岭南山竹子提取物oblongifolins A的体外抗炎作用及机制研究

目的研究岭南山竹子提取物oblongifolins A(OA)的体外抗炎作用及机制。方法以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为对照组(0.5%二甲基亚砜),脂多糖(LPS)组(1μg/mL),地塞米松(DEX)组(10μmol/L DEX+1μg/mL LPS),OA低、中、高浓度组(7.5、15、30μmol/L OA+1μg/mL LPS)。除对照组外,其余各组细胞先用LPS刺激1 h后,再与药物混合培养24 h。观察各组细胞形态变化,检测各组细胞中一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-4和IL-10含量,TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平,核因子κB(NF-κB)和核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)通路相关蛋白的表达水平以及对照组、LPS组、OA高浓度组细胞中NF-κB p65和Nrf2蛋白的核易位情况。结果与LPS组比较,OA各浓度组纺锤形和不规则细胞逐渐减少,细胞中NO、ROS(OA低浓度组除外)、TNF-α、IL-6、IL-1β含量,TNF-α、IL-6(OA低浓度组除外)、IL-1βmRNA表达水平,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);IL-4、IL-10含量,IκBα、Nrf2(OA低、中浓度组除外)、血红素加氧酶1(HO-1)(OA低浓度组除外)、醌NADH脱氢酶1(NQO1)蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);高浓度OA可抑制NF-κB p65蛋白核易位,促进Nrf2蛋白核易位。结论OA能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,其作用机制可能与抑制NF-κB通路、激活Nrf2通路、减少ROS和炎症因子的过度释放有关。

用硫酸鱼精蛋白去除Vero细胞乙型脑炎疫苗中残余DNA

通过试验研究建立一种去除Vero细胞乙脑疫苗中残余细胞DNA的方法，即疫苗经超滤浓缩后加入0.8～1.0mg／ml的硫酸色精蛋白，于4℃静置2h，8000r／min离心5min。DNA与鱼精蛋白共同沉于管底。用该法处理的疫苗不仅使残余DNA达到规程要求（＜100pg／剂量），而且抗原活性无明显丢失。

应用光敏生物素探针检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA

用国产光敏生物素,标记Veto细胞全DNA,通过与疫苗中同源DNA的狭缝杂交,检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA含量。检测灵敏度可达1pg。探针稳定长达一年。杂交反应特:异性高,结果重复性好。与同位素探针相比,生物素标记探针简便、经济、快速、稳定。由本法测得,Vero细胞乙脑粗制疫苗中,含DNA为200～400pg/0.5ml;超滤浓缩苗为4×10~4～6×10~6pg/0.5ml;通过柱层析和沉淀法提纯的疫苗则分别低于60pg/0.5ml和1pg/0.5ml。本法同样适用于传代细胞制备的其它生物制品中细胞残余DNA的检测。

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。

感染复数对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响

目的观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响。方法分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果病毒感染Vero细胞后48h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达莞。Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)lgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)lgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现在接种后48～96h,3组MOI病毒最高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)lgCCID50/ml。结论不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MO(I0.001)制备疫苗。

流行性乙型脑炎病毒在Vero细胞上传代适应的研究

通过乙脑病毒Ｐ＿３株以不同方式在鼠脑和Ｖｃｒｏ细胞间传代适应的研究，培育出适于工业化大生产制备乙脑疫苗的生产毒种。其毒力可达７．０±０．５ｌｇＬＤ５０／０．０４ｍｌ，空斑滴度为７．５±０．５ＰＦＵ／ｍｌ，免疫原性ＩＤ５０值为０．００００１６－０．００００２３ｍｌ；在含有适量人白蛋白的１９９营养液内，该毒种于－３０℃至少可稳定一年；与鼠脑组织毒种相比，传代细胞毒种的毒力、免疫原性及稳定性均与其相当。然而，后者不含脑组织，至少降低了一种过敏的危险。另外，细胞毒种的制备无需手工解剖鼠脑，易于控制外源因子污染，易于标准化。对于大规模生产疫苗、提高疫苗产量和质量，传代细胞毒种比鼠脑组织悬液毒种具有明显的优点。

婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答

应用蚀斑减少中和试验法，测定乙脑流行区婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答，4～17个月龄婴幼儿在免疫前中和抗体阳性率为2．4％，两针基础免疫后阳性率为57.23％；1年后加强注射1针阳性率为95－95％；1岁基础免疫两针，2、4岁分别加强1针，6岁时抗体阳性率为70．59％，再加强注射1针为94．12％；1岁基础免疫两针，2、4和6岁分别加强注射1针·到10岁时抗体阳性率为96·67％，再加强注射1针上升为100％。作者认为乙脑灭活疫苗基础免疫应注射3针，2～3岁和6岁时再分别加强注射1针，小学阶段可不再加强注射。

蔗糖垫超速离心法提纯乙型脑炎疫苗

经Vero细胞培养的P3株乙脑灭活病毒，以超滤浓缩和硫酸色精蛋白处理后，40％蔗糖垫层在27500r／min离心6小时，收集沉淀制成提纯乙脑疫苗。其蛋白含量在0．012～0.035mg／ml，稀释8倍后其疫苗效价仍能超过日本提纯鼠脑乙脑疫苗参考标准和我国乙脑疫苗参考标准。Vero细胞残余DNA＜100pg／0．5ml，残余牛血清＜1μg／ml。

应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。

应用微载体Vero细胞制备流行性乙型脑炎灭活疫苗最适条件的研究

应用微载体培养Vero细胞研究制备流行性乙型脑炎(简称乙脑)灭活疫苗的最适条件,包括微载体的选择和细胞培养以及细胞日龄、细胞密度、毒种浓度、病毒维持液pH、种毒方式等。并按初步选择的最适条件试生产疫苗,其病毒滴度达log7.33～8.09pfu/ml,其效力(ID_(50))为0.000017～0.000063毫升,均高于现行地鼠肾细胞培养疫苗的水平。

SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察

观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。

水运高桩码头混凝土面层裂缝原因及治理措施探讨

文章在对高桩码头混凝土面层裂缝类型进行简单概述的基础上,分析研究了高桩码头混凝土面层裂缝产生的主要原因及综合防治措施。

流行性腮腺炎减毒活疫苗生产工艺的改进

通过试验研究和生产实践 ,将腮腺炎减毒活疫苗生产工艺中细胞长成单层后接种病毒 ,改为细胞和病毒同时接种 ;收获病毒前置 4℃冷释放改为不释放 ,直接收获病毒 ;一批细胞收获一次病毒改为多次收获病毒 ;克氏瓶静置培养改为 15L瓶旋转培养等 ,使疫苗生产周期由 8d缩短为 6d ;生产工序由 6道减少为 4道 ,从而降低了染菌率和生产成本 ,稳定了质量 。

加强高校学生党支部建设——“抓党建、促三风、建三高”之基础

学生党支部建设作为高校党建工作的基础部分,具有十分重要的意义和作用。要切实加强高校党建,促进"三风"和创建"三高",就必须从学生党支部建设抓起,充分发挥高校学生党支部建设对高校党建的基础性作用,充分发挥高校学生党支部建设对学风教风校风建设的带动性作用,从而推动高等教育质量的总体性提高。

围海造地的地基处理方案探讨

随着我国经济的发展和人口数量的激增,陆地资源的匮乏显得越来越明显,围海造地也因此得到了前所未有的重视,但是围海造地的地基属于软弱地基,如果做特殊的加固处理便进行工程建设,就会出现严重的安全事故。通过分析围海造地的地基特点,介绍了排水固结法、强夯法、挤密法、置换法、注浆加固法、加筋法等各种软基加固处理方法,并深入对比分析了各种方法的优缺点及适用范围,对于丰富围海造地的地基处理方案,保证建筑工程的安全具有重要的理论和实际意义。

应用柱层析法纯化Vero细胞乙型脑炎疫苗

浓缩Vero细胞乙脑疫苗经SepharoseCL－6B柱层析可去除大部分杂蛋白，再经SphacrylS－500HR层析可进一步去除比病毒大的杂质及残余小分子量杂蛋白。经两步凝胶过滤层析纯化后，疫苗总蛋白含量减少约99％，抗原比活性提高87～165倍，抗原回收率达30％～50％，残余牛血清和残余细胞DNA均符合WHO有关规程要求，提纯疫苗的效力达到或超过中国地鼠肾灭活乙脑疫苗和日本提纯鼠脑拔苗的参考苗。

可生物降解聚合物微球在疫苗研究中的应用

可生物降解聚合物微球疫苗是近年来研制新剂型疫苗的一大热点,具有黏膜佐剂效应和控释载体效应。本文就微球疫苗的控释载体效应、佐剂效应和微球在疫苗类型及免疫途径方面的研究进展进行综述。

斜坡式防波堤应用研究

斜坡式防波堤由于施工简单方便,易于维修养护,而且消散波浪性能较好,因此,成为海港防波堤工程中最常用的结构形式之一。本文首先概述了斜坡式防波堤,进而对斜坡式防波堤的结构形式以及断面设计作了详细介绍,最后提出了防波堤的施工管理注意事项,对于斜坡式防波堤更好的应用研究具有重要的意义。

浅谈吹填淤泥地基的加固处理

吹填淤泥形成陆地是当前围海造陆的一种趋势,根据其具体的使用功能要求的不同,必须对吹填淤泥进行合理的加固处理。对吹填淤泥预压排水后,采用强夯法等方法来进行加固。

论柯亨权利与权力的关系

分析的马克思主义学派的创立者柯亨运用分析哲学的方法对马克思的历史唯物主义作了精心辩护,他通过分析与生产关系密切联系的权利与权力的关系,揭示了资本主义生产关系压制无产阶级权力的实质,唤起无产阶级的反抗精神,使他们团结起来争取自己的权利和权力,从而实现建立公正平等的社会主义社会的理想。