广西部分地区猪链球菌血清型及其毒力因子流行性调查分析

为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY^+MRP^+EPF^+SBP2′^+(13株)、SLY^+MRP^-EPF^-SBP2′^-(5株)、SLY^+MRP^+EPF^-SBP2′^+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。

广西猪源产肠毒素大肠杆菌毒力因子及多重耐药性分析

本研究旨在探究广西某猪场可能存在的病原菌及其致病的主要原因。试验采用细菌分离纯化、形态学鉴定、生长曲线测定、生化分析及药敏试验等进行细菌的分离鉴定,应用PCR技术对菌株16S rRNA、毒力基因及耐药基因进行检测。结果表明,该由病料分离的菌株为无芽孢、有菌毛、两端钝圆的粗短杆状的革兰氏阴性菌,其繁殖能力强、生长迅速,疑似为大肠杆菌。16S rRNA扩增结果显示,出现大小为1 474 bp的条带,测序结果表明其与大肠杆菌的同源性可达99%。该菌株对31种常见抗菌药物表现出极强的耐药性,对庆大霉素、替米考星、四环素、恩诺沙星、青霉素、林可霉素、磺胺甲噁唑等均呈现较高的耐药水平,耐药率高达87.10%(27/32),仅对阿米卡星、黏菌素2种药物敏感。毒力因子检测共鉴定致病岛FyuA、肠毒素STb和LT及黏附素F41和K88共5种毒力因子,检出率为35.70%(5/14)。扩增出β-内酰胺酶类bla_(TEM)和bla_(OXA)、四环素类tet(A)、磺胺类Sul2、氨基糖苷类aadA1和aac(3′)-Ⅱa、喹诺酮类GyrA、GyrB和ParC及氯霉素floR共10种耐药基因,检出率为66.70%(10/15),且耐药基因的检出与耐药表型呈正相关。综上,该菌株含多种毒力因子,耐药型复杂,多重耐药性情况严重,需采取相应的预防措施,防止蔓延和传播。

单株猪红斑丹毒丝菌的生物学特性及耐药性分析

为探究2018年7月广西南宁市武鸣区某规模化肉猪场保育猪急性死亡的病因,本研究通过细菌的分离鉴定、16S rRNA的扩增、生物被膜体外形成条件的测定、毒力基因检测、药物敏感性试验、耐药基因检测等试验方法,对可能存在的病原菌的生物学特性及耐药性进行分析。结果表明:该菌为稍直或弯曲的革兰氏阳性杆菌,且与猪红斑丹毒丝菌在基因上的同源性最高,鉴定为猪红斑丹毒丝菌。该菌株生长迅速,在室温28℃时具有较强的生物被膜体外形成能力;毒力基因检测结果表明含有荚膜多糖CPS-A、黏附素RspA、表面保护性抗原SPaA共3种毒力基因;该菌株耐药性强,耐药率高达68.18%,仅对米诺环素、多西环素、恩诺沙星、氟苯尼考4种药物敏感,并扩增出blaTEM(788 bp)、Sul2(435 bp)两种耐药基因,其耐药表型与耐药基因检出呈现正相关。本研究将为预防猪红斑丹毒丝菌的传播及临床用药提供指导性意见。

刚地弓形虫529 bp重复序列环介导等温扩增检测方法的建立

目的 建立高效检测刚地弓形虫（Toxoplama gondii）的环介导等温扩增（LAMP）方法，为弓形虫病诊断提供新的技术手段。 方法 采用在线引物设计软件Primer Explorer 4.0设计弓形虫529 bp基因LAMP扩增引物，用已构建的pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，建立LAMP扩增反应，通过添加环引物、设置不同浓度的甜菜碱和MgSO4以及不同反应温度对扩增反应体系和反应条件进行优化。以猪、微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）、猪等孢球虫（Isospora suis）的基因组DNA和超纯水为对照，pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的特异性。将pMD-19T-529 bp重组质粒梯度稀释为109~100 copies/ml，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的灵敏性。 结果 设计的LAMP扩增引物可扩增出弓形虫529 bp序列保守区域的目的片段。优化结果显示，最佳反应总体系为25 μl，其中，甜菜碱最佳浓度为0.4 mol/L，MgSO4最佳浓度为6 mmol/L；添加环引物反应30 min的扩增效率与未添加环引物反应60 min的扩增效率相当，可使反应时间缩短30 min；最佳反应条件为63 ℃ 30 min，80 ℃ 3 min。特异性检测结果显示，所建立的LAMP方法可特异扩增弓形虫529 bp基因片段， 对照均未扩增出目的片段。灵敏性检测结果显示，LAMP方法的最低检出值达103 copies/ml，效率为PCR扩增（104 copies/ml）的10倍。 结论 建立了弓形虫529 bp重复序列的LAMP检测方法，该法具有较好的特异性和灵敏性。