肾透明细胞癌细胞精氨酸甲基转移酶1表达与上皮-间质转化和免疫细胞浸润的关系

目的观察精氨酸甲基转移酶1(CARM1)在肾透明细胞癌细胞中表达情况,探讨其对上皮-间质转化和免疫细胞浸润的影响。方法对数生长期肾透明细胞癌Caki-1细胞随机分为敲低组(转染CARM1敲低慢病毒)、过表达组(转染CARM1过表达慢病毒)、阴性对照组(转染阴性对照慢病毒)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞CARM1 mRNA相对表达量;转染72 h,采用Western blot法检测3组细胞CARM1、E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白相对表达量,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数。应用Coexpedia数据库筛选肾透明细胞癌组织中与CARM1共表达基因,应用STRING数据库生成蛋白质相互作用网络图,应用京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析CARM1共表达蛋白所涉及的信号通路。采用quanTIseq肿瘤浸润免疫细胞定量分析CARM1基因与肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、混合肾癌、肾嫌色细胞癌中免疫细胞浸润评分的Pearson相关系数,筛选具有显著相关性的肾癌肿瘤免疫细胞;采用TIMER免疫细胞浸润分析CARM1基因表达与不同肾癌肿瘤免疫细胞浸润水平的相关性。结果转染48 h,过表达组细胞CARM1 mRNA相对表达量(3.59±0.27)高于阴性对照组(1.00±0.01)、敲低组(0.43±0.06)(P<0.05),阴性对照组高于敲低组(P<0.05)。转染72 h,过表达组细胞E-cadherin蛋白相对表达量(0.44±0.04)低于阴性对照组(1.00±0.05)、敲低组(2.06±0.10)(P<0.05),CARM1、N-cadherin、vimentin蛋白相对表达量(2.15±0.19、4.44±0.39、2.87±0.23)均高于阴性对照组(1.00±0.07、1.00±0.05、1.00±0.07)、敲低组(0.45±0.08、0.48±0.08、0.45±0.04)(P<0.05);阴性对照组细胞E-cadherin蛋白相对表达量低于敲低组(P<0.05),CARM1、N-cadherin、vimentin蛋白相对表达量均高于敲低组(P<0.05)。转染72 h,过表达组侵袭细胞数[(178±10)个]多于敲低组[(44±4)个]、阴性对照组[(83±4)个](P<0.05),阴性对照组多于敲低组(P<0.05)。Coexpedia数据库筛选出肾透明细胞癌组织中与CARM1基因共表达的前100个基因,构建蛋白质相互作用网络显示CARM1与转录因子FOS、JUN、CREBBP等蛋白相互作用,提示CARM1可能参与下游蛋白的转移翻译。KEGG富集分析结果显示,CARM1共表达基因主要富集于细胞周期、PI3K/Akt信号通路、RNA运输、聚焦黏附等信号通路。quanTIseq肿瘤浸润免疫细胞定量分析结果显示,CARM1在多种肾癌中与中性粒细胞的表达呈正相关。TIMER免疫细胞浸润分析结果显示,肾透明细胞癌中B淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞浸润水平与CARM1表达均呈正相关。结论CARM1通过下调E-cadherin表达,上调N-cadherin、vimentin表达调控肾透明细胞癌细胞上皮-间质转化,促进肾透明细胞癌侵袭;CARM1可能与多种蛋白相互作用,影响细胞生命活动,参与多种肾癌的肿瘤免疫应答。