不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1mRNA表达量的影响

本试验旨在研究不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1 mRNA表达量的影响。选取36头杜×长×大三元杂交阉公猪,平均体重(55.6±7.0)kg,随机分为3个处理,分别饲喂13%(低蛋白质组)、16%(对照组)和19%(高蛋白质组)的蛋白质水平日粮,每个处理12个重复(单栏饲养)。于饲喂后第45天,每组随机屠宰5头,分离肠道(十二指肠、空肠和回肠),运用Real-Time PCR技术,以β-actin为内参基因,研究CAT1 mRNA相对于β-actin的表达量。结果表明,在饲喂高蛋白质日粮时,与对照组相比,氨基酸转运载体CAT1 mRNA相对于内参β-actin mRNA的表达量,在肥育猪十二指肠、空肠和回肠中分别提高了58.4%、23.2%和24.5%,但差异不显著(P>0.05);而饲喂低蛋白质日粮时,CAT1 mRNA相对表达量在肥育猪十二指肠和空肠中则分别提高93.1%和122.6%,差异显著(P<0.05),而在回肠中降低了14.3%,差异不显著(P>0.05)。高蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达量的影响不大,而低蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达量的影响较大,尤其是对空肠CAT1 mRNA的相对表达量。

藏猪肠道不同部位CAT1、EAAC1和PepT1 mRNA的特异性分布

选取体重接近且健康的28日龄哺乳仔藏猪6头,屠宰后分离肠道(十二指肠、空肠前段、空肠后段和回肠),运用RFQ-PCR技术对藏猪不同肠段小肽转运载体PepT1、酸性氨基酸转运载体EAAC1和碱性氨基酸转运载体CAT1 mRNA的组织分布进行研究。结果表明:空肠后段PepT1 mRNA表达丰度最高,而回肠的表达量最低;从小肠近端到远端EAAC1 mRNA的表达丰度在小肠的表达呈升高趋势,即回肠表达最高,空肠后段次之,但与十二指肠、空肠前段差异不显著(P>0.05);CAT1 mRNA不同肠段表达格局与EAAC1相似,回肠中CAT1 mRNA表达丰度最高,显著高于十二指肠(P<0.05),但空肠前、后段的差异不显著(P>0.05)。

哺乳藏猪肠道CAT1、EAAC1和Pept1 mRNA的发育性表达分析

选取体重接近且健康的哺乳藏猪30头,其中1、7、14、21和28日龄各6头,运用实时定量PCR对Pept1、EAAC1、CAT1 mRNA表达的发育性变化进行研究。结果表明,在十二指肠中藏猪CAT1、Pept1 mRNA表达的发育性变化相似,14日龄时表达丰度最高;EAAC1、CAT1 mRNA在空肠中表达的发育性变化相似,CAT1在21日龄达到最高点,但与其他日龄相比差异不显著;回肠中Pept1与EAAC1 mRNA表达丰度具有相似的发育性变化,7日龄回肠Pept1 mRNA表达量最高,显著高于其他各发育阶段(P<0.05)。

从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体

N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶—氨基甲酰磷酸合成酶I变象异构激活是必需的。N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶I的活性来调节尿素合成。我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒。将重组质粒转化到Ec.oliBL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白。通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa。一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体。通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性。据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS。

美国红鱼生长激素基因的克隆及其遗传进化分析

采用PCR方法从美国红鱼肝脏中扩增出美国红鱼生长激素基因。该基因序列长为1 497 bp,与5个已报道的鲈亚目鱼类生长激素基因结构比较发现,他们的外显子和内含子之比均为6∶5,而且相对应的6个外显子大小一致。用Clustal X软件对美国红鱼和其他13种鲈形目鱼类生长激素基因序列进行比对,选取同源性较高的551 bp的编码区序列构建NJ和MP系统进化树,结果发现由其构建的MP和NJ树与根据形态特征构建的系统发育树基本一致,特别是在鲈形目鱼类科间及科以上分类阶元的系统发育研究方面比较一致。研究结果表明鱼类生长激素基因序列能够较真实反映近缘鱼类之间的关系,是进行鲈形目鱼类系统进化分析的较好遗传标志。

宁乡猪生长激素基因的克隆及其原核表达载体的构建

[目的]研究了宁乡猪生长激素基因(nxGH)的克隆及其原核表达载体的构建。[方法]根据已报道的猪生长激素基因序列设计了1对特异性引物,应用RT"PCR技术从宁乡猪脑垂体中克隆了nxGH编码区序列。[结果]扩增片段全长651 bp,共编码216个氨基酸。该序列与已报道的三元和五指山猪生长激素cDNA基因核苷酸序列同源性为99.85%。将nxGH cDNA序列定向插入pET"32a原核表达载体中,成功构建重组原核表达质粒pET"GH。[结论]为下一步制备宁乡猪生长激素抗体奠定了基础。

氨基酸转运载体LAT1研究进展

哺乳动物氨基酸的跨膜运输由多种氨基酸转运载体蛋白介导,其中L型氨基酸转运载体1(LAT1)属于L系统,主要转运大分子支链氨基酸和芳香族中性氨基酸。研究表明,LAT1广泛存在于哺乳动物肝脏、骨髓、大脑、胎盘、心脏和睾丸组织中,LAT1在恶性肿瘤中大量表达,对其不断的增殖起着重要的作用。目前国内对氨基酸转运载体LAT1的研究仍是空白,鉴于LAT1的研究在医学、营养等生命科学领域的研究意义,本文就氨基酸转运载体蛋白LAT1的表达、调节及其相关研究进展作一综述。

哺乳期藏猪肠道N-乙酰谷氨酸合成酶在哺乳期的表达特性

【目的】探讨藏猪仔猪肠道N-乙酰谷氨酸合成酶(NAGS)在哺乳期的表达变化。【方法】克隆藏仔猪的NAGS基因,并制备其多克隆抗体,分别采用实时定量PCR和Western blotting方法检测1、7、21、28和35日龄的哺乳藏仔猪空肠和回肠中NAGS mRNA的表达水平和蛋白丰度。【结果】7～35日龄藏仔猪空肠与回肠的NAGS mRNA表达水平(P<0.05)和蛋白丰度(P<0.01)均随日龄增长呈线性下降趋势。【结论】哺乳期仔猪的空肠和回肠NAGS mRNA和蛋白表达水平随日龄增长而下降,可能是内源性精氨酸合成减少的一种重要机制。

鱼类碱性氨基酸需求研究进展

蛋白质是构成生命的基础物质，是由氨基酸组成的含氮高分子化合物。饲料蛋白质被鱼体摄食后，必须在鱼消化道中各种消化酶的作用下分解成氨基酸后才能被鱼体吸收利用。因此氨基酸构成决定了蛋白质的质量。已经证明，鱼类的必需氨基酸有赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸和组氨酸10种。不同种鱼要求蛋白质中各种必需氨基酸所占的比例不同，

淮北煤矿废弃地自然定居植物及其对生态系统的影响

对淮北煤矿废弃地上的自然定居植物进行了初步调查和统计,结果显示自然定居植物共有22科45属49种,其中菊科、禾本科和豆科为优势科,可被划分为10种资源植物类型,这些自然定居植物对矿区生态系统的恢复与重建发挥了重要作用。

环江香猪断奶仔猪血液生理生化指标的测定

对环江香猪2月龄断奶仔猪60头(♂30头,♀30头)分别进行血液生理生化指标和血清钙、磷、钠、钾、氯的测定和分析。结果表明,母猪的红细胞总数、红细胞压积、嗜酸性白细胞、β-脂蛋白、尿素氮和碱性磷酸酶显著高于公猪(p<0.05),而淋巴细胞、血清总蛋白和胆碱脂酶显著低于公猪(p<0.05),其他血液生理生化指标和血清钙、磷、钠、钾、氯无明显性别差异(p>0.05)。

环江香猪染色体核型的研究

采用外周血淋巴细胞培养技术,对环江香猪染色体作了核型分析。结果表明,环江香猪正常的二倍体细胞染色体数2n=38,其性染色体为X Y(♂)、X X(♀)。18对常染色体分为A、B、C、D四个形态组,核型呈10sm+4st+10m+12t。染色体为中着丝点染色体,大小介于第9对和第10对染色体之间,Y染色体为最小的中着丝点染色体。

猪营养与营养源

营养对生物性状的表达、生产性能、经济效益有着明显的影响。营养的全部内涵包括营养素、营养源、营养水平和营养组合。营养及营养源的重要性有待深入认识。本文以猪为例,在讨论营养重要性的基础上,总结了近年来本研究室在营养源方面的研究进展,以推动这方面的深入研究。

菌酶协同发酵改善玉米-豆粕型饲料营养价值的研究

本研究从枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和乳酸菌中筛选发酵菌株,在降解饲料抗营养因子的基础上,添加复合酶制剂,探究菌酶协同发酵对一种玉米-豆粕型饲料的营养价值改善效果和仔猪饲喂效果。结果表明:1)枯草芽孢杆菌BS12具有较强的抗原蛋白降解能力,粪肠球菌EF有较强的产酸能力;2)将芽孢杆菌BS12与乳酸菌EF按8:1比例混合,总菌量为1×10~7CFU/g,添加0.50%的复合酶制剂,37℃固态发酵72 h后,饲料中β-伴球蛋白、大豆球蛋白、中性洗涤纤维降解率分别到达80.74%(P<0.05)、86.87%(P<0.05)和39.36%(P<0.05),乳酸含量达到122.57 mmol/kg,pH降低至5.0,饲料粗蛋白体外消化率从78.46%提高(P<0.05)至85.77%,蛋氨酸、苯丙氨酸分别提高(P<0.05)15.15%和17.60%,丙氨酸,半胱氨酸,色氨酸分别提高(P<0.05)了10.11%,10.05%和9.89%;3)使用发酵饲料替代10%的基础日粮后,仔猪平均日增重和采食量得到提高。综上所述,菌酶协同发酵饲料,在提高饲料养分消化率和减少饲用抗生素使用等方面具有良好的应用前景。

生长肥育猪节粮型日粮配方技术研究

试验旨在探讨不同酶制剂对生长肥育猪生产性能的影响,为开发节粮型日粮配方提供依据。选择体质量接近的108头杜×长×大三元杂交猪,平均体质量为(29.47±1.87)kg,随机分为5组,每组3个重复,每重复7头猪。对照组饲喂小麦型基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加酶1、酶2、酶3和酶4,试验期32d。试验结果表明:1)与对照组相比,试验组的日增质量均有不同程度提高,其中试验组2较对照组提高17.64%,差异显著;试验组1、试验组3和试验组4较对照组分别提高13.36%、3.22%和13.12%,但差异不显著;各试验组间日增质量差异不显著。2)与对照组相比,试验组1、试验组2、试验组3和试验组4日采食量分别提高12.67%、13.76%、3.01%和7.39%,但差异不显著。3)酶制剂对料肉比的改善作用不显著。试验结果表明,在玉米-小麦-豆粕型基础日粮中添加不同酶制剂均不同程度提高了生长肥育猪日增质量和饲料转化率,其中试验组2显著提高日增质量。因此,酶制剂的应用在一定程度上提高了饲料利用率,起到节约粮食的目的。