蜜蜂为油菜授粉增产效果及机理研究

种植赣杂3号油菜,在油菜开花前,把种植的油菜分为自然授粉、蜜蜂授粉和无蜂授粉三个区。然后测定座果率、产量、千粒重、畸形率、发芽率、出油率、油菜籽成分、柱头上花粉含量、花粉活力、花粉管萌发、子房中的RNA含量等指标,并统计授粉昆虫的种类和数量。结果表明:蜜蜂授粉区油菜籽产量比自然授粉区和无蜂授粉区分别提高40.16%和114.98%,实际亩产油量比自然授粉区和无蜂授粉区分别高7.59%和25.12%,并且蜜蜂授粉区的千粒重、发芽率、柱头上的花粉含量、花粉活力、花粉管萌发数量、子房中RNA的含量都是极显著或显著高于自然授粉区和无蜂授粉区;蜜蜂授粉区油菜籽畸形率极显著低于自然授粉区和无蜂授粉区。

人工注射Dnmt3 siRNA对意大利蜜蜂雌蜂发育的影响

为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的意大利蜜蜂幼虫人工注射50ng Ringer,uth siRNA和Dnmt3 siRNA溶液。在幼虫的发育过程中,测定每组幼虫头部的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、前翅长、前翅宽、吻长、第3背板长等形态指标。结果表明:人工注射Dnmt3 siRNA不仅可以显著降低意大利蜜蜂幼虫头部Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量和dynactin p62基因整体甲基化水平,同时显著提高了刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、第3背板长。结果说明Dnmt3的改变可以影响雌性意蜂幼虫的发育。

蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62甲基化影响

【目的】研究蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62甲基化水平影响。【方法】以意大利蜜蜂(Apismellifera ligustica)和中华蜜蜂(A.cerana cerana)1日龄幼虫为试验材料,分别饲喂意大利蜜蜂蜂王浆和中华蜜蜂蜂王浆,并提取每组3日龄和6日龄幼虫样品的基因组DNA,利用Sequenom MassARRAY技术检测dynactinp62甲基化水平。【结果】饲喂异种蜂王浆可以更显著降低雌性蜜蜂幼虫dynactin p62整体甲基化水平;饲喂同一种蜂王浆,均为6日龄幼虫dynactin p62整体甲基化水平显著低于3日龄;2种蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactinp62各位点甲基化水平影响不同。【结论】2种蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62整体甲基化水平和各位点甲基化水平影响不同,这说明不同蜂王浆具有不同的生物学效应。

依托劳动教育提升青少年生命意义感的实践探索

劳动教育具有重要的育人功能,是提升青少年生命价值感的重要途径。中小学深入开展劳动教育,可以提升青少年的责任意识和生命价值感,培养青少年关爱他人的能力和克服困难的勇气。通过加强生命校本劳动课程体系建设,创新多种教学模式,在学校和班级常规管理中落实劳动教育,家校社协同开展劳动教育,完善保障机制等方式,可以在全面提升青少年劳动素养的同时,提升他们的生命价值感。

雌性蜜蜂幼虫发育与dynactin p62基因甲基化

为了研究雌性蜜蜂幼虫发育与dynactin p62基因甲基化的关系,以意大利蜜蜂为实验材料,利用酶标仪、RT-PCR和MassARRAY技术分别测定自然王台和工蜂巢房中2日龄幼虫体内Dnmt3酶活性、Dnmt3mRNA相对表达量、dynactin p62基因甲基化水平,以及人工饲喂工蜂大幼虫食物2天后,两组6日龄幼虫体内Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA相对表达量、dynactin p62基因甲基化水平和刚羽化雌性蜂中工蜂和蜂王过渡型比例。结果表明:两组2日龄幼虫体内Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA相对表达量、dynactin p62基因甲基化总水平都差异不显著,这说明2日龄以内幼虫发育受dynactin p62基因甲基化影响的程度很小;两组6日幼虫体内Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA相对表达量、dynactin p62基因甲基化总水平都存在显著性差异,并且两组幼虫发育成工蜂和蜂王过渡型比例也不相同,这说明6日龄幼虫发育已受到dynactin p62基因甲基化水平影响。本研究进一步证实雌性蜜蜂级型分化与DNA甲基化有密切关系。

婚飞对中华蜜蜂性成熟处女蜂王sRNAs表达的影响

【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)性成熟处女蜂王在婚飞过程中sRNAs表达变化。【方法】以中华蜜蜂性成熟处女蜂王为试验材料,通过控制部分蜂王在一定区域飞行,并利用高通量测序的方法检测并分析中华蜜蜂性成熟处女蜂王飞行和未飞行之间的sRNAs表达差异。【结果】飞行蜂王和未飞行蜂王均含有丰富的sRNAs,主要分布在22 nt和27—29 nt,但各类sRNA在2种状态的蜂王中分布比例不同;2个文库共有总序列数占2个样品总序列数的92.79%,而且飞行蜂王中的sRNAs种类比未飞行蜂王多;与已知miRNA比对分析,发现飞行蜂王和未飞行蜂王有25个极显著差异表达miRNA,其中只有ame-miR-750在飞行蜂王中上调,其它24个极显著差异表达miRNA在飞行蜂王中下调;有19个差异表达miRNA所对应的11个靶基因在飞行蜂王和未飞行蜂王之间存在表达差异。【结论】中华蜜蜂性成熟处女蜂王在婚飞过程中,体内大量sRNAs表达发生了变化,可能为性成熟处女蜂王正常交配起着重要的生理调节作用。

婚飞行为影响中华蜜蜂性成熟处女蜂王的基因表达

婚飞是性成熟处女蜂王与雄蜂交配过程中的一个重要前奏,在该过程中蜂王体内伴随着一系列重要的生理变化。为了探究中华蜜蜂Apis cerana cerana处女蜂王婚飞过程中基因表达变化,本研究利用数字基因表达谱(digital gene expression,DGE)技术分析了中华蜜蜂性成熟处女蜂王飞行与未飞行之间的基因表达差异。经DGE测序,分别从两个样品中获得5.98和6.01百万条Clean标签。通过分析检测到250个基因有差异表达,其中133个基因在飞行蜂王中上调表达,117个基因在飞行蜂王中下调表达。这些差异基因可以归类到348个功能性类别和142个生化途径。结果表明中华蜜蜂性成熟处女蜂王在婚飞过程中大量基因的表达发生了变化。这些结果为进一步研究中华蜜蜂蜂王婚飞过程中生理变化的分子机制提供了重要的基因表达信息。

上海副猪嗜血杆菌分离鉴定及其耐药性分析

本研究旨在调查我国上海副猪嗜血杆菌对临床常用抗菌药的耐药情况,为该病的临床用药与防治提供数据支持。2013-2014年从上海市多个屠宰场采集样品以及送检病料共计484份,采用细菌分离培养及PCR的方法,分离鉴定出62株副猪嗜血杆菌。采用微量琼脂稀释法测定21种临床常用抗菌药的最小抑菌浓度。药物敏感性测定结果表明,所有菌株都对阿奇霉素、替米考星、泰妙菌素、阿米卡星、头孢噻呋和左氧氟沙星敏感,超过90%的菌株对红霉素（60,96.8%）、氟苯尼考（59,95.3%）、氯霉素（60,96.8%）、庆大霉素（60,96.8%）、壮观霉素（61,98.4%）、青霉素（57,91.9%）、氨苄青霉素（57,91.9%）和环丙沙星（61,98.4%）敏感,但对四环素和恩诺沙星耐药率较高,分别为75.8%（47）和30.6%（19）。耐药谱分析显示,37.1%的菌株对两种以上的抗菌药耐受。本研究结果显示上海市副猪嗜血杆菌对临床常用抗菌药物耐药总体状况尚不严重,但针对多个临床常用药物的耐药菌株已经出现,应对其耐药性进行长期监测。

运用德尔菲法构建上市中药企业竞争力评价指标体系

目的构建上市中药企业竞争力评价指标体系,为评价我国上市中药企业竞争力提供有效的技术和手段。方法通过文献研究初步得到指标库,然后采用德尔菲法进行咨询,请20名相关领域资深专家依据各指标重要性打分,筛选上市中药企业竞争力评价指标体系维度及指标池,经过2轮问卷咨询,最终形成指标体系。结果第1、2轮问卷咨询的专家积极系数分别为95%、100%,专家权威程度为0.713 2,专家协调系数分别为0.659、0.639,指标体系最终包含5个1级指标、26个2级指标。结论本次德尔菲法专家积极系数及权威程度均较高,第2轮咨询专家的意见已趋于一致,形成的上市中药企业竞争力评价指标体系结果可信。

呼吸道综合征的猪肺中支气管败血波氏杆菌的分离、鉴定及特性分析

临床上猪呼吸道综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)大多为多种病原微生物共感染所致,支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)为PRDC的常见病原,但其在PRDC发生中的作用还不十分清楚。为了研究Bb在PRDC中的作用,本研究聚焦于PRDC的猪肺中Bb的分离、鉴定及特性分析。首先,利用16S rRNA基因序列对分离的细菌进行鉴定,结果从15头已鉴定为PRDC的猪肺中共获得5株Bb分离菌株。随后,对Bb相关毒力因子包括皮肤坏死毒素(dermonecrotic toxin,DNT)、百日咳杆菌粘附素(bordetellaad hesin,PRN)以及鞭毛蛋白(flagellin,fla B)进行PCR鉴定,结果发现所有分离株上述毒力因子都为阳性。最后,对Bb分离株进行18种抗生素的药敏实验,发现所有分离株对阿莫西林、头孢噻呋、链霉素、氨苄西林等8种药物高度耐药,而对卡那霉素、美罗培南以及庆大霉素高度敏感;此外,部分菌株对红霉素、氟苯尼考、强力霉素以及阿米卡星耐药。总之,本研究从PRDC的猪肺中分离到5株支气管败血波氏杆菌,这些分离株显示出不同的耐药特性,同时,分离株含有的与毒力相关的毒力因子,暗示了其致病特性。

基于《企业绩效评价标准值》的医药全行业绩效评价及预测

科学合理的绩效评价是现代企业发展的基础,对行业的发展能起到促进和引导作用。通过计算医药工业全行业、化药制造业、中药材及中成药制造业三个领域全行业综合绩效发现,2008—2014年,中药材及中成药制造业最优,医药工业全行业次之,化药制造业最低。同时通过灰色关联GM(1,1)模型对医药行业绩效进行预测可知,未来五年医药全行业绩效均呈上升趋势。

康莱特注射液有效性、安全性及经济性评价研究

本文从有效性、安全性及经济性对康莱特注射液进行评价研究。临床研究文献表明,康莱特注射液在治疗非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、腹腔积液、胸腔积液等方面具有显著的疗效,能明显改善患者生命质量;临床应用具有较高的安全性,不良反应发生率低;从总体上看,具有较优的经济性,但仍需进一步开展药物经济学评价研究。

民国时期建筑鸿生火柴厂的加固改造

苏州鸿生火柴厂是民国时期的砖木建筑,其加固改造设计遵循了功能更新、修旧如旧的原则。确定了保留并加固原有外墙,拆除内部原有木结构楼板、梁、柱,并用钢结构框架+BHP组合楼板进行替代的加固改造方案。还介绍了外墙的加固方法与构造、钢框架的结构设计及其与原墙体的连接构造等设计要点。

不良反应损害量化通用指标研究

目的分析总结应用于不良反应损害量化的通用指标,探讨各指标适用性及局限性。方法以CNKI、万方、维普等为数据库,检索自2000年至今相关文献,提炼应用于不良反应损害量化的指标。结果应用于不良反应损害量化的指标共有5种,分别为伤残调整生命年、不良反应严重度指数、风险效益比、最小损害量以及质量调整生命年。结论目前应用于不良反应损害量化的指标皆有其自身局限性及适用领域,应通过多种指标共同评价以提高不良反应损害量化科学性。

工业建筑施工质量通病及防治措施分析

本文旨在分析工业建筑施工质量通病及其防治措施。首先分析了工业建筑施工质量通病的常见问题以及影响因素,然后对工业建筑施工质量通病进行了分类,并详细描述了结构、混凝土和防水三个方面的特点、常见问题以及相应的防治措施,最后提出了针对工业建筑施工质量通病的防治措施,包括质量保证体系建设、技术人员培训和技能提升,以及施工工艺和操作规范的优化与执行。

猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R2>0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。

猪血清淀粉样蛋白3分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

分别根据猪血清淀粉样蛋白3(serum amyloid A3,SAA3)基因序列以及猪三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因全长序列设计特异性扩增引物,进行PCR扩增,并将PCR扩增片段连接至相应载体上构建重组质粒。两个重组质粒经测序鉴定和纯化后,倍比稀释作为标准曲线样品,用于实时荧光定量PCR中SAA3、GAPDH标准曲线的制备,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性检测。结果显示,标准曲线线性关系R2均在0.98以上;特异性检测显示该引物可以特异性检测到猪SAA3、GAPDH扩增曲线;组内和组间变异系数均小于5%,说明本研究成功建立猪SAA3的荧光定量PCR检测方法。运用建立的荧光定量RT-PCR对正常以及感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的肺泡巨噬细胞和猪组织进行检测,可检测到猪SAA3的表达,正常组与接毒组之间显示出明显的表达差异。本研究初步建立了检测猪SAA3基因的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,为后续对猪传染性疾病与猪SAA3之间相互关系的研究提供了一种特异、灵敏的检测方法。

猪清道夫受体SRA/CD204多克隆抗体的制备以及该受体介导的细菌吞噬功能分析

针对猪SRA/CD204胞外区对应的基因片段（614～1324 bp）进行引物设计,PCR扩增获得目的片段并克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒p ET-SRA-c。利用原核表达系统获得高效表达于包涵体中的重组蛋白r SRA-c（约32 k Da）,利用亲和层析技术获得纯化的r SRA-c。利用纯化的r SRA-c为免疫原,免疫Balb/c小鼠（100μg/小鼠）,制备多抗血清。经Western blot结果显示,该多抗血清不仅可以识别r SRA-c,而且可以识别真核表达的全长的猪SRA/CD204（约55 k Da）。免疫荧光分析表明该多抗血清可以清楚地识别表达于CHO细胞膜上的SRA/CD204。最后,利用表达猪SRA/CD204的CHO细胞,对其介导的细菌吞噬功能进行了研究,结果表明猪SRA/CD204可以有效地介导大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的吞噬。本研究为进一步研究猪SRA/CD204在病原微生物感染中的作用奠定了基础。

PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用

基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用。本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体。首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽。通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守。其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上。随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体。最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过10~5;Western blot结果显示,该抗体(1∶2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1∶100)可以检测PRRSV感染的细胞。因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具。

猪谷氧还蛋白I(GLRX1)基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究针对猪GLRX1设计特异性引物,将PCR扩增片段分别连接至T-easy载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,10倍梯度稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中GLRX1标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上;特异性结果表明只能检测到猪GLRX1扩增曲线;组内和组间变异系数均小于5%。本研究初步建立了检测猪GLRX1基因的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,为后续对猪传染性疾病与猪GLRX1之间相互关系的研究提供了一种特异、灵敏的检测方法。