基于多指标权重分析和正交设计法优选糖肾清毒颗粒的提取工艺

目的：确定指标权重,优选糖肾清毒颗粒的提取工艺。方法：以黄芩苷、牛蒡苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、绿原酸、咖啡酸的含量及干膏率为综合评分指标,采用AHP-CRITIC混合加权法计算各指标的权重系数,通过正交实验考察料液比、提取时间和提取次数对提取工艺的影响。结果：AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数科学、合理、稳定,根据综合评分结果,确定该制剂最佳水提工艺为加7倍水,煎煮3次,每次1 h。结论：AHP-CRITIC混合加权法可用来确定多指标的权重系数,优选后的工艺提取率高、稳定性重复性好,适用于该制剂的工业化生产。

HPLC-DAD波长转换法同时测定糖肾清毒颗粒中7种活性成分的含量

目的:建立同时测定糖肾清毒颗粒中7种活性成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为岛津Inert Sustain C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为327 nm(绿原酸和咖啡酸)、280 nm(黄芩苷)、228 nm(牛蒡苷)、276 nm(汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素),柱温为35℃,进样量为10μL。结果:绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、牛蒡苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素检测质量浓度线性范围分别为4.830~154.6μg/m L(r=0.999 8)、0.750~24.1μg/m L(r=0.999 7)、22.859~731.5μg/m L(r=0.999 7)、8.491~271.7μg/m L(r=0.999 3)、2.471~79.0μg/m L(r=0.999 6)、6.656~213.0μg/m L(r=0.999 4)、2.756~88.2μg/m L(r=0.999 8);精密性、稳定性、重复性的RSD<2.0%;加样回收率分别为96.86%~100.82%(RSD=1.46%,n=6)、98.79%~101.09%(RSD=0.93%,n=6)、97.57%~101.51%(RSD=1.37%,n=6)、97.76%~99.63%(RSD=0.77%,n=6)、97.99%~100.12%(RSD=0.76%,n=6)、96.54%~101.07%(RSD=1.87%,n=6)、96.60%~99.59%(RSD=1.14%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于糖肾清毒颗粒中7种活性成分含量的同时测定。

基于标准汤剂指纹图谱分析的糖肾清毒颗粒质量评价

目的:建立糖肾清毒颗粒标准汤剂、中间体、成品的HPLC指纹图谱,研究三者的相关性并进行多成分定量分析。方法:色谱柱为Inert Sustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),采用多波长切换技术,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温35℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)"分别对10批标准汤剂、中间体及成品的指纹图谱进行相似度评价,并将对照图谱与单味药材进行谱峰匹配,确定共有峰归属,通过混合对照品对共有峰进行成分指认并对其进行定量分析。结果:10批标准汤剂、中间体及成品的指纹图谱与各自对照图谱的相似度均大于0.95,标准汤剂标定有21个共有峰,中间体、成品标定有20个共有峰,所有共有峰都能归属到药材。标准汤剂共有峰中,8个来源于黄芩,1个来源于牛蒡子,9个来源于川银花,3个来源于蒲公英,2个来源于豨莶草。通过对照品指认了7个共有峰,分别为绿原酸(3号峰)、咖啡酸(5号峰)、黄芩苷(14号峰)、牛蒡苷(15号峰)、汉黄芩苷(19号峰)、黄芩素(20号峰)和汉黄芩素(21号峰)。标准汤剂、中间体及成品的指纹图谱与对照图谱的相似度较高,相关性良好。不同批次的指标成分含量变化小,成品质量稳定。结论:建立的指纹图谱相似度评价结合多指标成分定量分析的方法可为糖肾清毒颗粒的质量控制与鉴别提供依据。

指纹图谱结合多指标成分定量测定探讨川银花-玄参的不同配液方式的相关性研究

本文采用HPLC法建立川银花-玄参药对的各单煎液、单煎混合液与合煎液的特征指纹图谱,考察不同配液方式的指纹图谱及指标性成分含量的变化。采用岛津Inert Sustain C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,波长210、240、235、236、325、327、280 nm,柱温30℃。分别建立10批川银花和玄参药材各单煎液、单煎混合液及合煎液的指纹图谱,标定共有峰,获得对照指纹图谱;对配伍后指纹图谱的共有峰进行归属分析并通过11种混合对照品测定指标性成分的含量。结果川银花单煎液指纹图谱中以绿原酸为参照峰,确定24个共有峰,玄参单煎液指纹图谱中以哈巴俄苷为参照峰,确定11个共有峰,川银花-玄参药对单煎混合液和合煎液指纹图谱中均以绿原酸为参照峰,均确定了35个共有峰,24个来源于川银花,11个来源于玄参;5、10、15、16、17、22、24、25、26、33、34分别对应哈巴苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、安格洛苷C、异绿原酸A、异绿原酸C、哈巴俄苷、肉桂酸;合煎液总峰面积降低,有10个峰峰面积显著降低,1个峰消失,10个峰峰面积显著升高;单煎混合液总峰面积升高,有2个峰峰面积显著降低,12个峰峰面积显著升高,指标性成分的含量在合煎液中变化较明显,在单煎混合液变化较小。因此得出结论川银花与玄参药材的各单煎液、单煎混合液及合煎液的化学成分种类差异不大,但峰面积大小差异明显,不同的配液方式对活性成分含量影响不同。

银菊解毒口服液的水提工艺研究

目的:对银菊解毒口服液水提工艺进行优化,为该制剂的工业化生产提供参考。方法:通过对银菊解毒方中的绿原酸提取时间-提取率曲线及川银花与方中其他药味配伍合煎后绿原酸的提取率进行考察,确定川银花的煎煮方式及时间;以蒙花苷、哈巴俄苷、(R,S)-告依春、补骨脂素+异补骨脂素含量及干膏率的综合评分为指标,以加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素设计L_9(3~4)正交试验,优化川银花药渣与其余药味的提取工艺并进行验证试验。结果:最优水提工艺为川银花加8倍量水先煎30 min,留存药液;药渣与其余药味加8倍量水煎煮3次,每次1 h;所有药液合并。验证试验中绿原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、(R,S)-告依春、补骨脂素+异补骨脂素含量平均值依次为34.51、10.31、1.97、0.21、9.79 mg/g(RSD分别为1.24%、1.19%、1.40%、1.71%、1.28%,n=3),干膏率平均值为25.4%(RSD=1.64%,n=3),绿原酸平均提取率为78.95%(RSD=1.24%,n=3)。结论:优化的水提工艺中绿原酸的提取率及其他药效成分的含量均较高,且工艺稳定、可行。

多指标正交试验优选化扁汤的提取工艺

目的：优选化扁汤的提取工艺,为该制剂的工业化生产提供参考。方法：以绿原酸、黄芩苷、牛蒡苷和连翘苷的总含量及干膏得率的综合评分为指标,通过L9（34）正交试验考察提取次数、提取时间和加水量对提取效果的影响。采用多波长切换HPLC法同时测定绿原酸、黄芩苷、牛蒡苷和连翘苷的含量,以流动相乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,DAD检测器,检测波长为327 nm（0~37 min,检测绿原酸）,278 nm（37~41.3 min,检测黄芩苷）,228 nm（41.3~50 min,检测连翘苷和牛蒡苷）。流速：1.0 m L·min-1;柱温：35℃。结果：最佳水提工艺为加8倍量水煎煮3次,每次1 h;绿原酸、黄芩苷、牛蒡苷和连翘苷的总提取量为3.50 mg/m L,干膏得率为27.09%。结论：优选的提取工艺稳定,重复性好,可为化扁汤的工业化生产提供参考。

通脉复方多糖大孔树脂纯化工艺研究

目的:筛选适合分离纯化通脉复方多糖的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。方法:以总多糖保留率、蛋白去除率、色素脱色率为评价指标,考察D101、AB-8、S-8、X-5、HPD450五种大孔吸附树脂对通脉复方总多糖的纯化效果;采取单因素实验及正交设计,考察上样量、上样流速、上样浓度、径高比、pH值对纯化效果的影响,确定最佳大孔树脂纯化工艺。结果:优选的纯化工艺为50g·L^(-1)多糖溶液pH值调至5,通过径高比为1∶8的AB-8树脂层进行洗脱,收集洗脱液;上样流速为4BV·h^(-1),上样量为每克树脂(湿重)0.25g多糖,最后用1BVpH=5的蒸馏水洗脱。在此工艺下多糖保留率90.51%,蛋白去除率77.83%,色素脱色率75.62%。结论:该纯化工艺能较好保留多糖,且具有较高蛋白去除率和色素脱色率,可用于大规模生产。

基于“火力火候”探讨川牛膝工业化酒炙工艺量变关系及标准化研究

目的探究川牛膝Cyathulae Radix工业化酒炙工艺与其内外特征、终点药温的量变关系,优选川牛膝最佳酒炙工艺并量化酒炙终点。方法采用外观颜色评分量化外在特征;采用HPLC法测定的15个HPLC特征峰峰质比量化内在特征;采用红外线温度计量化终点药温;采用单因素法探究加酒量、闷润时间、最大炒药量比重、炒制温度、炒制时间、炒筒转速在不同水平下与川牛膝外观颜色、HPLC特征峰、终点药温之间的量变关系。结果最大炒药量比重、炒制温度、炒制时间对内外特征、终点药温有明显影响,加酒量、闷润时间、炒筒转速对内外特征、终点药温无明显影响。优选的酒炙工艺为取最大炒药量比重为40%的川牛膝饮片,加饮片质量10%的黄酒闷润2 h,置控温200℃、转速15 r/min的鼓式炒药机中炒制20 min,倾出晾凉。酒炙终点药温在130~140℃。结论优选的川牛膝酒炙工艺参数明确、合理稳定、易于量化酒炙终点,适合于川牛膝酒炙工业化生产。

银菊解毒口服液指纹图谱结合多指标成分定量测定的质量控制方法研究

目的建立银菊解毒口服液(YJOL)药材原液-半成品-成品的指纹图谱,并进行多成分定量分析,为产品及其生产工艺过程质量控制提供有效方法与依据。方法采用岛津Inert Sustain C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,波长240、327、334、280 nm,柱温30℃。对12批药材原液、半成品、成品进行测定,分别建立相应的HPLC指纹图谱,并对三者间进行全谱的相似度评价及共有图谱拟合,同时对指纹图谱中特征共有峰进行指认及定量分析。结果各批次药材原液(共有峰15个)、半成品(共有峰15个)、成品(共有峰13个)各自相似度均在0.9以上,质量稳定;药材原液与半成品及成品三者间相似度大于0.9,相关性较好;YJOL成品指纹图谱中,1号峰主要来源于板蓝根药材;2~7号峰来源于川银花和野菊花药材;8、9号峰主要来源于野菊花药材;10、11号峰来源于玄参药材;12、13号峰主要来源于补骨脂药材。通过比对特征峰保留时间,指认出6种主要成分,分别为R,S-告依春(1号峰)、绿原酸(3号峰)、蒙花苷(10号峰)、哈巴俄苷(11号峰)、补骨脂素(13号峰)、异补骨脂素(14号峰),6种成分在药材原液中质量分数平均值分别为39.21、15.43、2.14、0.53、7.21、6.51 mg/g,在半成品中质量分数平均值分别为35.31、11.54、1.83、0.37、4.95、4.74 mg/g,在成品中质量分数平均值分别为32.87、10.58、1.72、0.31、4.58、4.48 mg/g。结论同时对YJOL药材原液-半成品-成品进行指纹图谱和6个指标成分分析,可有效地用于YJOL生产过程的质量控制和产品的质量评价。

加味四妙颗粒的药效成分含量测定

目的:建立HPLC-DAD波长切换法同时测定加味四妙颗粒中延胡索乙素、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱、木兰花碱、杯苋甾酮、甘草苷、甘草次酸共7个成分的含量。方法:采用Insert Sustain C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾(B)为流动相,梯度洗脱,DAD检测器,检测波长268 nm(0～22.5 min,检测木兰花碱,67～71 min,检测盐酸小檗碱)、280 nm(22.5～30 min,检测延胡索乙素)、237 nm(30～45 min,检测甘草苷)、247 nm(45～55 min,检测杯苋甾酮,71～85 min,检测甘草次酸)、284 nm(55～67 min,检测盐酸黄柏碱)。结果:各待测组分分离度良好;延胡索乙素、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱、木兰花碱、杯苋甾酮、甘草苷、甘草次酸7个成分的进样质量浓度分别在2.060～51.49μg·mL^(-1)(r=1.000)、3.111～77.77μg·mL^(-1)(r=1.000)、1.813～45.31μg·mL^(-1)(r=1.000)、1.960～49.00μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、2.019～50.48μg·mL^(-1)(r=1.000)、2.468～61.70μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、2.408～60.20μg·mL^(-1)(r=0.999 9)范围内与各自峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为100.6%(RSD=1.6%)、100.3%(RSD=0.4%)、101.0%(RSD=1.3%)、100.7%(RSD=0.8%)、100.1%(RSD=1.9%)、101.6%(RSD=1.3%)、99.8%(RSD=1.7%)。结论:本试验建立的含量测定方法符合方法学验证要求,简便可靠,重现性好,可用于加味四妙颗粒的7个指标性成分的同时测定。

银菊解毒口服液大孔树脂纯化工艺研究

目的在指纹图谱的基础上,联用AHP-CRITIC混合加权法、Plackett-Burman设计(PBD)与Box-Behnken设计(BBD),多目标筛选银菊解毒口服液(YJOL)的纯化工艺。方法采用HPLC法建立YJOL HPLC图谱,以6种指标成分绿原酸、蒙花苷、R,S-告依春、哈巴俄苷、补骨脂素、异补骨脂素的回收率和HPLC图谱相似度为指标,筛选10种大孔树脂中最佳型号。AHP-CRITIC混合加权法赋予6种指标成分的回收率和相似度权重,计算综合指标作为评价标准,运用PBD筛选显著性影响因素,结合BBD优选大孔树脂纯化YJOL的最佳工艺参数。结果 HPD-400型大孔树脂对复方中6个指标成分的富集选择性最高。最佳工艺参数为径高比1∶7,上样pH值3.5,上样质量浓度0.18 g/m L,上样量(药材:树脂)0.96g/g,8 BV的77%乙醇洗脱。纯化后6个指标成分的回收率为78%~98%,HPLC指纹图谱相似度大于0.99,成分均衡回收。模型综合评价预测值为94.28%,实验所得综合评价为93.69%,相对偏差0.59%。结论在HPLC图谱的基础上,联用AHP-CRITIC混合加权法、PBD与BBD筛选YJOL纯化工艺是科学可行的,不仅能提高有效成分的纯度,还能保持化学成分的一致性。

川银花-黄芩药对配伍前后指纹图谱的变化及其多指标成分的定量分析

目的:研究川银花-黄芩药对配伍前后指纹图谱及指标性成分含量的变化,对该药对的临床应用有一定参考意义。方法:采用Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温25℃,进样量10μL,检测波长分别为327 nm(0~27,43~62 min),237 nm(27~33 min),274 nm(33~43,90~120 min)和280 nm(62~90 min);分别建立10批川银花、黄芩单煎液及合煎液的指纹图谱,标定共有峰,获得各自对照指纹图谱。对配伍后指纹图谱的共有峰进行归属分析并通过11种混合对照品测定指标性成分的含量。结果:川银花-黄芩药对的指纹图谱标定26个共有峰,9个来源于川银花,17个来源于黄芩;色谱峰1,2,3,4,13,14,15,18,23,25,26分别对应新绿原酸,绿原酸,隐绿原酸,咖啡酸,异绿原酸B,异绿原酸A,异绿原酸C,黄芩苷,汉黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素;配伍前后峰的数目未发生变化,但指标性成分的含量发生了改变。结论:川银花-黄芩药对配伍前后化学成分种类无差异,但主要有效成分的溶出会相互影响。

基于信息熵理论的正交设计结合指纹图谱优选加味四妙颗粒的提取工艺

目的优选加味四妙颗粒(MSG)的提取工艺。方法采用HPLC测定红景天苷、绿原酸、甘草酸铵、盐酸小檗碱、甘草苷的含量,以此5种指标成分的提取率、干膏收率及指纹图谱相似度为综合评分指标,通过正交试验考察料液比、提取时间和提取次数对提取工艺的影响,采用信息熵赋权法确定各指标的客观权重,实现对提取工艺的正交试验优选。结果根据综合评分结果,确定该制剂最佳提取工艺为加10倍量水,煎煮2次,每次30 min。3批验证综合评分均值为88.91,RSD为0.61%。结论优选后的工艺提取率高、稳定性和重复性好,适用于该制剂的工业化生产。

波长切换HPLC法同时测定水蛭蛴螬化瘀片中10个活性成分的含量

目的:建立多波长切换HPLC法同时测定水蛭蛴螬化瘀片中丹参素钠、丹酚酸B、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、甘草酸铵、延胡索乙素、芍药苷10个成分的含量。方法:采用岛津Insertsustain C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2%醋酸水溶液-甲醇-乙腈为流动相梯度洗脱,DAD检测器,检测波长为280 nm(0~20 min,33~36 min,38.8~42 min检测丹参素钠、延胡索乙素、黄芩苷),230 nm(20~29 min,检测芍药苷),254 nm(29~33 min,检测异鼠李素-3-O-新橙皮苷),252 nm(62~70 min检测甘草酸铵),286 nm(36~38.8 min检测丹酚酸B),274 nm(42~48 min,70~80 min检测汉黄芩苷、汉黄芩素),276 nm(48~62 min,检测黄芩素),流速1.0 mL·min^(-1),柱温为25℃。结果:通过1次进样,同时测定了上述10个成分的含量,丹参素钠、丹酚酸B、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、甘草酸铵、延胡索乙素、芍药苷的进样质量浓度分别在6.32~158μg·mL^(-1)(r=0.999 8)、53.4~1 336μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、1.51~37.8μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、0.888~22.2μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、18.6~465μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、7.92~198μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、2.14~53.6μg·mL^(-1)(r=0.999 8)、3.30~82.6μg·mL^(-1)(r=1.000 0)、1.12~28.0μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、38.5~962μg·mL^(-1)(r=0.999 9)与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为97.0%(RSD=1.6%)、99.1%(RSD=1.4%)、99.0%(RSD=1.4%)、98.1%(RSD=1.6%)、99.2%(RSD=0.98%)、100.2%(RSD=1.8%)、98.7%(RSD=2.6%)、100.4%(RSD=1.7%)、100.2%(RSD=3.0%)、100.5%(RSD=2.2%);3批中试样品中上述10个成分含量测定结果依次为2.112~2.119 mg·g^(-1)、15.642~15.648 mg·g^(-1)、1.558~1.568 mg·g^(-1)、0.553~0.568 mg·g^(-1)、16.515~16.527 mg·g^(-1)、4.412~4.423 mg·g^(-1)、0.554~0.569 mg·g^(-1)、3.353~3.368 mg·g^(-1)、0.192~0.201 mg·g^(-1)、8.749~8.761 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于水蛭蛴螬化瘀片的质量控制,为其质量标准的建立奠定了基础。