白,经用SDS-PAGE电泳检测,结果显示,Fiber2重组蛋白能在大肠杆菌以包涵体形式表达。上述研究为鸭腺病毒4型的防控提供物质基础。

鸡TM9SF2蛋白胞外结构域的原核表达及其家兔抗血清的制备

为了探究鸡源九次跨膜超家族成员2(TM9SF2)的生物学功能,通过软件分析TM9SF2蛋白的氨基酸序列保守性,选择其胞外区,经密码子优化后进行基因合成,命名为chTM9ECD;将该基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建重组表达质粒pET-chTM9ECD,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;用纯化的重组TM9SF2蛋白与佐剂混合后免疫新西兰大白兔制备多抗血清。SDS-PAGE和Western-blot均证实重组TM9SF2蛋白以包涵体形式表达,分子质量约为33.6 ku。经ELISA检测,抗体效价达1∶128 000,Western-blot证实家兔抗重组TM9SF2血清可特异性识别293细胞中表达的TM9SF2。结论,本试验应用大肠杆菌成功表达了重组TM9SF2胞外蛋白,具有免疫原性,并获得家兔源阳性血清,为TM9SF2生物学功能研究奠定基础。