基于网络药理学及分子对接技术探究三棱-莪术配伍在卵巢癌辅助治疗中的作用机制

目的:基于网络药理学及分子对接技术,探究三棱-莪术药对在辅助治疗卵巢癌中的作用机制。方法:活性成分及其作用靶点收集自中药系统药理学分析平台,卵巢癌相关靶点收集自Genecard数据库。上述靶点取交集后,结合STRING数据库及Cytoscape软件构建PPI网络。应用R及Cytoscape软件整合构建中药-活性成分-疾病-靶点网络。同时,应用R软件进行基因本体论(gene ontology,GO)功能富集、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集,并通过Cytoscape/CluGO进行KEGG通路聚类分析。综合分析各网络,获取关键靶点及其对应活性成分后应用Autodock vina及Pymol等软件进行分子对接及可视化研究。结果:本研究在三棱-莪术药对中,共获得8个活性成分,164个作用靶点,Genecards数据库获得1540个符合条件的卵巢癌相关靶点。取交集获得27个三棱-莪术药对治疗卵巢癌的潜在靶点。分析PPI网络并获取关键靶点为CASP3、ESR1、JUN、PTGS2、AR、MAPK14、PGR、CASP8、CASP9、CAS及PPARG。GO及KEGG分析表明相关作用机制可能涉及凋亡、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)信号通路、乙肝信号通路、雌激素信号通路、甲状腺激素信号通路,卵巢类固醇等多条信号通路。分子对接表明核心成分芒柄花黄素、β-谷甾醇、常春藤皂苷元与关键靶点结合性良好,其中各活性成分与PTGS2结合最佳,结合能均小于-9.0 kcal/mol。结论:该研究初步揭示了三棱-莪术药对治疗卵巢癌的药理机制,这为后期探究该药对及其所在复方治疗卵巢癌提供了较为系统的依据。

雌激素受体介导效应在骨骼肌保护作用中机制的研究

雌激素是一种类固醇激素,在机体内具有广泛的功能和作用,除了调控女性生殖器官的功能外,还能够靶向其他表达雌激素受体的器官和组织,包括心血管、骨、骨骼肌等。随着女性年龄的增长,雌激素缺乏会导致骨骼肌质量的下降,严重影响老年人的健康及生活。近年来,雌激素对骨骼肌的保护作用逐渐受到重视,现阶段研究表明雌激素受体(estrogen receptor, ER)与骨骼肌无力等病变关系密切,ER可介导PI3K/AKT信号通路等多种途径发挥保护骨骼肌的作用,有效防治骨骼肌退行性病变。

中药治疗绝经后骨质疏松症及其作用机制的研究进展

绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是一种全身性骨代谢疾病,好发于绝经后女性,体内雌激素水平下降是其主要病因,故而补充雌激素是最直接、有效的方法,然而长期服用雌激素将会带来诸如增加妇科肿瘤发病风险等副作用。近年来,从植物中提取的活性成分——植物雌激素引起了人们的广泛关注,其与天然雌激素拥有相似的结构,所以同样能够作用于雌激素在骨组织上的靶点——雌激素受体。临床实践证实,多种中药对PMOP疗效显著,其作用机制也随着研究的深入而逐渐被揭示,无论是提高雌激素水平,还是增加雌激素受体的表达,抑或通过雌激素调节骨代谢相关因子,中药都有着卓越表现,因而对其的进一步研究显得尤为重要。

羟基红花黄色素A对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法体外培养人血管内皮细胞EC-304,用H_2O_2构建细胞氧化应激损伤模型,分别设置正常对照组、H_2O_2损伤模型组、HSYA药物组,其中各药物组用不同浓度的HSYA预培养细胞24 h后加入50μmol/L的H_2O_2,继续培养12 h。用MTT法检测细胞的增殖活力,用试剂盒检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量,用Western Blot法检测各组细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果与H_2O_2模型组相比,HSYA能显著提高细胞存活率,且呈剂量依赖性,提高细胞内SOD的活性,提高细胞内NO的含量,降低Bax表达,提高Bcl-2表达,降低Caspase-3和cleaved Caspase-3的表达(P<0.01或P<0.05)。结论 HSYA对于H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其可能的作用机制与抑制EC-304细胞凋亡相关。

二仙汤抗化疗性卵巢早衰氧化应激的效应观察

目的观察二仙汤对卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)大鼠的抗氧化应激效应。方法雌性SD大鼠40只,监测一周动情周期,筛选有正常动情周期的大鼠入组,随机分为4组:正常组、模型组、阳性药组和二仙汤组。除正常组外,其余3组使用顺铂注射液造POF模型,阳性药组和二仙汤组在造模同时进行药物干预,灌胃期间监测动情周期,15d后麻醉取材,应用放免法检测血清性激素卵泡刺激素(follicle timulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及雌激素(estrogen,E2)的水平以及氧化应激相关指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、抗氧化指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量,显微镜下观察各组卵巢组织的病理改变。结果与正常组相比较,模型组大鼠动情周期及动情间期明显延长(P<0.01),血清FSH、LH、MDA含量显著升高(P<0.01),E2、SOD及CAT水平显著降低(P<0.01),卵巢组织中闭锁卵泡增多,窦卵泡数减少。与模型组相比,阳性药组与二仙汤组动情周期缩短(P<0.05或P<0.01),血清FSH、LH、MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),E2、SOD及CAT的含量显著上升(P<0.05或P<0.01),闭锁卵泡数量减少,窦卵泡数增多。结论二仙汤能通过调节POF大鼠的的抗氧化能力来改善卵巢功能,减少氧化应激带来的损伤从而治疗POF。

嘉兴市科技金融创新体系耦合度实证分析

自2014年率先在浙江省创建科技金融改革创新实验区以来,嘉兴市着力推进以金融创新促进科技创新、以科技创新带动金融创新,科技金融创新水平得到有力提升,并成为全国科技金融创新的"样本"。本文通过对嘉兴市科技金融创新体系发展现状定性分析,同时构建科技金融耦合协调度模型,对2006~2015年嘉兴市科技金融创新耦合协调度进行定量分析和评价,发现嘉兴市科技金融创新耦合协调度随时间的增长呈逐渐增长趋势,但耦合水平不高,协调度较差。

基于GPER/PI3K/AKT通路探究四物汤对成骨细胞的雌激素样效应及其分子机制

目的:利用SD大鼠颅骨原代培养成骨细胞研究四物汤的雌激素样效应及其分子机理。方法:40只未性成熟SD大鼠,体重50 g,按照随机分组原则分为5组:正常对照组、雌激素组和四物汤高、中、低剂量组。四物汤灌胃给药,持续4天后腹主动脉取血,制备含药血清。利用出生72 h内的乳鼠提取并培养原代成骨细胞(rats osteoblast,ROBs),并选取第2或3代的细胞进行实验研究。用四物汤含药血清作用ROBs细胞,并分别加入G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的特异性激动剂G1和特异性拮抗剂G15作为工具药,通过MTT法检测各组含药血清对ROBs细胞增殖的影响;通过细胞免疫荧光法检测含药血清对ROBs PI3K、AKT、p-Akt表达的影响。结果:显微镜下形态学观察和ALP结果表明,原代ROBs提取和培养成功;四物汤含药血清可促进ROBs增殖(P<0.05或P<0.01),该促增殖作用在加入拮抗剂G15后明显减弱(P<0.01),加入激动剂G1后明显增强(P<0.05或P<0.01);利用细胞免疫荧光技术检测发现四物汤含药血清可提高PI3K、p-Akt在ROBs细胞的荧光表达强度,且该效应在加入G1后增强(P<0.05或P<0.01),加入G15后减弱(P<0.05)。结论:四物汤可通过GPER通路发挥雌激素样效应,促进成骨细胞增殖,提高GPER介导下游信号分子PI3K、p-Akt的表达水平。

四物汤的药理作用与临床应用研究进展

四物汤的应用从古至今已有悠久的历史,原为外伤"重伤肠内有淤血者"而设,后世多用于治疗血虚血滞等疾病。对于这一补血调经的良方,国内外学者进行了广泛而深入的研究,发现四物汤及组方中药的有效成分具有补血、调经、雌激素样作用、抗氧化、改善脑损伤、抗癌等多种药理作用,并且在妇科、骨科等临床方面的疗效较为显著。本文对近年来的研究成果进行了梳理和总结,将四物汤的药理作用和临床应用进行综述,以期为四物汤的深入研究提供理论依据,为临床用药提供参考。

丹参及其有效成分治疗乳腺癌作用机制的研究进展

丹参中含有多种抗乳腺癌的有效成分,其治疗乳腺癌的作用机理成为近年的研究热点。近年来研究表明,丹参有效成分可多靶点、多途径抑制乳腺癌细胞生长增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与增殖、凋亡信号传导通路密切相关;丹参在抑制肿瘤迁移和耐药逆转方面也能发挥有效作用。在临床应用中,丹参在改善乳腺癌患者的临床症状和术后并发症、减轻化疗带来的不良反应等方面有显著疗效。

植物雌激素抗氧化应激损伤的实验研究进展

氧化应激被认为是衰老和疾病的重要原因,因此对抗氧化应激损伤的研究广泛而深入。植物雌激素种类繁多、不良反应较小,具有合成雌激素不可替代的优点。本文按照植物雌激素的化学结构进行分类,阐述了其在抗氧化应激损伤方面的实验研究进展,为深入研究植物雌激素的作用机制和分子路径提供依据,为临床治疗提供理论基础。

四物汤在大鼠脑和骨骼肌组织中发挥雌激素样效应的机制研究

目的探讨四物汤在大鼠脑和骨骼肌组织中发挥雌激素样效应的机制。方法将20只未达性成熟雌性SD大鼠完全随机分为正常对照组、雌激素组、四物汤高剂量组和低剂量组,各5只,适应性喂养4 d后,正常对照组予相等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃,雌激素组予戊酸雌二醇0.104 mg/(kg·d)灌胃,四物汤高剂量组予四物汤2.08 g/(kg·d)灌胃,四物汤低剂量组予四物汤0.52 g/(kg·d)灌胃。每日早晚各灌胃1次,连续4 d。各组大鼠最后一次灌胃后3 h称重,10%水合氯醛腹腔麻醉后腹主动脉快速取血处死。观察大鼠脑及腿部骨骼肌组织细胞形态,采用蛋白质印迹法检测雌激素受体β(ERβ)、G蛋白偶联雌激素受体(GPER)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及蛋白激酶B(Akt)表达情况。结果 4组大鼠脑和骨骼肌组织细胞形态均未出现明显变化。在脑组织中,四物汤低剂量组ERβ表达量显著低于正常对照组和雌激素组[(0.354±0.066)比(0.450±0.022)、(0.509±0.042)];四物汤高剂量组和四物汤低剂量组GPER表达量显著低于雌激素组;四物汤低剂量组PI3K表达量显著低于正常对照组[(0.255±0.086)比(0.404±0.100)];雌激素组和四物汤高剂量组Akt表达量显著低于正常对照组[(0.224±0.049)、(0.268±0.097)比(0.467±0.102)](均P <0.05或P <0.01)。在骨骼肌组织中,雌激素组和四物汤低剂量组ERβ表达量显著低于正常对照组;四物汤低剂量组PI3K表达量显著高于正常对照组和雌激素组,Akt表达量显著低于正常对照组和雌激素组(均P <0.05或P <0.01)。结论四物汤可不同程度抑制脑组织中ERβ、GPER、PI3K、Akt及骨骼肌中ERβ、Akt的表达,促进骨骼肌中PI3K的表达。推断四物汤可能通过ERβ和GPER介导的PI3K/Akt信号通路发挥雌激素样效应。

人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用及其分子机制

目的探究人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用及分子机制。方法选取22~24 d SD的大鼠提取卵巢颗粒细胞进行原代培养,应用顺铂诱导建立卵巢早衰模型。设置正常组,模型组,人参皂苷Rg_(1)低浓度组、中浓度组、高浓度组和雌二醇(E2)组。HE染色及免疫细胞化学法进行颗粒细胞鉴定;CCK8法检测人参皂苷Rg_(1)作用24 h、48 h对顺铂损伤颗粒细胞的保护作用;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blot法检测FSHR、PI3K、p-AKT、AKT、Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果细胞形态观察和胞质FSHR表达检测结果均表明所提取细胞为卵巢颗粒细胞;顺铂处理12 h后,颗粒细胞增殖率呈剂量依赖性下降,而给予人参皂苷Rg_(1)后,细胞增殖率下降被显著抑制,且呈剂量和时间依赖性;与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)和E2处理后卵巢颗粒细胞中FSHR、PI3K、p-AKT/AKT及Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著上升,而PI3K抑制剂干预后,Bcl-2蛋白表达显著下降。结论人参皂苷Rg_(1)对顺铂损伤的卵巢颗粒细胞具有保护作用,该保护作用可能通过激活FSHR/PI3K/AKT通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡实现。

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的:通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法:应用H_(2)O_(2)诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^(-1))组和BBR低剂量(0.5μmol·L^(-1))组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^(-1)H_(2)O_(2),孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BBR对KGN细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、FoxO1、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3BⅡ)、自噬关键分子酵母Atg6(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62蛋白表达的影响。结果:H_(2)O_(2)诱导40 min后,与空白组比较,模型组细胞增殖率显著下降(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞增殖率明显上升(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,与空白组比较,模型组细胞呈现明显的衰老状态(P<0.01),BBR干预组细胞衰老情况较模型组显著降低(P<0.01);流式细胞术检测显示,与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著上升(P<0.01),BBR干预组细胞凋亡率较模型组明显降低(P<0.05);同时,与空白组比较,模型组ROS含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞ROS含量显著降低(P<0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组KGN细胞CAT、Bcl-2/Bax mRNA表达明显降低,Caspase-3与FoxO1 mRNA表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,BBR干预后KGN细胞CAT与Bcl-2/Bax mRNA表达明显增加(P<0.05),Caspase-3与FoxO1 mRNA表达较模型组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组SIRT1、SOD2及p62蛋白水平显著降低(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平明显升高(P<0.05);BBR干预后,SIRT1、SOD2及p62蛋白水平较模型组显著增加(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论:BBR具有抑制卵巢颗粒细胞衰老效应,其机制与通过SIRT1/FoxO1通路介导抑制细胞凋亡与自噬有关。

四物汤在卵巢衰老大鼠骨骼肌中的雌激素样作用机制研究

目的:探讨四物汤通过胰岛素样生长因子-1(Insulin-ike growth factors-1,IGF-1)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)mTOR信号通路发挥对4-乙烯基环己烯二环氧化合物(4-Vinylcyclohexene Diepoxide,VCD)诱导的卵巢衰老大鼠骨骼肌的保护作用及其分子机制。方法:选用28日龄雌性F-344大鼠,随机选取6只作为空白对照组,剩余大鼠连续腹腔注射VCD溶液(160 mg/kg/d)20天,每天阴道涂片检测动情周期,连续观察12d无角化细胞或仅有少量角化细胞即符合"卵巢衰老"表现,经动情周期筛选出24只造模成功的大鼠,分为模型组(Model)、阳性(戊酸雌二醇,E2)对照组、四物汤高剂量(SWT-H)组和四物汤低剂量(SWT-L)组,每组6只,灌胃持续3周后取材。取大鼠骨骼肌组织进行HE染色观察病理组织结构;MASSON染色骨骼肌纤维形态变化;RT-PCR检测骨骼肌组织中各基因的mRNA水平。结果:与空白组比较,模型组骨骼肌肌纤维排列疏松,分布不均且有断点,胞浆不均,细胞核增多,出现增生的结缔组织,胶原纤维逐渐增多且肌纤维间距变宽;与模型组相比,E2组、SWT-H组与SWT-L组肌纤维排列相对整齐,胞浆较为均匀。肌肉形态较规则,纤维间距缩短,胶原纤维减少。RT-PCR结果显示,与空白组相比,模型组IGF-1、PI3K、AKT、mTOR基因的mRNA表达量明显下调,E2组、SWT-H组与SWT-L组的IGF-1、PI3K、mTOR的表达明显上升,SWT-H组AKT表达无明显变化,无统计学意义,SWT-L组AKT表达相对降低。与模型组相比,E2组、SWT-H组与SWT-L组的IGF-1、AKT、mTOR的表达明显增加,且具有剂量依赖性,PI3K表达增加,但无明显剂量依赖性。结论:四物汤可以明显改善VCD诱导的卵巢衰老大鼠的肌肉减少情况,其机制可能是通过IGF-1-PI3K-AKT-mTOR信号通路来发挥其抑制肌肉流失的作用。

基于GPER介导途径探讨隐丹参酮诱导人乳腺癌SKBR-3细胞凋亡的分子机制

基于G蛋白偶联雌激素受体(GPER)及其介导的PI3K/AKT途径探讨隐丹参酮(cryptotanshinone,CPT)诱导人乳腺癌细胞凋亡的效应及其分子机制。选用核ER阴性、GPER阳性人乳腺癌SKBR-3细胞,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测CPT对细胞凋亡率的影响,Western blot法检测CPT对凋亡效应蛋白caspase-3表达的影响;Western blot及免疫荧光技术检测CPT对GPER介导的PI3K/AKT通路上关键蛋白表达的调控效应;同时,为进一步明确GPER介导的PI3K/AKT信号通路在CPT诱导SKBR-3细胞凋亡中的作用,选用GPER特异性激动剂G1、特异性拮抗剂G15及PI3K特异性抑制剂LY294002进行干预。结果显示,5,10μmol·L^-1CPT作用48 h后,SKBR-3细胞的凋亡率上升为46.1%,69.0%(P<0.01),caspase-3表达则随着CPT浓度增加而升高(P<0.01)。PI3K,AKT,p-AKT蛋白表达均可被CPT抑制(P<0.05或P<0.01),G1与5μmol·L^-1CPT联合作用48 h后可见AKT与p-AKT的表达量进一步降低(P<0.05),而G15与5μmol·L^-1CPT联合作用后AKT与p-AKT表达的下降被明显抑制(P<0.05);1μmol·L^-1LY294002干预下,可见AKT,p-AKT的表达受到了更为明显的抑制(P<0.01)。AKT与p-AKT的荧光表达强度同样能够受到CPT抑制,G1,G15,LY294002的干预与Western blot结果一致(P<0.05或P<0.01)。此外,CPT对SKBR-3细胞中GPER表达具有一定的抑制效应(P<0.01),加入G1可相对抑制CPT对GPER表达的下调作用;加入G15可使CPT对GPER表达的抑制作用进一步增强。综上,隐丹参酮可诱导人乳腺癌SKBR-3细胞凋亡,其分子途径可能与隐丹参酮对GPER表达及其介导的PI3K/AKT信号通路的调控作用有关。

基于G蛋白偶联雌激素受体介导的EGFR/PI3K途径探讨四物汤对MC3T3-E1细胞增殖的影响

目的探讨四物汤通过G蛋白偶联雌激素受体(GPER)介导的表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)途径影响小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)的增殖效应及其分子机制。方法将40只SD雌性大鼠随机分为5组:正常组,雌二醇组,四物汤高、中、低剂量组,每组8只。以雌二醇药物血清为阳性对照,用高、中、低剂量四物汤药物血清干预MC3T3-E1细胞,以MTT细胞增殖实验检测各药物血清干预24 h对MC3T3-E1细胞增殖的影响;Western blot及免疫荧光技术检测高剂量四物汤对MC3T3-E1细胞EGFR、PI3K、cyclin B1、cyclin D1蛋白表达情况的影响;并应用GPER激动剂G1、拮抗剂G15,EGFR抑制剂AG1478,PI3K抑制剂LY294002进一步检测高剂量四物汤影响MC3T3-E1细胞增殖的作用途径和分子机制。结果与正常血清组比较,高、中、低剂量四物汤药物血清均能促进MC3T3-E1细胞的增殖(P<0.01),加入G1可使高剂量四物汤促增殖作用提高(P<0.01),而加入G15、AG1478、LY294002使高剂量四物汤的促增殖作用减弱(P<0.01)。Western blot和免疫荧光结果均显示,四物汤药物血清增加MC3T3-E1细胞EGFR、PI3K、cyclin B1、cyclin D1的蛋白表达,与正常血清组比较差异有统计学意义(P<0.01),G1同时干预时上述蛋白表达量较高剂量四物汤增加(P<0.01),分别加入G15、AG1478、LY294002后上述蛋白的表达量较高剂量四物汤组降低(P<0.01或P<0.05)。结论四物汤对小鼠MC3T3-E1细胞增殖有明显的促进作用,其作用机制可能为GPER介导的EGFR/PI3K信号通路的传导。

基于网络药理学结合体内实验研究探讨四物汤的植物雌激素样效应及其分子机制

基于网络药理学结合体内实验研究探讨四物汤靶向生殖系统的植物雌激素样效应及其雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型调节与介导的分子机制。首先利用中药系统药理学技术平台(TCMSP),收集四物汤的活性成分及靶点。通过GeneCards和OMIM数据库收集“雌激素”的相关基因。借助STRING网站和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络及“化学成分-靶点-疾病”网络,筛选核心靶点。利用R软件对核心靶点进行GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析。体内实验选取22 d龄SD雌鼠,四物汤灌胃4 d。HE染色观测子宫形态学变化,RT-PCR方法检测子宫、卵巢ER亚型及其介导的EGFR/MAPK下游传导通路关键调控因子的mRNA表达量。结果显示,四物汤发挥植物雌激素样效应的相关靶点共74个;KEGG通路富集分析表明,其发挥效应的机制与雌激素信号通路密切相关。体内实验结果发现,四物汤组大鼠子宫内膜显著增厚;卵巢组织ERα、ERβ、GPER mRNA表达量均显著下降,子宫组织ERα、ERβmRNA表达量显著下降,GPER mRNA表达量显著上升。卵巢、子宫组织EGFR mRNA表达量均明显增加,p38 MAPK、MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达量均明显减少。该研究通过网络药理学分析及体内实验揭示了四物汤靶向生殖系统发挥雌激素样效应的分子机制,为四物汤妇科疗效机制的全面揭示提供了依据。

基于GPER介导的EGFR/MEK/ERK途径探讨四物汤含药血清促进成骨细胞增殖的分子机制

目的:探究四物汤对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖的影响及其基于G蛋白偶联雌激素受体(GPER)介导的表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥效应的分子机制。方法:将20只雌性SD大鼠随机分为对照组,雌二醇(0.16 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,四物汤高、低剂量(2.08、0.52 g·kg^(-1)·d^(-1))组。灌胃4 d后,经腹主动脉取血,制备含药血清。MTT法检测四物汤含药血清对MC3T3-E1细胞增殖的影响;Western blot法检测四物汤含药血清对MC3T3-E1细胞中EGFR/MEK/ERK信号通路相关蛋白EGFR、MEK、ERK1/2表达的调控作用。为了进一步明确GPER在四物汤影响成骨细胞增殖中的介导作用,在四物汤高剂量组中应用GPER特异性激动剂G1(终浓度1×10^(-8)mol/L)与抑制剂G15(终浓度1×10^(-8)mol/L)进行干预。结果:四物汤含药血清可促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.01)。与对照组比较,四物汤高剂量组可上调MC3T3-E1细胞中EGFR、MEK、ERK1/2蛋白表达水平(P<0.01)。与四物汤高剂量组比较,在加入G1后,上述蛋白表达进一步增高(P<0.01);加入G15干预则会拮抗此效应,即升高的蛋白表达水平将有所下降(P<0.05)。结论:四物汤可以促进MC3T3-E1细胞增殖,该效应可能是通过在GPER的介导下,上调EGFR/MEK/ERK信号通路实现的。

GPER介导的丹参酮ⅡA抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移作用机制研究

目的:基于体外细胞实验,探索丹参酮ⅡA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的抑制作用及其分子机制。方法:选取三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,利用细胞增殖实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞增殖的作用,并筛选适宜的药物浓度;应用划痕实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞迁移率的影响;Western Blot法检测丹参酮ⅡA对G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)及基质金属蛋白酶9(Matrix metalloprotein-9,MMP-9)表达的影响。结果:细胞增殖实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05);划痕实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞迁移,且呈剂量依赖性(P<0.01),加入GPER特异性抑制剂G15后迁移率有所上升(P<0.01)。Western Blot结果显示,丹参酮ⅡA可以显著下调GPER和MMP-9蛋白的表达水平并呈剂量依赖性(P<0.05),加入GPER特异性抑制剂G15后,MMP-9表达有所上升(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可以抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移,其机制可能与抑制GPER介导的MMP-9表达相关。